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pSV-VEGF165肌内原位注射促进兔缺血后肢侧支血管形成 被引量:2
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作者 赵意平 施娅雪 +3 位作者 张皓 张柏根 何天源 陈诗书 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期210-212,共3页
目的 为临床探索一种更简便安全的下肢动脉缺血性疾病的基因治疗途径。方法 建立兔后肢缺血动物模型 ,将体外构建的重组质粒 pSV VEGF16 5注射于缺血肌群 ,30d后行动脉造影并切取标本 ,测定毛细血管密度和毛细血管 /肌肉数比值。结果... 目的 为临床探索一种更简便安全的下肢动脉缺血性疾病的基因治疗途径。方法 建立兔后肢缺血动物模型 ,将体外构建的重组质粒 pSV VEGF16 5注射于缺血肌群 ,30d后行动脉造影并切取标本 ,测定毛细血管密度和毛细血管 /肌肉数比值。结果 经 pSV VEGF16 5治疗后 ,缺血肢体毛细血管密度和毛细血管 /肌肉数比值显著增加 ,小腿部位比大腿部位增加明显 ;动脉造影显示部分缺血肢体侧支动脉明显增多。结论 肌肉内原位注射 pSV VEGF16 5是一种简单有效的治疗基因转染途径 ,能显著增加缺血肢体侧支血管形成。 展开更多
关键词 重组重粒 psv-vegf165 基因治疗 动脉闭塞性疾病
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血管内皮生长因子165/骨形态发生蛋白改善缺氧复氧状态下成骨细胞损伤
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作者 赵伊婷 张裕祥 +1 位作者 马洁 何雪娇 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2024年第35期5669-5674,共6页
背景:研究发现,血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白两种因子在缺氧复氧过程中相互作用,通过调节细胞内信号通路的活化,参与骨细胞损伤的修复过程。目的:进一步探究血管内皮生长因子165/骨形态发生蛋白与缺氧复氧成骨细胞损伤的关系分... 背景:研究发现,血管内皮生长因子165和骨形态发生蛋白两种因子在缺氧复氧过程中相互作用,通过调节细胞内信号通路的活化,参与骨细胞损伤的修复过程。目的:进一步探究血管内皮生长因子165/骨形态发生蛋白与缺氧复氧成骨细胞损伤的关系分析。方法:取成骨细胞,建立缺氧复氧损伤模型,建模前后Real-Time PCR法和免疫印迹法检测血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白2的mRNA及蛋白表达。分别给予建模后成骨细胞不同质量浓度(10,20,40ng/mL)血管内皮生长因子165或骨形态发生蛋白2处理12,24,36,48,72 h,CCK-8法检测细胞增殖,DAPI检测细胞凋亡。结果与结论:(1)与建模前相比,建模后成骨细胞中血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白2的mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);(2)成骨细胞增殖率随着血管内皮生长因子165质量浓度的升高而明显升高(P<0.05);成骨细胞凋亡率随着血管内皮生长因子165质量浓度的升高而明显降低(P<0.05);(3)成骨细胞增殖率随着骨形态发生蛋白2质量浓度的升高而明显升高(P<0.05);成骨细胞凋亡率随着骨形态发生蛋白质量浓度的升高而明显降低(P<0.05);(4)结果表明,血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白在缺氧复氧成骨细胞损伤中低表达,给予血管内皮生长因子165、骨形态发生蛋白处理后缺氧复氧成骨细胞损伤明显降低,且呈浓度依赖性,提示血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白对缺氧复氧成骨细胞损伤有明显保护作用。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子165 骨形态发生蛋白2 缺氧复氧 成骨细胞 细胞凋亡
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骨髓CD11b^(+)巨噬细胞分泌VEGF-A165b抑制老年小鼠新血管形成的作用机制
3
作者 张文晨 刘元值 +2 位作者 孙文静 成宪武 赵光贤 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2024年第1期89-96,共8页
目的探讨老年小鼠缺血组织中骨髓(BM)源性CD11b^(+)巨噬细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)-A165b抑制老年小鼠新血管形成的作用机制。方法制备8周龄小鼠(对照组)和>72周龄小鼠(观察组)后肢缺血模型,每组6只,分别于术前、术后第0、4、7... 目的探讨老年小鼠缺血组织中骨髓(BM)源性CD11b^(+)巨噬细胞分泌血管内皮生长因子(VEGF)-A165b抑制老年小鼠新血管形成的作用机制。方法制备8周龄小鼠(对照组)和>72周龄小鼠(观察组)后肢缺血模型,每组6只,分别于术前、术后第0、4、7、14天用激光散斑血流成像(LSBFI)评估血流恢复状态。采用免疫组织化学染色方法于术后第4天,对巨噬细胞(Mac-3)进行染色,计算巨噬细胞数量,于第14天对CD31+巨噬细胞进行染色检测两组缺血后肢肌肉中毛细血管密度。采用Western印迹,于术后第4天检测两组缺血肌肉组织中VEGF-A、丝氨酸精氨酸蛋白剪接因子(SC35)、Wnt5a蛋白表达水平。采用实时荧光聚合酶链反应(RT-qPCR)于术后第4天检测两组缺血肌肉组织中BM源性CD11b^(+)巨噬细胞裂解物及缺血肌肉中VEGF-A165b、Wnt5a mRNA水平。采用含有观察组BM源性CD11b^(+)巨噬细胞的特殊培养液在缺氧条件下培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)24 h,计算每个板口的6个区域中出芽数量和长度评估CD11b^(+)巨噬细胞分泌的VEGF对血管生成的影响。结果LSBFI显示,观察组后肢缺血呈现低灌注信号(深蓝色),而对照组呈现高灌注信号(红色)。与对照组相比,观察组缺血后肢肌肉中毛细血管密度明显降低(P<0.05)。与对照组相比,观察组缺血肌肉组织中VEGF-A、SC35、Wnt5a蛋白表达水平明显升高,观察组BM源性CD11b^(+)巨噬细胞中及缺血肌肉组织中VEGF-A165b、Wnt5a mRNA表达水平明显升高(P<0.05)。HUVEC芽的数量和长度,与不含有观察组小鼠BM源性的CD11b^(+)巨噬细胞的培养液相比,其生长明显受到抑制(P<0.05)。结论衰老可通过VEGF-A165b机制损害缺氧组织的新血管形成,其机制可能由Wnt5a-SC35信号通路介导。 展开更多
