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质粒载体pUC19在头孢哌酮抗性基因(CPZ^r)克隆中的应用探讨
1
作者 梁润琴 范昕建 雷秉均 《川北医学院学报》 CAS 2000年第4期1-4,共4页
目的 :研究质粒pUC19是否为头孢哌酮抗性基因 (CPZr)分子克隆的理想载体。方法 :氯化钙法将质粒pUC19转化至工程菌E .coliDH5获得pUC19转化菌 ;采用试管二倍液体稀释法进行pUC19转化菌对 2 5种抗生素的敏感性测定 ;鸟枪法克隆耐药质粒pF... 目的 :研究质粒pUC19是否为头孢哌酮抗性基因 (CPZr)分子克隆的理想载体。方法 :氯化钙法将质粒pUC19转化至工程菌E .coliDH5获得pUC19转化菌 ;采用试管二倍液体稀释法进行pUC19转化菌对 2 5种抗生素的敏感性测定 ;鸟枪法克隆耐药质粒pFC片段到载体pUC19获得含有CPZr 的重组质粒。结果 :pUC19转化菌对氨苄青霉素高度耐药 (MIC >2 5 6 μg/ml) ,对第一代头孢菌素中度耐药 ,对第二代头孢菌素中的头孢孟多耐药 ,而对头孢呋新敏感 ,在第三代头孢菌素中只对头孢哌酮耐药 (MIC ,6 4μg/ml) ,对其他第三代头孢菌素及 β 内酰胺酶抑制剂均高度敏感 ,同时敏感性测定结果还发现pUC19转化菌对氟喹诺酮类和氨基糖甙类抗性素均敏感。pUC19作为载体克隆到含有头孢哌酮抗性基因 (CPZr)的重组质粒少 ,克隆效率低 ,未能达到预期的目标。结论 :pUC19不适合作为CPZr 的克隆载体。 展开更多
关键词 puc19 耐药性 Β-内酰胺酶 CPZ^r
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In Vitro Antioxidant and Radio Protective Activities of Lycopene from Tomato Extract against Radiation—Induced DNA Aberration
2
作者 Safaiatul Islam Abu Hena Mostofa Kamal +2 位作者 Md. Ziaur Rahman Protul Kumar Roy A.Y.K. Md. Masud Rana 《Journal of Biosciences and Medicines》 2024年第2期202-213,共12页
Background: The accumulation of free radicals is linked to a number of diseases. Free radicals can be scavenged by antioxidants and reduce their harmful effects. It is therefore essential to look for naturally occurri... Background: The accumulation of free radicals is linked to a number of diseases. Free radicals can be scavenged by antioxidants and reduce their harmful effects. It is therefore essential to look for naturally occurring antioxidants that come from plants, as synthetic antioxidants are toxic, carcinogenic and problematic for the environment. Lycopene is one of the carotenoids, a pigment that dissolves in fat and has antioxidant properties. Materials and Methods: The antioxidant and free radical scavenging activity were assessed using the 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) assay. The impact of lycopene on bacteria (E. coli) susceptibility to γ-radiation was examined by radio sensitivity assay. The study also examined