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PLUNC基因启动子区多态位点C-1888T与变应性鼻炎易感性
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作者 王瑢 佘志强 张少杰 《广东医学》 CAS 2023年第9期1132-1136,共5页
目的分析变应性鼻炎患者中腭、肺及鼻咽上皮克隆(palate,lung and nasal epithelium clone,PLUNC)基因表达变化,探讨PLUNC基因启动子区多态位点C-1888T是否与变应性鼻炎的易感/风险相关。方法选取2021年1月至2022年2月在广西中医药大学... 目的分析变应性鼻炎患者中腭、肺及鼻咽上皮克隆(palate,lung and nasal epithelium clone,PLUNC)基因表达变化,探讨PLUNC基因启动子区多态位点C-1888T是否与变应性鼻炎的易感/风险相关。方法选取2021年1月至2022年2月在广西中医药大学附属瑞康医院就诊治疗的变应性鼻炎患者225例,同时选取150例正常人为对照组,抽取外周血,比较PLUNC基因在两组人群中的表达差异;鉴定变应性鼻炎患者C-1888T多态位点3种基因型,检测不同基因型的表达频率及不同基因型中PLUNC基因的mRNA表达水平。结果变应性鼻炎患者外周血中PLUNC基因的表达较正常人群降低(P=0.000);C-1888T多态位点TT基因型及T等位基因频率显著高于对照组,且TT型外周血PLUNC基因mRNA表达水平显著低于CC型及CT型,差异有统计学意义(P=0.000)。结论变应性鼻炎患者PLUNC基因表达水平下调,C-1888T多态位点为TT型的个体更易患变应性鼻炎(OR=9.375,P=0.000)。 展开更多
关键词 腭、肺及鼻咽上皮克隆基因 变应性鼻炎 单核苷酸多态性 易感性
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修饰GLP2分泌性表达载体的构建及促增殖活性测定的实验研究 被引量:3
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作者 谭虎 杨天德 +5 位作者 粟永萍 艾国平 黄岚 陶军 刘晓宏 楼淑芬 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第17期1650-1653,共4页
目的对胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptid-2,GLP-2)进行基因修饰,观察其促细胞增殖活性。方法通过RT-PCR方法获得含GLP2编码序列的高血糖素原cDNA片段;通过PCR重叠延伸技术得到GLP2信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将编码GLP2成熟肽N-... 目的对胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptid-2,GLP-2)进行基因修饰,观察其促细胞增殖活性。方法通过RT-PCR方法获得含GLP2编码序列的高血糖素原cDNA片段;通过PCR重叠延伸技术得到GLP2信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将编码GLP2成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)突变为编码甘氨酸的序列(GGT);将其插入真核表达质粒pVITRO3,转染至肠上皮细胞(Caco-2),观察其对细胞增殖活性的影响。结果克隆的修饰GLP2基因与国外报道的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列完全一致,并成功拼接GLP2的信号肽及成熟肽;且加入pVITRO3-GLP2-Caco-2培养上清的细胞生长明显快于对照组。结论PCR重叠延伸技术适用于分泌性载体构建。构建的修饰GLP2表达系统所表达的蛋白具有促进肠上皮细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 胰高血糖素样肽-2 基因克隆 PCR重叠延伸技术 肠上皮 细胞增殖
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巴什拜羊重组SPLUNC1蛋白对体外培养的绵羊肺炎支原体生长的影响 被引量:6
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作者 张晓丽 高宝德 +2 位作者 刘海燕 张彦兵 孙延鸣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期361-365,共5页