关键词 衰老 血管生成 血管内皮生长A 血管内皮生长A165b WNT5A
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支架携带pSV-VEGF_(165)基因促进内皮修复的实验研究
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作者 施娅雪 王振峰 +1 位作者 张皓 张柏根 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2003年第4期297-300,共4页
目的评估通过支架向兔颈动脉壁转染pSV -VEGF165基因促进内皮修复的疗效。 方法采用自制支架导送系统 ,由生物凝胶介导 ,将携带质粒 pSV -VEGF165的支架植入兔一侧颈动脉段 ,对侧植入携带质粒 pSV - β- gal的支架作对照。通过RT -PCR... 目的评估通过支架向兔颈动脉壁转染pSV -VEGF165基因促进内皮修复的疗效。 方法采用自制支架导送系统 ,由生物凝胶介导 ,将携带质粒 pSV -VEGF165的支架植入兔一侧颈动脉段 ,对侧植入携带质粒 pSV - β- gal的支架作对照。通过RT -PCR、免疫组化染色及扫描电镜 ,观察局部动脉壁外源VEGF基因、蛋白的表达及内皮修复情况。 结果RT -PCR检测证实 ,支架植入术后 1d ,VEGF基因转染动脉段有VEGFmRNA的表达 ;7d表达达高峰。免疫组化染色显示 ,术后 3d外源VEGF蛋白表达 ,表达时间延迟于基因表达 ,但表达趋势与基因表达一致。扫描电镜显示 ,治疗组内皮完全修复时间提前至术后 1月。 结论采用支架携带基因的方法能成功将 pSV -VEGF165基因转移至血管壁 ,血管壁细胞能摄取基因 ,并表达具有生物学功能的蛋白质 ,促进内皮修复。 展开更多
关键词 血管内支架植入术 再狭窄 psv-vegf165基因 内皮修复 血管内皮细胞生长因子
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非洲猪瘟病毒C129R蛋白与E165R蛋白的可溶性表达、胞外酶活力测定与结构预测分析
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作者 王彦伟 岳亚男 +5 位作者 张素玲 李欢欢 陈赵媛 刘月月 逄文强 田克恭 《畜牧与兽医》 CAS 北大核心 2024年第7期52-57,共6页
C129R和E165R分别是非洲猪瘟病毒(ASFV)基因组编码的一种Mn依赖的超氧化物歧化酶和尿嘧啶脱氧核糖核苷三磷酸酶,2种酶均参与ASFV的复制过程。通过研究ASFV C129R蛋白与E165R蛋白的功能,以指导非洲猪瘟的诊断及免疫预防研究。对ASFV SY-1... C129R和E165R分别是非洲猪瘟病毒(ASFV)基因组编码的一种Mn依赖的超氧化物歧化酶和尿嘧啶脱氧核糖核苷三磷酸酶,2种酶均参与ASFV的复制过程。通过研究ASFV C129R蛋白与E165R蛋白的功能,以指导非洲猪瘟的诊断及免疫预防研究。对ASFV SY-18株的C129R和E165R基因序列进行密码子优化后,利用大肠杆菌进行表达,纯化后获得重组蛋白,通过Western blot鉴定其反应性,并对其胞外酶活力进行测定,对C129R蛋白的结构预测结果进行分析。结果:实现了C129R蛋白与E165R蛋白的可溶性表达,重组蛋白分子量分别约为15 kDa和18 kDa, Western blot显示C129R与E165R蛋白均能与ASFV阳性血清产生特异性反应;胞外酶活力测定显示,C129R与E165R蛋白在胞外均有酶学活性,比酶活力分别为(60.2±3.8) U/mg和(32.6±2.4) U/mg;蛋白质结构预测结果显示,C129R为双结构域蛋白,主要由N端α螺旋结构域和C末端α/β结构域组成,C129R蛋白N端α螺旋结构域和C末端α/β结构域的交界处可能是其主要活性位点,序列保守的β-折叠桶(K_(32)~A_(101))可能在其发挥功能时起重要作用。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 C129R蛋白 E165R蛋白 可溶性表达 酶学活性 结构预测
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E3泛素连接酶RNF165在A亚群禽白血病病毒复制中的作用 被引量:1
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作者 王兴明 王后坤 +3 位作者 陈雪阳 方春 梁雄燕 杨玉莹 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期3781-3789,共9页
