pTAT-HA-ARC和pTAT-HA-eGFP的原核表达及转导神经元活性初步鉴定

目的构建原核表达质粒,表达并纯化pTAT-HA-ARC和pTAT-HA-eGFP融合蛋白,初步探讨其转导神经元细胞的活性。方法构建pTAT-HA-ARC和pTAT-HA-eGFP原核表达载体,将载体转化大肠杆菌,通过IPTG诱导表达目的蛋白,优化IPTG诱导浓度,通过镍亲和层析柱和脱盐柱纯化蛋白,SDS-PAGE和Western blot印迹鉴定目的蛋白;并通过荧光显微镜观察pTAT-HA-eGFP转导小鼠海马神经元细胞HT22的活性。结果成功表达、纯化pTAT-HA-ARC和pTAT-HA-eGFP融合蛋白,本试验中优化的IPTG诱导浓度为0.1m M;pTAT-HA-eGFP融合蛋白能充分转导入HT22细胞中。结论表达和纯化了能直接转导入HT22细胞的带有TAT-HA标签的融合蛋白,为进一步在体外和体内研究pTAT-HA-ARC蛋白对神经元的保护作用奠定了基础。