the induction of strand breaks in plasmid pUC19 DNA and how lycopene extract protected the DNA from γ-radiation in vitro. Results: At varying concentrations, lycopene demonstrated its ability to scavenge free radicals such as 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH). IC<sub>50</sub> for lycopene was determined at 112 μg/mL which was almost partial to IC<sub>50</sub> of standard antioxidant L-ascorbic acid. The D<sub>10</sub> value 180 Gy of E. coli was found to be >2-fold higher in the extract-containing lycopene sample than in the extract-free controls. The lycopene extracts inhibited the radiation-induced deterioration of the plasmid pUC19 DNA. At an IC<sub>50</sub> concentration, lycopene provided the highest level of protection. Conclusion: Lycopene functions as an efficient free radical scavenger and possible natural antioxidant source. For cancer patients and others who frequently expose themselves to radiation, lycopene may be a useful plant-based pharmaceutical product for treating a variety of diseases caused by free radicals. 展开更多
关键词 Radio Protective ANTIOXIDANTS Free Radical DNA Damage puc19 Plasmid Gamma Irradiation DPPH
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T载体母本质粒pUC19M的构建及承载能力的测定
3
作者 郝爱平 魏继承 朱羡冰 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期48-50,共3页
目的:以pUC19质粒为材料,通过常规的分子克隆实验方法构建基于限制性内切酶XcmⅠ的、可自行扩增的T载体母本质粒pUC19M,并对其进行承载能力的检测。方法:通过设计1对互补配对的寡核苷酸,经过变性及退火后插入质粒pUC19的多克隆位点而引... 目的:以pUC19质粒为材料,通过常规的分子克隆实验方法构建基于限制性内切酶XcmⅠ的、可自行扩增的T载体母本质粒pUC19M,并对其进行承载能力的检测。方法:通过设计1对互补配对的寡核苷酸,经过变性及退火后插入质粒pUC19的多克隆位点而引入2个XcmⅠ酶切位点,用XcmⅠ酶切后即获得含有3’突出T碱基的T载体。结果:经实验验证,pUC19M-T载体构建成功;其承载能力在1kb左右。结论:构建的T载体可以满足实验室基因克隆的需要。 展开更多
关键词 T载体 XcmⅠ puc19M 承载能力
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λ DNA酶切片段与pUC19克隆载体的构建与鉴定
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作者 陈平 《生物技术世界》 2014年第11期17-18,共2页