【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时... 【目的】探明鸡源环指蛋白165(ring finger protein 165,RNF165)在A亚群禽白血病病毒(ALV-A)复制中的作用,为进一步研究鸡源RNF165对ALV-A致病性的影响提供参考。【方法】将ALV-A接种于DF-1细胞和1日龄雏鸡,通过Western blotting和实时荧光定量PCR方法分别从体外和体内两个方面验证ALV-A对宿主RNF165表达的影响;参考已公布的RNF165基因序列设计过表达引物,通过PCR扩增RNF165基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1;将验证表达的重组质粒转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,使用Western blotting检测过表达RNF165对病毒复制的影响;最后设计突变引物,构建RNF165功能结构域突变质粒,将过表达质粒和突变质粒分别转染DF-1细胞,1 d后接种ALV-A,Western blotting测定gp85蛋白表达差异。【结果】ALV-A感染DF-1细胞后未能检测到内源性的RNF165蛋白,但基因转录水平较对照组明显下调(P<0.01)。在体内试验中,与对照组相比,感染病毒雏鸡肝脏中RNF165基因和蛋白表达水平均有所下调(P<0.01);通过PCR成功扩增到大小为1068 bp的目的片段并成功克隆至pcDNA3.1,Western blotting结果显示,在39 ku处出现目的条带,RNF165过表达后促进了病毒复制;测序结果显示,成功构建出功能结构域突变质粒,与过表达质粒组相比,RNF165突变质粒组病毒的复制水平受到显著抑制。【结论】ALV-A感染抑制DF-1细胞和雏鸡肝脏RNF165的表达,在体外试验中,过表达RNF165会促进ALV-A的复制,且这种影响与其保守结构域有关。 展开更多
关键词 环指蛋白165 A亚群禽白血病病毒(ALV-A) 病毒复制 功能结构域突变
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稳定表达非洲猪瘟病毒E165R蛋白PK15细胞系的构建 被引量:2
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作者 刘文豪 朱彦策 +2 位作者 张冬萱 王智豪 张超 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期2662-2666,共5页
旨在构建稳定表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)E165R蛋白的PK 15细胞系。ASFV E165R基因经PCR扩增连接到p3×FLAG-CMV-10载体,再由同源重组连接克隆到慢病毒载体得到重组质粒V2-FLAG-E165R。在HEK 293T细胞中进行... 旨在构建稳定表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)E165R蛋白的PK 15细胞系。ASFV E165R基因经PCR扩增连接到p3×FLAG-CMV-10载体,再由同源重组连接克隆到慢病毒载体得到重组质粒V2-FLAG-E165R。在HEK 293T细胞中进行慢病毒包装得到慢病毒颗粒并转导至PK 15细胞中,经嘌呤霉素初筛得到的多克隆细胞,接着以终点稀释法筛选获得稳定表达E165R蛋白的单克隆PK 15细胞系。通过PCR扩增、Western blot和间接免疫荧光鉴定构建的PK 15细胞系,进一步利用RT-qPCR技术检测NF-κB及炎症相关基因P65、IKBa、IL-6、IL-8和TNF-α的mRNA表达水平。结果表明,稳定过表达ASFV E165R蛋白的PK 15稳定细胞系构建成功,与对照细胞系相比,E165R蛋白显著增强NF-κB以及炎症相关基因IL-6、IL-8和TNF-α的基因表达。本结果为后续研究ASFV E165R对先天免疫信号通路的影响提供生物材料。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 E165R蛋白 细胞系 NF-ΚB
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基于E165R基因非洲猪瘟LAMP快速检测方法的建立 被引量:1
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作者 林涛 陈珺煜 +3 位作者 王成龙 李芹 张怀东 刘峰 《贵州农业科学》 CAS 2023年第3期82-88,共7页
【目的】建立特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)快速检测方法,为非洲猪瘟的实时实地快速检测提供参考。【方法】通过对非洲猪瘟病毒多种... 【目的】建立特异性好、灵敏度高的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)环介导等温扩增(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)快速检测方法,为非洲猪瘟的实时实地快速检测提供参考。【方法】通过对非洲猪瘟病毒多种基因型66个毒株的E165R基因多序列比对,选取相对保守区域设计LAMP引物,并对反应条件及反应体系进行优化。在获得的最优反应条件及体系下考察方法的检测特异性和灵敏性。【结果】选取的LAMP检测靶标235 bp(29~264 bp)在不同基因型ASFV毒株中保守性较好,序列相似度达94.46%~100%;LAMP反应的最佳温度为64℃、时间为35 min、Mg 2+浓度为8 mmol/L、内外引物比为8︰1、Bst DNA聚合酶量为16 U。建立的ASFV环介导等温扩增检测方法最低检测限为50 copies/μL,较常规PCR检测提高1个数量级,且35 min即可完成扩增反应。LAMP检测方法与猪圆环病毒2型(PCV2)、伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)4种临床症状类似的猪病毒感染性疫病没有交叉反应。【结论】基于该新检测靶点的ASFV LAMP检测具有良好的特异性,可成功区分与ASFV感染临床症状相似的猪感染性疾病,且灵敏度优于常规PCR检测方法,方法简单、检测成本低,可实现ASFV的特异、灵敏、快速检测。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 E165R基因 环介导等温扩增 快速检测 特异性 灵敏性
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超高强度套管TP165V开发及蠕变应力分析 被引量:2
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作者 张旭 李苏 +2 位作者 王恩越 朱钜鹏 安盛岳 《钢管》 CAS 2023年第2期9-15,共7页
