lncRNA PAX8-AS1对结直肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭的作用及其机制

目的:探讨长链非编码RNA配对盒8反义RNA 1(PAX8-AS1)在人结直肠癌(CRC)组织中的表达水平及其对CRC细胞增殖、凋亡及侵袭的作用,并阐明其作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测94例CRC患者癌组织和癌细胞中PAX8-AS1 mRNA和miR-22-3p表达水平。将PAX8-AS10 siRNA小分子序列与miR-22-3p inhibitors分别转染或共转染至CRC细胞中,转染后细胞分为si-NC组(转染阴性序列)、si-PAX8-AS1组(转染PAX8-AS1 siRNA)、si-PAX8-AS1+inhibitors NC组(共转染PAX8-AS1 siRNA和inhibitors NC)和si-PAX8-AS1+inhibitors组(共转染PAX8-AS1 siRNA和miR-22-3p inhibitors),另取未经任何转染的SW480细胞作为对照组。RTqPCR法检测转染后各组细胞中PAX8-AS1 mRNA和miR-22-3p表达水平,MTT法检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭率,Western blotting法检测各组细胞中B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和cleaved Caspase-3蛋白表达水平,双荧光素酶报告基因实验验证PAX8-AS1与miR-22-3p的靶向关系。结果:RT-qPCR法检测,与癌旁组织比较,癌组织中PAX8-AS1 mRNA表达水平明显升高(P<0.01),miR-22-3p表达水平明显降低(P<0.01);与人正常结肠上皮细胞NCM460比较,SW480、SW620、HT-29和LoVo细胞中PAX8-AS1 mRNA表达水平均明显升高(P<0.05或P<0.01),miR-22-3p表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组和si-NC组比较,si-PAX8-AS1组细胞中PAX8-AS1 mRNA表达水平明显降低(P<0.01),miR-22-3p表达水平明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞中miR-22-3p表达水平明显升高(P<0.01)。MTT法检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组、si-PAX8-AS1+inhibitors NC组和si-PAX8-AS1+inhibitors组细胞培养48和72 h时细胞增殖活性均明显降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞培养48和72 h时细胞增殖活性均明显降低(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1组和si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。Transwell小室实验检测,与对照组比较,si-PAX8-AS1组细胞迁移和侵袭率明显降低(P<0.01);与si-NC组比较,si-PAX8-AS1组和si-PAX8-AS1+inhibitors NC组细胞迁移和侵袭率明显降低(P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组和si-NC组比较,si-PAX8-AS1组细胞中Bax和cleaved Caspase-3蛋白表达水平明显升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.05)。TargetScan预测PAX8-AS1与miR22-3p存在靶向结合位点。双荧光素酶报告基因实验,与共转染mimics NC的细胞比较,miR-22-3p mimics共转染后PAX8-AS1-WT细胞中荧光素酶活性明显降低(P<0.01)。结论:PAX8-AS1在人CRC组织中高表达,沉默PAX8-AS1可抑制CRC细胞增殖、迁移和侵袭,并诱导细胞凋亡,其机制可能与上调miR22-3p表达有关。

长链非编码RNA配对盒基因8反义RNA1在恶性肿瘤中的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的RNA转录本。配对盒基因8反义RNA1(PAX8-AS1)是lncRNA的一种,在甲状腺癌、乳腺癌、子宫内膜癌、急性白血病、肾上腺皮质癌等多种恶性肿瘤中异常表达,通过作为竞争性内源RNA和其单核苷酸多态性等机制调节癌细胞的增殖、凋亡、侵袭和耐药性,对癌症的诊断、治疗及预后具有非常重要的价值。本文就lncRNA PAX8-AS1在恶性肿瘤中的作用机制及潜在应用进行综述。

膀胱癌组织中PAX8、PITX1表达及其与临床特征、预后的关系

目的:探讨膀胱癌组织中配对盒基因8(PAX8)、垂体同源框1(PITX1)表达及其与临床特征、预后的关系。方法:选取2015年6月—2017年6月93例膀胱癌患者于潜江市中心医院手术时取得的膀胱癌组织标本作为膀胱癌组,对应癌旁组织标本作为癌旁组。检测膀胱癌组及癌旁组PAX8、PITX1表达情况,分析膀胱癌患者临床特征,比较两组PAX8、PITX1阳性率,比较不同临床特征膀胱癌患者膀胱癌组织PAX8、PITX1阳性率,分析膀胱癌患者随访期间预后情况,并对其进行单因素及多因素分析。结果:膀胱癌组PAX8阳性率高于癌旁组,PITX1阳性率低于癌旁组,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、Ⅲ期、浸润深度为T_(3)~T_(4)、有淋巴结转移的膀胱癌患者膀胱癌组织PAX8阳性率、PITX1阴性率均高于中/高分化、Ⅰ~Ⅱ期、浸润深度为T_(1)~T_(2)、无淋巴结转移的膀胱癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。93例膀胱癌患者连续随访5年后,41例患者死亡,52例患者存活,存活率为55.91%(52/93)。膀胱癌组织PAX8阴性表达患者的5年生存率明显高于PAX8阳性表达患者,膀胱癌组织PITX1阳性表达患者的5年生存率明显高于PITX1阴性表达患者,中/高分化、无淋巴结转移的膀胱癌患者5年生存率明显高于低分化、有淋巴结转移的膀胱癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。低分化、淋巴结转移、PAX8阳性表达、PITX1阴性表达均是膀胱癌患者死亡的危险因素(P<0.05)。结论:膀胱癌患者PAX8呈高表达、PITX1呈低表达,二者可以作为预测膀胱癌患者预后的生物学指标。

