电离辐射质粒pUC18 DNA结构变化的傅里叶变换拉曼光谱分析

采用傅里叶变换拉曼光谱研究了质粒 pUC18DNA经过γ射线电离辐射以后结构的变化。其脱氧核糖 磷酸主链中各振动模式产生的谱带强度有所增加 ,包括 884cm-1处的脱氧核糖 磷酸主链振动谱带、146 0cm-1处的 CH2 弯曲振动谱带和 2 939cm-1处的C—H伸缩振动谱带。碱基杂环弯曲振动谱带 187cm-1位移到 2 0 8cm-1处 ,强度明显减弱。在 32 98cm-1处出现了一个源于N—H伸缩振动的新谱带。此结果表明碱基受损 ,主链断裂 ,超螺旋结构部分解旋。

质粒pUC18DNA的傅立叶变换拉曼光谱研究

用傅立叶变换拉曼光谱研究了质粒 pUC18DNA的结构。其脱氧核糖 -磷酸主链中各振动模式产生的谱带强度相对较强 ,包括 884cm-1处的脱氧核糖 -磷酸主链振动谱带、145 9cm-1处的 -CH2 弯曲振动谱带和 2 939cm-1处的C -H伸缩振动谱带等 。

稀土元素La(Ⅲ)对质粒pUC18复制速度的影响

稀土应用的日益增长将会对生物的遗传产生深远的影响 .生物的遗传离不开DNA的复制 ,由于染色体DNA非常巨大和复杂 ,难以直接研究稀土离子对其复制的影响 .以细菌染色体之外的遗传因子———质粒为对象 ,研究La3+对质粒DNA复制速度的影响 .结果表明 :在不同浓度La3+存在下 ,质粒在宿主细胞中复制的速度不同 ;由于质粒复制与染色体DNA复制使用相同的酶系 。

微绿球藻DNA质粒文库的构建

微绿球藻（Nannochloropsis oculata）DNA被提取纯化并经超声波处理后，将所得大小在1．6～3kb之间的DNA片段用T4DNA聚合酶补平，再与Sma I酶切消化并经去磷酸化处理的质粒栽体pUCl8连接。转化至DH10B大肠杆菌（Escherichiacoli）的感受态细胞中。建立的DNA质粒文库容量含2×10^4个克隆，其中重组子占90％。随机挑选白色菌落并培养，抽提的质粒经XbaI和SacI双酶切鉴定，显示重组的质粒中均含有大小不等的DNA插入片段。

不吸水链霉菌梧州新亚种基因文库的构建

以不吸水链霉菌梧州新亚种为材料,提取的总基因组经Sau3AI不完全酶切,回收3～9 kb DNA酶切片段,用T4连接酶将回收片段按一定比例与经BamHI酶切、南极热敏磷酸酶去磷酸化处理后的pUC18质粒载体连接,热激法转化受体菌E.coliDH5α,在含有IPTG/X-gal和Amp＋的LB平板上筛选重组子,所得克隆数为9×10^3个,以不吸水链霉菌染色体基因组大小为7 Mb计算,概括了不吸水链霉菌梧州新亚种约99%的基因组,达到了建库要求的理论值。随机挑取白色菌落,提取重组质粒进行酶切电泳分析,均有外源片段插入。基因文库的构建,为进一步深入研究梧宁霉素生物合成基因结构及功能奠定基础。

ArF准分子激光作用超螺旋PUC18 DNA的AFM研究

激光对DNA作用的机理研究,国内外尚无定论,有待进一步深入.龚立三等用YGA四倍频激光（265nm,30ps,50mJ）和准分子激光（KrF的248nm,Laser Roman的512nm）处理λ-DNA和λ-DNA/HindⅢ,用紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,增色效应和拖尾的出现表明DNA的结构键被激光脉冲切断.作者用YAGQ开关二倍频激光（532nm,1.5mJ,20ns）照射λ-DNA/HindⅢ、鱼精 DNA、小牛胸腺DNA和酵母RNA,测定了DNA的UV谱,并讨论了激光辐照导致DNA链断裂的分子机制.到目前为止,尚没见到采用扫描隧道显微镜（STM）和原子力显微镜（AFM）为手段研究激光对DNA作用机理的报道. 我们在文献中报道了AFM观察CO2激光作用后的质粒DNA和小牛胸腺DNA样品的结果.本文中用ArF准分子激光（193nm,单脉冲能量为220mJ,20ns）作用超螺旋PUC18 DNA,并用AFM获得了它们的结构图象,讨论了激光和DNA的可能作用机理.

高渗漏型AspAT基因工程菌诱导表达的研究

利用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导有高渗漏表达现象的天冬氨酸转氨酶(AspAT)工程菌,研究是否可以在这一类基因工程菌中提高酶的产量及活性。在观察IPTG诱导后菌体生长的同时,观察不同的时间及条件下酶活性的变化,发现插入含有天冬氨酸转氨酶基因(AspC,1.2kb)的pUC18质粒的BL21(DE3)在较高渗漏表达的情况下,用IPTG 37℃诱导培养8 h后酶表达开始升高,12 h后趋于稳定表达;同时发现用0.1 mmol/L IPTG诱导后酶的活性提高最多,比未诱导前提高一倍以上。研究认为如果培养条件恰当这类菌应该可以用IPTG诱导高效表达目的酶蛋白。