针对蠕变地层用套管套损问题,设计开发一种新型超高强度套管,套管钢级达到165 ksi,横向冲击值不低于55 J,纵向冲击值不低于70 J,套管抗挤毁强度超过182 MPa。采用有限元方法分析套管受到的蠕变应力和弹性应力。试验表明套管极限抗挤毁... 针对蠕变地层用套管套损问题,设计开发一种新型超高强度套管,套管钢级达到165 ksi,横向冲击值不低于55 J,纵向冲击值不低于70 J,套管抗挤毁强度超过182 MPa。采用有限元方法分析套管受到的蠕变应力和弹性应力。试验表明套管极限抗挤毁强度超过200 MPa;以中原油田产层最大地应力约50 MPa为例,套管实际抗挤毁强度达到最大地层压力4倍。研究发现套管弹性应力和蠕变应力随着两向地应力差异增加而增加,且蠕变应力增加幅度高于弹性应力;当盐膏层被溶解产生孔洞后,胶结面处应力先增加后减小,最后趋于稳定。 展开更多
关键词 套管 超高强度 TP165V 蠕变应力 弹性应力 挤毁
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Mutations in the miRNA165/166 binding site of the HB2 gene result in pleiotropic effects on morphological traits in wheat 被引量:1
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作者 Dengji Jiang Lei Hua +13 位作者 Chaozhong Zhang Hongna Li Zheng Wang Jian Li Guiping Wang Rui Song Tao Shen Hongyu Li Shengsheng Bai Yanna Liu Jian Wang Hao Li Jorge Dubcovsky Shisheng Chen 《The Crop Journal》 SCIE CSCD 2023年第1期9-20,共12页
Leaf,spike,stem,and root morphologies are key factors that determine crop growth,development,and productivity.Multiple genes that control these morphological traits have been identified in Arabidopsis,rice,maize,and o... Leaf,spike,stem,and root morphologies are key factors that determine crop growth,development,and productivity.Multiple genes that control these morphological traits have been identified in Arabidopsis,rice,maize,and other plant species.However,little is known about the genomic regions and genes associated with morphological traits in wheat.Here,we identified the ethyl methanesulfonate-derived mutant wheat line M133 that displays multiple morphological changes that include upward-curled leaves,paired spikelets,dwarfism,and delayed heading.Using bulked segregant RNA sequencing(BSR-seq)and a high-resolution genetic map,we identified TraesCS1D02G155200(HBD2)as a potential candidate gene.HB-D2 encodes a class III homeodomain-leucine zipper(HD-ZIP III)transcription factor,and the mutation was located in the miRNA165/166 complementary site,resulting in a resistant allele designated rHb-D2.The relative expression of rHb2 in the mutant plants was significantly higher(P<0.01)than in plants homozygous for the WT allele.Independent resistant mutations that disrupt the miRNA165/166 complementary sites in the A-(rHb-A2)and B-genome(rHb-B2)homoeologs showed similar phenotypic alterations,but the relative intensity of the effects was different.Transgenic plants expressing rHb-D2 gene driven by the maize UBIQUITIN(UBI)promoter showed similar phenotypes to the rHb-D2 mutant.These results confirmed that HB-D2 is the causal gene responsible for the mutant phenotypes.Finally,a survey of 1397 wheat accessions showed that the complementary sites for miRNA165/166 in all three HB2 homoeologs are highly conserved.Our results suggest that HB2 plays an important role in regulating growth and development in wheat. 展开更多
