去N端信号肽和C端跨膜区猪卵透明带-3β蛋白在原核系统表达的研究

猪卵透明带 (Zonapellucida ,ZP)由生物化学和免疫学性质截然不同的三种糖蛋白 (pZP1、pZP3α和pZP3β)组成。由于抗 pZP3β抗体能在体外与人ZP发生交叉反应 ,因此 pZP3β一直被认为是研制抗受精避孕疫苗的潜在抗原之一。为了能在原核系统中获得无卵巢因子污染的 pZP3β蛋白 ,本文采用PCR方法删除了原cDNA中编码5′ 和 3′ 端信号肽和跨膜区的DNA顺序。扩增的 pZP3β基因核心片段 (pZP3β″)经DNA测序验证后 ,通过引入其两端的EcoRI和SalI酶切位点被定向插入 pBV2 2 1质粒PRPL 启动子下游的多克隆区。SDS PAGE分析表明 :工程菌在热诱导后能特异地表达pZP3β蛋白 ,并能在蛋白印迹实验中被兔抗 pZPIgGs识别。