为研究重组巴什拜羊短腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(rSPLUNC1)对体外培养的绵羊肺炎支原体(MO)生长的影响,本研究以不同浓度(10μg/mL、20μg/mL及40μg/mL)的rSPLUNC1添加于MO培养液中进行培养,并采用平板菌落计数和荧光定量PCR方法检测... 为研究重组巴什拜羊短腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(rSPLUNC1)对体外培养的绵羊肺炎支原体(MO)生长的影响,本研究以不同浓度(10μg/mL、20μg/mL及40μg/mL)的rSPLUNC1添加于MO培养液中进行培养,并采用平板菌落计数和荧光定量PCR方法检测其对MO的增殖水平。结果显示:平板菌落计数中,3个rSPLUNC1浓度组菌落数分别比对照组减少37.25%(p<0.01)、48.74%(p<0.01)及67.23%(p<0.01);荧光定量PCR检测结果显示,2 h后实验组MO 16S rRNA拷贝数降低,4 h时拷贝数最低,3个rSPLUNC1浓度组的拷贝数比对照组降低2.96%(p>0.05)、92.57%(p<0.01)、93.75%(p<0.01)。研究表明,rSPLUNC1对体外培养的MO具有显著的抑制作用。 展开更多
关键词 巴什拜羊 短腭、肺及鼻咽上皮克隆1 绵羊肺炎支原体 平板菌落计数 荧光定量PCR
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SPLUNC1基因在人体组织中的表达分布特征 被引量:6
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作者 王爽 李文路 +1 位作者 吕丽春 姚开泰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期617-621,共5页
目的探讨人SPLUNC1基因在人体组织中的表达分布特征。方法采用原位杂交方法检测人体37种组织中SPLUNC1基因的细胞学定位。结果原位杂交结果显示:SPLUNC1在上腭、表皮、食管及食管-贲门部的鳞状上皮,鼻咽部、气管、宫颈部化生的鳞状上皮... 目的探讨人SPLUNC1基因在人体组织中的表达分布特征。方法采用原位杂交方法检测人体37种组织中SPLUNC1基因的细胞学定位。结果原位杂交结果显示:SPLUNC1在上腭、表皮、食管及食管-贲门部的鳞状上皮,鼻咽部、气管、宫颈部化生的鳞状上皮及食管和肺的鳞状细胞癌中均不表达;在胃粘膜、胆囊、空肠、结肠、子宫内膜及腺体和宫颈部的单层柱状上皮细胞中也不表达;主要表达在鼻咽、气管和支气管的假复层纤毛柱状上皮中,且沿呼吸道从上至下,该基因表达逐渐减弱,在肺组织中检测不到其表达。在腮腺、下颌下腺的导管和浆液腺细胞、鼻咽和肺等部位的粘膜下浆液腺细胞、胃粘膜固有层壁细胞及乳腺小叶和导管上皮中表达SPLUNC1,但粘液性腺上皮细胞中不表达。此外,在肺、胃、结肠、乳腺、子宫内膜和宫颈等部位的腺癌组织中,SPLUNC1基因均呈强阳性表达。结论 SPLUNC1基因的表达具有明显的细胞特异性,其表达分布特征可能与细胞功能有关。 展开更多
关键词 SPLUNC1 原位杂交 鳞状上皮 柱状上皮 浆液性腺体
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LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞HNE1生长增殖的抑制作用研究 被引量:2
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作者 杨一新 杨云波 +4 位作者 李小玲 彭聪 郭勤 沈守荣 李桂源 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第4期366-374,共9页
LPLUNC1在正常的鼻咽组织及人胚鼻咽组织中高表达,而在71%的鼻咽癌中表达下调或缺失,是与鼻咽癌的发生发展密切相关的新基因.通过研究LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞系HNE1的影响,进一步确定其与鼻咽癌发生发展的关系.将LPLUNC1基因全长cDNA... LPLUNC1在正常的鼻咽组织及人胚鼻咽组织中高表达,而在71%的鼻咽癌中表达下调或缺失,是与鼻咽癌的发生发展密切相关的新基因.通过研究LPLUNC1基因对鼻咽癌细胞系HNE1的影响,进一步确定其与鼻咽癌发生发展的关系.将LPLUNC1基因全长cDNA克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,通过脂质体介导稳定转染入LPLUNC1低表达鼻咽癌细胞系HNE1中,通过RT-PCR及RNA印迹筛选LPLUNC1高表达的细胞株,并利用细胞生长曲线、MTT、BrdU掺入、流式细胞仪检测、软琼脂集落形成实验及裸鼠成瘤等实验,研究了LPLUNC1对鼻咽癌细胞系HNE1细胞生长、增殖的影响.结果发现,稳定转染LPLUNC1的HNE1细胞的生长速度明显减慢,在MTT与BrdU掺入实验发现LPLUNC1可明显地抑制鼻咽癌细胞的增殖,并且通过流式细胞仪检测也发现,LPLUNC1基因可明显延缓HNE1细胞的细胞周期进程,使G0/G1期细胞增多而S期细胞相对减少.进一步通过软琼脂集落形成及裸鼠成瘤实验发现,LPLUNC1稳定转染后的HNE1细胞集落形成率与集落的大小均小于空白载体细胞,同时能明显地抑制HNE1细胞的体外成瘤.结果表明,LPLUNC1基因能明显抑制鼻咽癌细胞HNE1的生长增殖,是鼻咽癌发生发展中的重要候选抑瘤基因之一. 展开更多