关键词 WHEAT miRNA165/166 Curled leaves Paired spikelets Homeodomain-leucine zipper transcription factor
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ZNF165基因在食管癌中的表达及其临床意义
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作者 韦娜 洪坤巧 余保平 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2023年第10期1081-1088,共8页
目的探索ZNF165在食管癌中的表达,分析ZNF165表达与食管癌患者临床病理学特征和预后的相关性。方法通过TCGA和GEO数据库分析ZNF165在食管癌中的表达情况。利用Logistic回归分析ZNF165表达与食管癌患者临床病理特征的相关性。接着利用Kap... 目的探索ZNF165在食管癌中的表达,分析ZNF165表达与食管癌患者临床病理学特征和预后的相关性。方法通过TCGA和GEO数据库分析ZNF165在食管癌中的表达情况。利用Logistic回归分析ZNF165表达与食管癌患者临床病理特征的相关性。接着利用Kaplan-Meier分析、ROC曲线、Cox回归分析ZNF165在食管癌患者中的预后价值。通过TCGA数据库寻找ZNF165共表达基因,进行GO生物功能及KEGG通路富集分析。通过肿瘤免疫评估资源(Tumor Immune Evaluation Resource,TIMER)数据库分析ZNF165与食管癌免疫浸润的相关性。最后,通过qRT-PCR验证ZNF165在人食管癌细胞系和食管癌组织标本中的表达。结果TCGA和GEO数据集分析表明,食管癌组织样本中ZNF165表达显著高于非肿瘤组织(P<0.05),qRT-PCR进一步证实了这一点。高表达ZNF165的食管癌患者总生存期明显短于ZNF165低表达患者(P=0.024)。Cox回归分析提示,ZNF165是食管癌患者总生存期的独立预测指标(P=0.005)。基于TNM分期、组织学分级、年龄和ZNF165表达的预测模型能有效预测食管癌患者1年、3年及5年总生存率。GO生物功能及KEGG通路富集分析提示,ZNF165主要参与抗菌体液反应、脂肪消化和吸收、溶质-钠离子共转运活性等生物学过程。免疫相关性分析提示,ZNF165表达与嗜酸性粒细胞、NK-CD56 bright、Th17等24个免疫细胞具有相关性,与多种免疫细胞表面标志物显著相关。结论ZNF165表达与食管癌患者预后及免疫浸润具有相关性,有可能作为食管癌诊断及预后预测的重要生物学靶点。 展开更多
关键词 食管癌 ZNF165 生物信息 预后分析 QRT-PCR
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非洲猪瘟病毒pE165R蛋白原核表达及其多克隆抗体制备
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作者 何健 张梦杨 +1 位作者 刘阳坤 姚伦广 《动物医学进展》 北大核心 2023年第7期10-15,共6页
为进一步深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV),原核表达ASFV pE165R蛋白并制备其多克隆抗体。根据ASFV Pig/HLJ/2018的pE165R基因序列(GenBank:MK333180.1),设计合成pE165R基因,并克隆到pET32a原核表达载体中,构建pET32a-pE165R重组质粒,经双酶... 为进一步深入研究非洲猪瘟病毒(ASFV),原核表达ASFV pE165R蛋白并制备其多克隆抗体。根据ASFV Pig/HLJ/2018的pE165R基因序列(GenBank:MK333180.1),设计合成pE165R基因,并克隆到pET32a原核表达载体中,构建pET32a-pE165R重组质粒,经双酶切、测序验证后,转化到BL21(DE3)感受态细胞进行表达。通过SDS-PAGE、Western blot进行初步鉴定。将纯化的pE165R蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,间接ELISA、Western blot及间接免疫荧光鉴定多克隆抗体的效价及特异性。结果显示成功表达了ASFV pE165R蛋白,且以可溶性形式大量表达。间接ELISA测得多克隆效价为1∶512000;Western blot结果显示,在21 ku左右处出现了特异性条带,与预期值相符;间接免疫荧光结果显示出了特异性红色荧光,定位于细胞膜上,而对照组未出现红色荧光,表明制备的多克隆抗体能与重组杆状病毒表达的pE165R蛋白发生反应,且具有较好的特异性及反应原性。结果表明,表达、纯化获得了ASFV的pE165R重组蛋白,并成功制备了抗pE165R的多克隆抗体,为进一步研究pE165R蛋白生物学功能、非洲猪瘟疫苗、病毒感染机制等方面提供了物质基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 pE165R蛋白 原核表达 多克隆抗体
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Expression of VEGF165 and VEGF165b during ovarian follicular development
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作者 Chinnarat Changsangfa Bongkoch Turathum +1 位作者 Morakot Sroyraya Khwanthana Grataitong 《Asian pacific Journal of Reproduction》 2023年第6期281-287,共7页