目的:构建λDNA片段/p UC19重组质粒并鉴定。方法:将克隆质粒p UC19和λDNA进行Hind III酶切、碱法提取质粒,琼脂糖凝胶电泳纯化鉴定、紫外分光光度测定,T4DNA连接酶切产物、冰Ca Cl2转化E.coli DH5α菌株使之成为感受态细胞、蓝白斑筛... 目的:构建λDNA片段/p UC19重组质粒并鉴定。方法:将克隆质粒p UC19和λDNA进行Hind III酶切、碱法提取质粒,琼脂糖凝胶电泳纯化鉴定、紫外分光光度测定,T4DNA连接酶切产物、冰Ca Cl2转化E.coli DH5α菌株使之成为感受态细胞、蓝白斑筛选法筛选并鉴定重组转化子。结果:1所提质粒p UC19电泳获得预期的3条带,经由标准DNA Markar比对准确,提取浓度满足酶切需要。2酶切质粒p UC19电泳获得预期的1条带,λDNA片段电泳获得的4条带,经由标准DNA Markar比对准确。3培养皿不同区域出现数量不等的蓝色、白色菌斑。结论:应用质粒p UC19可成功构建λDNA片段/p UC19重组质粒。经鉴定,该克隆载体能够导入菌株E.coli DH5α,转化效率较高。 展开更多
关键词 puc19 克隆载体 构建 鉴定
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γ射线诱导DNA损伤中DNA浓度和剂量率的影响 被引量:5
5
作者 孔福全 王潇 +3 位作者 倪嵋楠 隋丽 杨明建 赵葵 《原子核物理评论》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期103-107,共5页
在进行辐射致DNA损伤中,DNA浓度和剂量率是两个重要的因素。利用γ射线在不同的剂量率下对不同浓度的质粒DNApUC19水溶液进行了辐照,利用凝胶电泳对辐照后的样品进行分析。结果表明,在同一剂量下被辐照的DNA样品,随浓度的降低DNA损伤越... 在进行辐射致DNA损伤中,DNA浓度和剂量率是两个重要的因素。利用γ射线在不同的剂量率下对不同浓度的质粒DNApUC19水溶液进行了辐照,利用凝胶电泳对辐照后的样品进行分析。结果表明,在同一剂量下被辐照的DNA样品,随浓度的降低DNA损伤越来越严重;通过分析软件和理论公式得到的每个DNA上的双链断裂数随着DNA浓度的变化呈现为非线性趋势。 展开更多
关键词 Γ射线 DNA损伤 DNA浓度 剂量率 puc19
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环三聚磷腈多齿配体的合成及DNA的切割活性 被引量:2
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作者 王乐 叶勇 +2 位作者 钟尚宾 张迪 赵玉芬 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2009年第3期493-496,共4页
为了得到具有核酸切割功能的人工核酸酶,设计合成了5种环三聚磷腈多齿配体,并初步检测了其对DNA的切割活性.目标化合物的结构由IR,1HNMR,31P NMR,13C NMR和ESI-MS确认.在生理条件下对pUC19 DNA切割活性的初步实验结果表明,在化合物5a^5e... 为了得到具有核酸切割功能的人工核酸酶,设计合成了5种环三聚磷腈多齿配体,并初步检测了其对DNA的切割活性.目标化合物的结构由IR,1HNMR,31P NMR,13C NMR和ESI-MS确认.在生理条件下对pUC19 DNA切割活性的初步实验结果表明,在化合物5a^5e的Cu(Ⅱ)配合物存在下,保温24 h后,pUC19 DNA由FormⅠ断裂为FormⅡ,即合成目标化合物有明显的DNA切割活性.同时,考察了配合物5b+Cu在不同时间下对DNA的切割活性的影响. 展开更多
关键词 环三聚磷腈 多齿配体 puc19 DNA 切割
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活体内细菌移位示踪方法的研究 被引量:6
7
作者 府伟灵 肖光夏 +2 位作者 岳旭明 华川 雷曼萍 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 1998年第3期145-147,共3页
目的为解决内源性感染细菌体内示踪问题,本实验采用PUC19质粒载体示踪加限制性内切酶酶切图谱分析法和荧光标记示踪法,对肠道移位细菌进行了动态观察。并对两种方法进行了比较。方法依据PUC19质粒特点设计了动物模型,11... 目的为解决内源性感染细菌体内示踪问题,本实验采用PUC19质粒载体示踪加限制性内切酶酶切图谱分析法和荧光标记示踪法,对肠道移位细菌进行了动态观察。并对两种方法进行了比较。方法依据PUC19质粒特点设计了动物模型,110只Wisar大鼠致成30%体表面积Ⅲ°烫伤,于6、12、24、48h和12天分别活杀,做荧光显微镜检查和细菌培养,质粒提取和酶切。结果烧伤后肠道细菌可移位至淋巴结和肝脏,荧光标记方法细菌到达淋巴结(95%)和肝脏(57.5%)的百分率略高于PUC19示踪方法(78.4%、52.4%)。结论用PUC19质粒载体做示踪物可减少非特异性因素。 展开更多