关键词 LPLUNC1基因 鼻咽癌 HNE1 基因转染 基因功能
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色素上皮细胞衍生因子原核表达重组体的构建 被引量:1
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作者 杨楠 马颖哲 +1 位作者 张桂荣 杨翰仪 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期512-514,共3页
目的构建色素上皮细胞衍生因子(PEDF)原核表达重组体。方法从胚胎绒毛中提取总RNA,经RTPCR扩增,获得编码人PEDF的全基因序列,采用TA克隆法,将PEDF基因克隆入pMD18T载体中并转化入E.coliJM109,经DNA测序正确后构建原核表达重组体pET28aPE... 目的构建色素上皮细胞衍生因子(PEDF)原核表达重组体。方法从胚胎绒毛中提取总RNA,经RTPCR扩增,获得编码人PEDF的全基因序列,采用TA克隆法,将PEDF基因克隆入pMD18T载体中并转化入E.coliJM109,经DNA测序正确后构建原核表达重组体pET28aPEDF,转化E.coliDH5a。结果经酶切及DNA测序鉴定,获得了PEDF原核表达重组体pET28aPEDF。结论构建了PEDF原核表达重组体pET28aPEDF,为获得重组PEDF奠定了基础。 展开更多
关键词 色素上皮细胞衍生因子 克隆 载体
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重组SPLUNC1抑菌及调节NE活性的研究 被引量:1
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作者 张晓丽 高宝德 +3 位作者 刘海燕 杜智慧 王继雪 孙延鸣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期823-826,共4页
为研究重组绵羊短腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(rSPLUNC1)的抑菌活性及对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性的调节作用,本实验采用微量稀释法测定rSPLUNC1对巴氏杆菌、大肠杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌生长的抑制作用;采用显色底物检测... 为研究重组绵羊短腭、肺及鼻咽上皮克隆1蛋白(rSPLUNC1)的抑菌活性及对中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)活性的调节作用,本实验采用微量稀释法测定rSPLUNC1对巴氏杆菌、大肠杆菌、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌生长的抑制作用;采用显色底物检测法测定rSPLUNC1对NE活性的调节作用。抑菌检测结果表明10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL rSPLUNC1能够极显著地抑制巴氏杆菌、大肠杆菌的生长(p<0.01),并且呈剂量效应;显色底物检测结果表明10μg/mL和20μg/mL^40μg/mL rSPLUNC1可以显著和极显著地提高绵羊肺炎支原体(Mo)感染的外周中性粒细胞NE的活性(p<0.05,p<0.01)。表明rSPLUNC1能够抑制革兰氏阴性菌的生长并提高NE活性,可能有助于机体抵御呼吸道的感染。 展开更多
关键词 短腭、肺及鼻咽上皮克隆1 微量稀释法 中性粒细胞弹性蛋白酶
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重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体的盘羊杂交羊的免疫调节作用研究 被引量:1
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作者 刘海燕 王继雪 +3 位作者 赵宁 杨义 袁婷 孙延鸣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期426-430,共5页