Objective:To investigate the role of vascular endothelial growth factor(VEGF)165a,VEGF165b,and VEGF receptor(VEGFR)in the development of bovine follicles.Methods:We cultured follicular cells that were collected from s... Objective:To investigate the role of vascular endothelial growth factor(VEGF)165a,VEGF165b,and VEGF receptor(VEGFR)in the development of bovine follicles.Methods:We cultured follicular cells that were collected from small,medium,and large sized bovine follicles with estrogen and measured the expression of VEGF,VEGFR2 and VEGF165b by Western blot analysis and immunofluorescence.Results:The expression of VEGF165 increased in all follicle sizes and the expression of VEGF165b was increased in the small and large follicles after culturing in an estrogen containing medium.The expression of VEGFR2 was increased in the medium and large follicles after culturing with estrogen for 96 h.VEGF165 was activated at 100 ng/mL estrogen in the large follicles for 96 h.In addition,VEGFR2 was upregulated in the medium and large follicles after treated with 100 ng/mL estrogen for 96 h.Conclusions:This evidence suggests that the expression of VEGF165 and VEGFR is associated with estrogen stimulation during the development of bovine follicles and in an autocrine or paracrine manner.This reveals an advantage during oocyte maturation in vitro. 展开更多
关键词 Ovarian follicles Vascular endothelial growth factor VEGF VEGFR2 VEGF165B Estrogen stimulation
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血管内皮生长因子165b对人肝癌HepG_2细胞生物学特性的影响 被引量:8
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作者 赵燕颖 王秀岩 +3 位作者 秦国涛 孙远杰 刘志忠 李然伟 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期101-105,共5页
目的:探讨血管内皮生长因子165b(VEGF165b)对人肝癌HepG_2细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法:HepG_2细胞分为空白组(仅加转染试剂)、对照组(转染阴性对照PcDNA3.0表达载体)和PcDNA-VEGF165b组(转染VEGF165b表达载体PcDNA... 目的:探讨血管内皮生长因子165b(VEGF165b)对人肝癌HepG_2细胞生物学特性的影响,并初步研究其作用机制。方法:HepG_2细胞分为空白组(仅加转染试剂)、对照组(转染阴性对照PcDNA3.0表达载体)和PcDNA-VEGF165b组(转染VEGF165b表达载体PcDNA-VEGF165b)。MTT法检测各组HepG_2细胞生存率,RT-PCR法和Western blotting法检测HepG_2细胞中VEGF165b和VEGF165 mRNA和蛋白表达水平,Transwell小室法检测HepG_2细胞迁移能力。结果:与空白组比较,对照组HepG_2细胞中VEGF165b和VEGF165mRNA和蛋白表达水平无明显变化(P>0.05)。与空白组比较,PcDNA-VEGF165b组细胞中VEGF165bmRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),VEGF165 mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。空白组和对照组细胞生存率比较差异无统计学意义(P>0.05);与空白组和对照组比较,PcDNAVEGF165b组细胞生存率有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。细胞迁移实验,空白组和对照组细胞迁移率比较差异无统计学意义(P<0.05);与空白组和对照组比较,PcDNA-VEGF165b组HepG_2细胞迁移率明显降低(P<0.05)。结论:VEGF 165b能抑制VEGF165基因和蛋白的表达,VEGF165b对肝癌细胞增殖无明显影响,但可降低肝癌细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 肝肿瘤 HEPG2细胞 血管内皮细胞生长因子165b 血管内皮细胞生长因子165 细胞增殖 细胞迁移
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血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞凋亡的影响及机制 被引量:10
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作者 欧希龙 关云艳 +3 位作者 颜芳 孙为豪 杨柳 陈国胜 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第3期307-310,共4页