关键词 puc19质粒示踪 细菌移位 内源性感染
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溴代色胺酮铁(Ⅱ)配合物的合成、晶体结构及与DNA的作用研究 被引量:3
8
作者 顾运琼 钟益宁 +2 位作者 申文英 谢新创 谭明雄 《化学世界》 CAS CSCD 2017年第2期113-118,共6页
以天然的生物碱色胺酮(Try)为起始原料,合成了卤代衍生物8-溴色胺酮和其铁配合物[Fe(8-Br-Try)4](1)。X单晶衍射分析表明,配合物1是由中心铁(Ⅱ)原子与两个8-溴色胺酮配体三齿螯合配位,形成一个六配位的变型八面体几何构型。采用紫外吸... 以天然的生物碱色胺酮(Try)为起始原料,合成了卤代衍生物8-溴色胺酮和其铁配合物[Fe(8-Br-Try)4](1)。X单晶衍射分析表明,配合物1是由中心铁(Ⅱ)原子与两个8-溴色胺酮配体三齿螯合配位,形成一个六配位的变型八面体几何构型。采用紫外吸收光谱和荧光光谱等分析方法研究了配合物1与G-四链体HTG21DNA的相互作用,发现这个化合物与DNA的结合能力较强,它与DNA的紫外结合常数为8.70×10~6 dm^3·mol^(-1)。琼脂糖凝胶电泳实验进一步表明,配合物1能对pUC19质粒DNA产生切割作用。 展开更多
关键词 8-溴代色胺酮 溴代色胺酮铁(Ⅱ)配合物 G-四链HTG21DNA puc19质粒超螺旋DNA
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多药耐药草绿色链球菌LuxS基因同源重组质粒的构建 被引量:1
9
作者 陆笑 刘少娟 +3 位作者 章锦才 刘芹 林珊 彭湘明 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期984-987,共4页
目的:构建一个含有红霉素抗性基因和多药耐药草绿色链球菌LuxS基因上下游区同源序列的重组质粒,为后续进行LuxS基因敲除实验做准备。方法:设计合成引物,分别以质粒PMG36E、草绿色链球菌DNA为模板,应用聚合酶链反应(PCR)扩增得到红霉素... 目的:构建一个含有红霉素抗性基因和多药耐药草绿色链球菌LuxS基因上下游区同源序列的重组质粒,为后续进行LuxS基因敲除实验做准备。方法:设计合成引物,分别以质粒PMG36E、草绿色链球菌DNA为模板,应用聚合酶链反应(PCR)扩增得到红霉素抗性基因DNA片断和LuxS基因上下游序列,经双酶切反应插入pUC19质粒的多克隆酶切位点中,转化大肠杆菌的感受态中,氨苄青霉和红霉素培养基筛选。结果:红霉素抗性基因和LuxS基因两侧同源序列成功连入到Puc19质粒相应酶切位点,PCR凝胶电泳、测序结果正确。结论:成功构建多药耐药草绿色链球菌LuxS基因敲除同源重组质粒,为进一步构建LuxS突变株打下基础。 展开更多
关键词 草绿色链球菌 LUXS基因 puc19质粒 PMG36E质粒
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RT-PCR扩增A组轮状病毒VP7片段及其扩增产物的克隆 被引量:1
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作者 潘福娟 梁未莉 +1 位作者 宋晓凯 郑奇崔吉 《中国优生与遗传杂志》 1998年第3期13-14,共2页
选用与A组人类轮状病毒(humanrotavinesvirus,HRV)编码VP7两端的保守序列互补的引物,采用RT-PCR技术得到其全长cDNA,用平端连接克隆法将该片段连接于puc19质粒中,然后转染JM103大... 选用与A组人类轮状病毒(humanrotavinesvirus,HRV)编码VP7两端的保守序列互补的引物,采用RT-PCR技术得到其全长cDNA,用平端连接克隆法将该片段连接于puc19质粒中,然后转染JM103大肠杆菌,为进一步研究轮状病毒的变异、重组、毒力。 展开更多
关键词 人类轮状病毒 RT-PCR 分子克隆 puc19质粒
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一株基因克隆干扰菌的鉴定及其发酵液降解DNA活性分析
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作者 刁文涛 王雪妍 +3 位作者 陈晓飞 冯菲 宁萌 周伏忠 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期221-225,共5页