促甲状腺激素受体与TTF-1、Pax-8在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨促甲状腺激素受体(TSHR)、甲状腺特异性转录因子-1(TTF-1)、成框基因8编码的转录因子(Pax-8)在甲状腺乳头状癌(PTC)、桥本氏病(HT)合并甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿(NG)与正常甲状腺组织中的表达及意义。方法收集2018年9月至2019年6月在某院内分泌科确诊并在甲状腺外科行手术治疗的甲状腺组织,包括单纯PTC 16例、HT合并PTC 24例,NG 32例及癌旁正常甲状腺组织40例。将术中获得的甲状腺组织进行脱水、透明、包埋处理,分别行TSHR、TTF-1、Pax-8的免疫组织化学染色,显微镜下观察染色结果。采用χ^2检验进行多组间率的比较,差别有统计学意义时采用χ^2分割做两两比较。结果1)TSHR、TTF-1在甲状腺组织的强阳性表达在4组间的差别均有统计学意义(P<0.001,P=0.004),Pax-8在甲状腺组织的强阳性表达在4组间的差别无统计学意义(P=0.642)。2)调整检验水准α′=0.008,进一步两两比较发现:TSHR在PTC组的强阳性表达低于在NG组与癌旁正常组织(P<0.001,P=0.002),在HT合并PTC组的强阳性表达低于在NG组(P=0.001),TTF-1在HT合并PTC组的强阳性表达低于在NG组(P=0.002);其他组两两比较均无统计学意义(P>0.008)。3)在全部PTC组织中,TSHR、TTF-1的阳性表达与性别、年龄、肿瘤直径、淋巴结转移等均无关;Pax-8的阳性表达在有淋巴结转移者低于无淋巴结转移者(P=0.030),与性别、年龄、肿瘤直径无关。结论TSHR与TTF-1在PTC中的强阳性表达低于NG和癌旁正常甲状腺组织,Pax-8在不同类型甲状腺组织中表达无差别。Pax-8在PTC组织中的低表达易出现淋巴结转移。

TSHR,ki-67,TTF-1,Pax-8在甲状腺乳头状癌中的表达和意义

目的观察促甲状腺激素受体(TSHR)、增殖细胞相关核抗原指数(ki-67)、甲状腺特异性转录因子-1(TTF-1)、成框基因8编码的转录因子(Pax-8)在单纯甲状腺乳头状癌(PTC)、桥本氏病(HT)合并甲状腺乳头状癌、结节性甲状腺肿(NG)以及正常甲状腺组织中的表达及意义。方法选取2018年9月~2019年6月在我院内分泌科确诊并在甲状腺外科行手术治疗的患者,包括单纯甲状腺乳头状癌16例、桥本氏病合并甲状腺乳头状癌24例,结节性甲状腺肿32例及癌旁正常甲状腺组织40例。将甲状腺组织进行脱水、透明、包埋处理,分别行TSHR,TTF-1,Pax-8,ki-67的免疫组织化学染色。显微镜下观察染色结果,TSHR判读采用Tanaka定量积分法,ki-67,TTF-1,Pax-8判读方法参见文献。应用SPSS21.0软件对数据进行统计学分析,有序多分类变量采用Wilcoxon秩和检验。结果 TSHR与TTF-1在PTC组中的表达低于在NG组(P=0.000,P=0.002)中的表达,且与是否同时患有HT无关(P=0.537,P=0.556);ki-67在PTC组中的表达显著高于在NG组中的表达(P=0.000),且有淋巴结转移的PTC中,ki-67的表达更高(P=0.004),与是否患有HT无关(P=0.285);Pax-8的表达在各组中无显著差异。结论 TSHR与TTF-1在PTC中的表达低于NG和癌旁正常甲状腺组织,ki-67在PTC中的表达高于NG和癌旁正常甲状腺组织,Pax-8在不同类型甲状腺组织中表达无显著差异。