为研究重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊免疫调节作用,本研究将6只巴什拜羊分为A组,18只盘羊杂交羊随机分为B、C、D组,对实验羊人工感染MO后第5 d,C组气管注射巴什拜羊重组SPLUNC1蛋白、D组气管注射盘羊杂交羊重... 为研究重组SPLUNC1蛋白对感染绵羊肺炎支原体(MO)后的盘羊杂交羊免疫调节作用,本研究将6只巴什拜羊分为A组,18只盘羊杂交羊随机分为B、C、D组,对实验羊人工感染MO后第5 d,C组气管注射巴什拜羊重组SPLUNC1蛋白、D组气管注射盘羊杂交羊重组SPLUNC1蛋白,每天150μg/只;A、B组每天气管注射等量的生理盐水作为对照组。采用ELISA方法检测各组羊血清中MO抗体水平以及IL-8、IL-12、IL-13表达水平。结果显示,感染前所有实验羊MO抗体均为阴性,感染后第14 d所有实验羊MO抗体均为阳性;IL-8水平在感染后第14 d^21 d,A、C、D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01)。IL-12水平在感染后第14 d,A、C和D组极显著和显著地低于B组(p<0.01;p<0.05;p<0.01),第21 d时,A、C和D组极显著低于B组(p<0.01)。IL-13水平在感染后第5 d,A组显著低于B、C和D组(p<0.05),在第7 d^21 d,A、C、D组显著和极显著低于B组(p<0.05;p<0.01;p<0.01)。实验数据表明重组SPLUNC1蛋白对盘羊杂交羊具有明显的免疫调节作用。本研究为绵羊支原体肺炎的治疗提供了实验依据。 展开更多
关键词 短腭、肺及鼻咽上皮克隆基因1 盘羊杂交羊 绵羊肺炎支原体 ELISA
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RACE法克隆湖羊SPLUNC1基因及序列分析 被引量:1
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作者 陈凯丽 孙延鸣 +2 位作者 沈文 陈冬梅 郭海英 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期8-13,共6页
通过克隆湖羊短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)基因的cDNA序列,为研究其蛋白的结构和功能奠定基础。参照GenBank上牛、山羊的SPLUNC1基因的cDNA序列,设计简并引物,分别扩增出5′和... 通过克隆湖羊短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)基因的cDNA序列,为研究其蛋白的结构和功能奠定基础。参照GenBank上牛、山羊的SPLUNC1基因的cDNA序列,设计简并引物,分别扩增出5′和3′端目的片段,测序后进行拼接,获得湖羊SPLUNC1基因cDNA全长序列,并对序列进行分析。结果表明:克隆的湖羊SPLUNC1基因cDNA序列全长为1 091bp(GenBank登录号KJ749828),其中开放阅读框为768bp,共编码255个氨基酸。构建的氨基酸进化树结果显示湖羊SPLUNC1与预测绵羊的氨基酸同源性最高,山羊次之。 展开更多
关键词 湖羊 短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1基因 CDNA末端快速扩增 序列分析
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鼻息肉组织中核转录因子-κB、Toll样受体2及上皮克隆蛋白的表达及其意义 被引量:1
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作者 叶贝华 傅明 +1 位作者 蒋迪 黎润球 《宁夏医科大学学报》 2020年第7期673-677,共5页
目的探讨鼻息肉组织中核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR2)和腭、肺及鼻咽上皮克隆蛋白(PLUNC)的表达及其意义。方法采用回顾性研究,收集本院90例鼻息肉组织标本(病例组),另收集45例正常鼻甲黏膜组织标本(对照组)。采用苏木精-... 目的探讨鼻息肉组织中核转录因子-κB(NF-κB)、Toll样受体2(TLR2)和腭、肺及鼻咽上皮克隆蛋白(PLUNC)的表达及其意义。方法采用回顾性研究,收集本院90例鼻息肉组织标本(病例组),另收集45例正常鼻甲黏膜组织标本(对照组)。采用苏木精-伊红染色检测两组嗜酸性粒细胞浸润程度,根据免疫组化法检测两组NF-κB p65、TLR2及PLUNC的分布及其表达水平,对病例组鼻息肉组织中NF-κB p65、TLR2及PLUNC的表达情况进行相关性分析。结果相比对照组,病例组鼻息肉组织中嗜酸性粒细胞阳性率升高(P<0.01)。病例组鼻息肉组织中NF-κB p65和TLR2表达阳性率高于对照组,PLUNC表达阳性率低于对照组(P<0.001)。鼻息肉组织中TLR2与NF-κB p65表达呈正相关,PLUNC与NF-κB p65、TLR2均呈负相关(P均<0.05)。结论鼻息肉组织中NF-κB p65、TLR2表达升高、PLUNC表达降低,三者表达强度有关。 展开更多
关键词 鼻息肉 鼻甲黏膜 核转录因子-ΚB TOLL样受体2 腭、肺及鼻咽上皮克隆蛋白
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猪色素上皮衍生因子的电子克隆及序列分析