旨在寻找导致基因克隆失败的原因,检测整个电泳环境中是否存在对DNA有强降解力的菌株。依据菌体形态,革兰氏反应以及16S rDNA序列对DNA降解菌株进行鉴定,琼脂糖凝胶电泳分析菌株对DNA的降解活性。结果显示,从DNA电泳槽中分离到了一株菌... 旨在寻找导致基因克隆失败的原因,检测整个电泳环境中是否存在对DNA有强降解力的菌株。依据菌体形态,革兰氏反应以及16S rDNA序列对DNA降解菌株进行鉴定,琼脂糖凝胶电泳分析菌株对DNA的降解活性。结果显示,从DNA电泳槽中分离到了一株菌,革兰氏染色鉴定为阴性菌,对该菌进行液体培养,利用质粒pUC19作为底物,检测该菌发酵液对DNA的降解能力,发现该菌发酵液能够迅速并彻底地降解DNA,其最佳降解温度为45℃,将该菌命名为DD(DNA degrading)。对该菌的16S rDNA进行测序比对后,发现其与粘质沙雷氏菌(Serrtia marcescens)的16S rDNA序列同源性高达100%。结合菌体形态,革兰氏反应以及16S rDNA序列结果,DD菌株为一株粘质沙雷氏菌,DNA降解活性分析显示其具有很强的DNA降解能力。 展开更多
关键词 DNA降解 puc19 粘质沙雷氏菌
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大肠杆菌DH12S菌株高效电击转化条件的探讨(英文)
12
作者 陈立 齐香君 《陕西科技大学学报(自然科学版)》 2010年第1期30-32,36,共4页
探讨了电击转化法介导质粒DNA转化到大肠杆菌DH12S的最佳条件,以提高其转化效率.将pUC19质粒转化大肠杆菌DH12S菌株,观察不同的电击转化条件对转化效率的影响.结果表明,电击缓冲液的离子强度、细菌生长状态、感受态细胞保存时间及质粒DN... 探讨了电击转化法介导质粒DNA转化到大肠杆菌DH12S的最佳条件,以提高其转化效率.将pUC19质粒转化大肠杆菌DH12S菌株,观察不同的电击转化条件对转化效率的影响.结果表明,电击缓冲液的离子强度、细菌生长状态、感受态细胞保存时间及质粒DNA浓度对转化效率均有不同程度的影响;在电压2.5 kV,电阻200Ω,电容25μF,脉冲时间4.3ms和低离子强度电击缓冲液的条件下能获得较高的电击转化率,证明该优化电击转化条件能提高转化效率. 展开更多
关键词 电击转化 质粒puc19 大肠杆菌DH12S
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人类染色体8q24.1带特异性微小卫星DNA的筛选 被引量:8
13
作者 徐磊 夏家辉 +2 位作者 潘乾 蔡涛 邓汉湘 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 1997年第1期1-6,共6页
本研究运用人类高分辨染色体显微切割、PCR技术获得的8q24.1带特异性探针池,构建了该区带的pUC19文库,从中筛选出48个含CA重复顺序的微小卫星DNA的克隆,已完成12个克隆的序列分析,发现了一个世界上至今未曾... 本研究运用人类高分辨染色体显微切割、PCR技术获得的8q24.1带特异性探针池,构建了该区带的pUC19文库,从中筛选出48个含CA重复顺序的微小卫星DNA的克隆,已完成12个克隆的序列分析,发现了一个世界上至今未曾报道过的、在正常人群中已检出11个等位片段的、杂合度在中国汉族人群和美国盎格鲁撤克逊族人群中分别达0.84和0.83的高度多态的微小卫星DNA(编号:D8S7F),经PCR检测人鼠杂种细胞系列,证实其来源于人8号染色体。 展开更多
关键词 人类遗传学 染色体 微小卫星DNA 区带特异性
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Tracing method study of bacterial translocation in vivo 被引量:9
14
作者 Fu WL Xiao GX +2 位作者 Yue XL Hua C Lei MP 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2000年第1期153-155,共3页