目的:本实验探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)对体外培养的胃癌细胞株BGC-823凋亡的影响和机制.方法:将BGC-823细胞分为对照组、感染复数(MOI=20)病毒Ad-GFP的Ad-GFP组,重组腺病毒Ad-VEGF165转染的Ad-VEGF165组.应用流式细胞仪检测细... 目的:本实验探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)对体外培养的胃癌细胞株BGC-823凋亡的影响和机制.方法:将BGC-823细胞分为对照组、感染复数(MOI=20)病毒Ad-GFP的Ad-GFP组,重组腺病毒Ad-VEGF165转染的Ad-VEGF165组.应用流式细胞仪检测细胞凋亡的百分率,RT-PCR方法检测凋亡抑制基因Bcl-2mRNA的表达,免疫细胞化学方法检测Bcl-2蛋白的表达情况.结果:流式细胞仪测定显示Ad-VEGF165组的细胞凋亡率明显低于Ad-GFP组和对照组(4.6%±0.31% vs 8.37%±1.06%.7.73%±0.86%,P<0.01);RT-PCR和细胞免疫化学结果显示VEGF165转染BGC-823细胞后促进了细胞Bcl-2mRNA和蛋白的表达.Ad-VEGF165组Bcl-2mRNA和蛋白均高于对照组和Ad-GFP组(Bcl-2mRNA:0.761±0.05 vs 0.363±0.12.0.356±0.08;Bcl-2蛋白:1.010±0.08 vs 0.865±0.07,0.901±0.05;P<0.01).结论:VEGF165通过上调凋亡抑制基因Bcl-2及其蛋白的表达,来抑制血浆饥饿诱导的胃癌细胞的凋亡. 展开更多
关键词 腺病毒 血管内皮生长因子165 胃癌 凋亡 BCL-2 逆转录聚合酶链式反应
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VEGF165反义RNA对人食管鳞癌细胞影响的实验研究 被引量:5
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作者 谷仲平 王云杰 +4 位作者 周勇安 刘锟 程庆书 李谨革 白雪帆 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期199-202,共4页
目的 :观察血管内皮生长因子16 5 (VEGF16 5 )反义RNA对人食管鳞癌细胞EC10 9的影响 ,探讨其治疗食管癌的可行性。方法 :采用亚克隆技术 ,构建并鉴定VEGF16 5 反义RNA的真核表达载体。以重组质粒转染人食管鳞癌细胞EC10 9后 ,将其接种... 目的 :观察血管内皮生长因子16 5 (VEGF16 5 )反义RNA对人食管鳞癌细胞EC10 9的影响 ,探讨其治疗食管癌的可行性。方法 :采用亚克隆技术 ,构建并鉴定VEGF16 5 反义RNA的真核表达载体。以重组质粒转染人食管鳞癌细胞EC10 9后 ,将其接种于裸鼠皮下 ,分别利用原位杂交、激光共聚焦、图象分析及微血管计数等方法 ,观察转染前后EC10 9细胞的生物学性状和致瘤性。结果 :成功地构建了VEGF16 5 反义RNA的真核表达载体 ,并在EC10 9细胞中获得表达。转染细胞中VEGF16 5 的表达下降 75% ,其生物学性状不受外源基因表达的影响 ,但其在裸鼠皮下的致瘤性和和瘤组织中血管的生成明显下降。VEGF16 5 反义RNA转染组、空载体转染组和对照组中肿瘤的体积 ,分别为 (82 0± 112 .5)mm3 、(793 0± 10 3 5)mm3 和 (7850± 950 )mm3(P <0 .0 1) ;微血管的密度分别为 (8.5± 1.2 ) /mm2 、(44.3± 9.4) /mm2 和 (46.4± 12 .6) /mm2 (P <0 .0 1)。结论 :VEGF16 5反义RNA能够明显减少食管鳞癌细胞内VEGF16 5 的表达 ,具有抑制肿瘤生长和血管生成的作用 ,可望用于实体肿瘤的辅助治疗。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子165 食管癌 反义RNA
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人VEGF165基因真核表达质粒的构建及其对血管内皮细胞增殖的影响 被引量:6
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作者 吴忠均 吴维伟 +2 位作者 余林 时德 郑树森 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期716-720,共5页
目的 :构建人VEGF16 5基因的真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5 ,观察其在血管内皮细胞 (VEC)中的表达和表达产物对VEC增殖的影响。方法 :用RT PCR法从引产胎儿心脏组织中克隆VEGF16 5基因 ,并将其克隆至真核表达质粒pBud CE4 .1中 ,对... 目的 :构建人VEGF16 5基因的真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5 ,观察其在血管内皮细胞 (VEC)中的表达和表达产物对VEC增殖的影响。方法 :用RT PCR法从引产胎儿心脏组织中克隆VEGF16 5基因 ,并将其克隆至真核表达质粒pBud CE4 .1中 ,对重组真核表达质粒pBudCE4 .1/VEGF16 5进行酶切鉴定和测序。以脂质体转染法将pBudCE4 .1/VEGF16 5导入VEC中 ,用Northernblot和免疫细胞化学染色法 ,分别从mR NA水平和蛋白质水平检测它们在转染的VEC中的表达 ,并检测表达产物对VEC增殖的影响。结果 :人VEGF16 5基因的RT PCR产物为 5 76bp。测序结果显示 ,扩增的VEGF16 5基因的序列与基因文库中登录的序列完全一致。经HindⅢ和BamHI酶切鉴定证实 ,VEGF16 5基因已成功地克隆至真核表达质粒pBudCE4 .1中。以其转染血管内皮细胞 (VEC)后 ,经Northernblot杂交和免疫细胞化学染色法检测均证实VEGF16 5基因表达。表达产物对VEC增殖有明显的促进作用。结论 :所构建的pBudCE4 .1/VEGF16 5真核表达质粒可在VEC中表达 ,表达产物可明显促进VEC增殖 ,为通过VEGF16 展开更多
