抑制低氧诱导因子活性的转录载体pTZU6+1 RNAi系统的构建

目的构建抑制低氧诱导因子(HIF-1a)活性的shRNA表达载体,为进一步探讨其对HIF-1a基因表达的抑制作用。方法设计并合成2对HIF-1a编码基因的反向重复序列,中间分别间隔4nt和8nt,分别定向克隆至载体pTZU6+l的U6转录启动子下,构建pshRNA-HIF-1al和pshRNA-HIF-1a2重组质粒。结果构建的pshRNA-HIF-1al和pshRNA-HIF-1a2重组载体经双酶切鉴定及插入基因片段序列分析,成功地将目的基因片段插入到预计位点,并且与实验设计完全一致。结论重组载体的成功构建,为进一步研究pshRNA-HIF-1a对HIF-1a活性的抑制作用和基因功能的分析、肿瘤的治疗等奠定了基础。