Tet-on系统诱导esp1基因表达对A_(549)细胞染色体的影响

目的观察肺腺癌Am细胞经Tet-on系统诱导表达espl基因后其染色体数目的改变。方法利用PTet—on基因表达调控系统，先后将调控质粒Ptet-on和反应质粒PTK-Hyg与PTRE-EGFP-espl以合适的比例用FuGENE6脂质体共转染入A-细胞，经G418和潮霉素筛选成活并带有绿色荧光的细胞为转染成功细胞，挑选8个单细胞克隆并扩增培养，加入强力霉素诱导espl表达。用RT-PCR检测不同浓度强力霉素诱导以及强力霉素诱导不同时间的espl的表达量，并采用传统秋水仙素方法以及流式细胞技术检测诱导不同时间段A549／Ptet-on／TK-Hyg／PTRE-EGFP-espl细胞克隆染色体数目的改变。结果100～200ng／ml浓度范围的强力霉素诱导espl表达量最高，诱导1h即可有espl基因的表达，至48h表达量到达高峰之后逐步减少。在诱导24h后逐步出现染色体数目减少。结论上调espl基因对肿瘤细胞异常染色体有一定的抑制作用，对肿瘤治疗有潜在的应用价值。

esp1基因Tet-on载体的构建及在Hela中的可调控性表达

目的构建esp1-pTRE-d2EGFP可调控真核表达载体,检测其在Hela细胞内的表达情况。方法将esp1导入pTRE-d2EGFP载体中。用脂质体将pTet-on、PTK-Hyg和esp1-pTRE-d2EGFP共转染入Hela细胞,以不同浓度的DOX诱导,用Real-time PCR、Western blot检测esp1表达水平。结果我们构建的可调控性表达载体能在Hela细胞内表达,不同浓度药物诱导的esp1表达水平明显不同。结论成功构建了esp1-pTRE-d2EGFP真核表达载体,并可在Hela细胞内表达。为进一步观察esp1与肿瘤发生、发展的关系奠定了基础。