关键词 真核表达质粒 血管内皮生长因子165 血管内皮细胞 基因转染 器官移植
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APP5肽类似物165对老年性痴呆模型大鼠行为学及PSD95和Shank 1表达的影响 被引量:5
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作者 陆珊 雷亚平 +3 位作者 王蓬文 王蓉 盛树力 田金洲 《中国神经免疫学和神经病学杂志》 CAS 2007年第4期183-186,I0002,共5页
目的观察5肽类似物165对老年性痴呆(Alzhei mer disease,AD)模型大鼠学习记忆能力及突触后致密区蛋白95(postsynaptic density95,PSD95)和骨架蛋白Shank1表达的影响。方法将45只大鼠随机分为正常对照组、模型组和5肽类似物165治疗组,模... 目的观察5肽类似物165对老年性痴呆(Alzhei mer disease,AD)模型大鼠学习记忆能力及突触后致密区蛋白95(postsynaptic density95,PSD95)和骨架蛋白Shank1表达的影响。方法将45只大鼠随机分为正常对照组、模型组和5肽类似物165治疗组,模型组和治疗组大鼠按体重3mg/kg行双侧侧脑室链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射,第3天重复注射建立AD模型,对照组以人工脑脊液代替STZ。术后21d治疗组按体重0.34mg/(kg.d)给予APP5肽类似物165灌胃干预,其余两组以蒸馏水代替。3周后应用Morris水迷宫、免疫组织化学和Western blotting方法检测大鼠的学习记忆能力及PSD95和Shank1的表达。结果5肽类似物165治疗组大鼠的平均游泳时间较模型组明显缩短(P<0.01),且海马PSD95和Shank1阳性神经细胞数及PSD95和Shank1蛋白表达较模型组明显增加(P<0.05)。结论5肽类似物165可显著提高大鼠学习记忆能力,增加大鼠海马PSD95和Shank1表达,表明其对突触功能和可塑性具改善作用。 展开更多
关键词 APP5肽类似物165 链脲佐菌素 PSD95 SHANK 1 老年性痴呆
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重组人VEGF_(165)工程菌的发酵及表达产物的纯化与活性测定 被引量:4
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作者 刘煜 吴国祥 +4 位作者 赵建阳 颜天华 奚涛 沈子龙 成国祥 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期82-85,共4页
目的 :优化重组人VEGF1 65(rhVEGF1 65)工程菌的发酵条件 ,分离纯化目的蛋白并检查活性。方法 :考察了甲醇诱导浓度和诱导时间对目的蛋白表达量的影响 ;发酵液经离心、透析后 ,经肝素亲和柱层析、超滤制得纯品 ;采用CAM实验和血管内皮细... 目的 :优化重组人VEGF1 65(rhVEGF1 65)工程菌的发酵条件 ,分离纯化目的蛋白并检查活性。方法 :考察了甲醇诱导浓度和诱导时间对目的蛋白表达量的影响 ;发酵液经离心、透析后 ,经肝素亲和柱层析、超滤制得纯品 ;采用CAM实验和血管内皮细胞MTT法测定生物活性 ,比较了与人VEGF1 65标准品的免疫原性。结果 :最佳表达条件为 :甲醇诱导浓度为 1% ,诱导时间为 5~ 6d ;采用Heparin SepharoseCL6B亲和层析后 ,产物纯度可达 90 %以上 ;活性测定结果显示 ,目的蛋白具有促血管生成作用 ;与人VEGF1 65具有相似的免疫原性。结论 :经发酵纯化后获得了有活性的重组人VEGF1 展开更多
关键词 rhVEGF165 血管内皮生长因子 巴氏毕赤酵母 纯化 生物活性 免疫原性 肝素亲和层析
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APP5肽类似物P165对链脲佐菌素双侧侧脑室注射大鼠海马神经元突触的保护作用 被引量:2
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作者 岳志霞 崔艳君 +4 位作者 王蓬文 王蓉 姬志娟 盛树力 田金洲 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期142-148,共7页
目的观察APP5肽类似物P165对双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)大鼠海马神经元突触相关蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠45只,随机分为对照组、模型组和治疗组。模型组、治疗组大鼠脑室注射STZ制作痴呆模型,3周后,治疗组以APP5肽类似物P... 目的观察APP5肽类似物P165对双侧侧脑室注射链脲佐菌素(STZ)大鼠海马神经元突触相关蛋白表达的影响。方法雄性Wistar大鼠45只,随机分为对照组、模型组和治疗组。模型组、治疗组大鼠脑室注射STZ制作痴呆模型,3周后,治疗组以APP5肽类似物P165灌胃治疗,用药4周后,采用Morris水迷宫进行行为学测试;免疫组织化学染色及Western blotting方法观察突触素、α-突触核蛋白和突触后致密区-95蛋白(PSD-95)的表达;电镜观察海马CA1区超微结构改变。结果模型组游泳时间显著长于对照组和治疗组。免疫组织化学染色及Westernblotting均显示模型组海马内突触素、PSD-95蛋白表达与对照组和治疗组相比显著减少,而α-突触核蛋白显著增多。电镜观察可见模型组海马CA1区神经元出现退行性改变,神经毡内突触结构异常。结论脑室注射STZ可影响大鼠海马突触相关蛋白的表达,引起海马神经元和突触的超微结构病变,导致大鼠学习记忆能力减退。APP5肽类似物P165可影响突触蛋白的表达,改善突触功能,有助于恢复大鼠的学习、记忆能力。 展开更多
关键词 阿尔茨海默病 APP5肽类似物P165 链脲佐菌素 海马 免疫组织化学 免疫印迹法 大鼠
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