INTRODUCTIONEndogenesis infection plays an important role innosocomial infection.By studying progress ofbacteria translocation from intestinal tract,theconcept of gut-origin infection has been acceptedgradually.Becaus... INTRODUCTIONEndogenesis infection plays an important role innosocomial infection.By studying progress ofbacteria translocation from intestinal tract,theconcept of gut-origin infection has been acceptedgradually.Because of no ideal tracing method,there were some controversies.In order to solve theproblem,the PUC19 plasmid vector tracing 展开更多
关键词 Subject headings puc19 PLASMID trace BACTERIAL TRANSLOCATION RESTRICTION map analysis fluorescence LABELING
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漠黄梅共生菌藻宏基因组文库的构建
15
作者 张杰 周启明 魏江春 《菌物研究》 CAS 2010年第3期176-180,共5页
为了从耐旱地衣漠黄梅的共生菌藻基因组中筛选功能基因,并为蛋白质类药物的基因筛选提供平台,采用改进的CTAB方法提取其总DNA,用Sau3AⅠ限制性内切酶部分酶切基因组DNA,以质粒pUC19为载体,转入大肠杆菌DH5α中,构建了漠黄梅共生菌藻的... 为了从耐旱地衣漠黄梅的共生菌藻基因组中筛选功能基因,并为蛋白质类药物的基因筛选提供平台,采用改进的CTAB方法提取其总DNA,用Sau3AⅠ限制性内切酶部分酶切基因组DNA,以质粒pUC19为载体,转入大肠杆菌DH5α中,构建了漠黄梅共生菌藻的宏基因组文库。该文库包含了4.8×105个重组子,插入片段的平均大小为4kb,覆盖漠黄梅菌藻的整个基因组4次。 展开更多
关键词 地衣 puc19 大肠杆菌DH5α
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变异链球菌LuxS基因表达载体的构建
16
作者 马丽芳 倪龙兴 +2 位作者 童忠春 候波 杨帆 《口腔医学》 CAS 2008年第4期202-204,共3页
目的构建可用于变异链球菌表达系统的含LuxS基因的原核表达载体。方法应用聚合酶链反应(PCR)方法分别从变异链球菌的DNA、载体pEGFP-N1中扩增出LuxS基因的启动子(pLuxS)和绿色荧光蛋白(gfp)基因片段,经回收、纯化后,利用分子克隆技术分... 目的构建可用于变异链球菌表达系统的含LuxS基因的原核表达载体。方法应用聚合酶链反应(PCR)方法分别从变异链球菌的DNA、载体pEGFP-N1中扩增出LuxS基因的启动子(pLuxS)和绿色荧光蛋白(gfp)基因片段,经回收、纯化后,利用分子克隆技术分别克隆入载体pUC19中。结果通过对重组质粒pUC19-pLuxS-gfp的酶切图谱和DNA序列测定分析证实插入片段序列正确。结论成功构建出原核表达重组质粒pUC 19-pLuxS-gfp为下一步的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 变异链球菌 LuxS基因启动子(pLuxS) 绿色荧光蛋白(gfp) puc19 pEGFP-N1质粒
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二乙烯三胺多齿配体的合成及DNA的切割活性
17
作者 朱消非 刘艳红 叶勇 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期380-384,258,共5页
为了得到具有核酸切割功能的人工核酸酶,设计合成了二乙烯三胺单齿、双齿、四齿配体,目标化合物的结构经红外、核磁氢谱、碳谱和电喷雾质谱确认。在磷酸氢钠-磷酸二氢钠缓冲溶液中对质粒DNA切割活性的初步实验结果表明:在多齿配体的锌(... 为了得到具有核酸切割功能的人工核酸酶,设计合成了二乙烯三胺单齿、双齿、四齿配体,目标化合物的结构经红外、核磁氢谱、碳谱和电喷雾质谱确认。在磷酸氢钠-磷酸二氢钠缓冲溶液中对质粒DNA切割活性的初步实验结果表明:在多齿配体的锌(Ⅱ)配合物存在下,37℃保温48 h后,质粒DNA由Form Ⅰ断裂为Form Ⅱ,即合成的目标化合物有明显的切割活性。通过T4连接酶实验证明了目标化合物对DNA的切割为水解切割机制。 展开更多
关键词 二乙烯三胺 多齿配体 质粒DNA 切割试剂
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