弗氏柠檬酸细菌酪氨酸酚解酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

以基因组DNA为模板 ,利用PCR技术从弗氏柠檬酸细菌 (Citrobacterfreundii)中扩增得到含有酪氨酸酚解酶基因的DNA片段 ,定向连接到质粒 pUC118上 ,得到重组质粒 pTPL ,将此重组质粒转化到受体菌E .coliXL - 1-BlueMRF′中 ,通过蓝白斑鉴定挑出阳性菌株。从此阳性菌株中提取质粒 pTPL并将此质粒转入到E .coliJM 10 9中 ,用E .coliJM 10 9(pTPL)制备高活性的酪氨酸酚解酶。对质粒稳定性的研究表明 ,E .coliJM 10 9(pTPL)在无选择压力下 37℃连续培养 5 0代以上 ,质粒丢失率仅有 15 % 。