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作者 陈玉栋 李宝红 《信阳师范学院学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2006年第3期284-289,共6页
用鼠的色素上皮衍生因子cDNA序列在猪的ESTs库进行BLASTn搜索,得到一系列不同大小的ESTs片段,经拼接得到完整cDNA序列.序列分析显示该cDNA长1 425 bp,有一个1 242 bp的开放阅读框,编码413个氨基酸,5’非编码区长53 bp,3’非编码区长130 ... 用鼠的色素上皮衍生因子cDNA序列在猪的ESTs库进行BLASTn搜索,得到一系列不同大小的ESTs片段,经拼接得到完整cDNA序列.序列分析显示该cDNA长1 425 bp,有一个1 242 bp的开放阅读框,编码413个氨基酸,5’非编码区长53 bp,3’非编码区长130 bp,有一个加尾序列和多聚腺苷酸尾巴.其核苷酸序列与牛、人和鼠的同源性分别为89%、87%和82%,氨基酸的同源性分别为89%、87%和84%,且有保守的糖基化位点、半胱氨酸位点和serp in基序,说明所克隆的cDNA序列为猪的PEDF全长cDNA. 展开更多
关键词 色素上皮衍生因子 电子克隆 表达序列标签
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应用改良的mRNA差异展示法克隆人鼻咽上皮特异性表达的cDNA片段
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作者 黎众魁 姚开泰 《生命科学研究》 CAS CSCD 1998年第3期182-188,共7页
本文对mRNA差异展示法进行了改良.利用一组随机引物与来源于mRNA翻译起始位点区域的引物组合进行RT-PCR,使差异展示的片段来源于蛋白编码区,并对差异展示的条件进行了优化.应用此法对人鼻咽上皮与软腭口腔粘膜上皮的... 本文对mRNA差异展示法进行了改良.利用一组随机引物与来源于mRNA翻译起始位点区域的引物组合进行RT-PCR,使差异展示的片段来源于蛋白编码区,并对差异展示的条件进行了优化.应用此法对人鼻咽上皮与软腭口腔粘膜上皮的基因表达进行了比较研究,得到了10个在鼻咽上皮特异表达的cDNA片段,并对其中的5个片段进行了亚克隆和序列分析.通过与GeneBank数据库中的序列进行同源性比较,确定其中两个片段为未知新序列,Northern杂交证实其中一个片段NES1为鼻咽上皮特异性表达片段. 展开更多
关键词 mRNA差异展示法 人鼻咽上皮 亚克隆 组织特异性表达
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Castration-induced expression of caspase-1 in epithelia of accessory sex organs in male rats 被引量:1
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作者 Masao Izawa Mitunori Kimura +1 位作者 Tomiko Yamada Makoto Saji 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2001年第2期105-108,共4页
Aim: As an attempt to clarify the molecular basis of castration-induced apoptosis, this study was undertaken todemonstrate the expression of caspase-1 in male accessory sex organs of rats. Methods and results; cDNA of... Aim: As an attempt to clarify the molecular basis of castration-induced apoptosis, this study was undertaken todemonstrate the expression of caspase-1 in male accessory sex organs of rats. Methods and results; cDNA of ratcaspase-1 was cloned by reverse transcription-polymerase chain reaction from the ventral prostates. The open readingframe predicts 402 amino acids, which shows more than 91% and 63% identity to those of mouse and human, respec-tively. Northern analyses demonstrated the presence of castration-induced up-regulation of the 1.6 kb transcript in theventral prostate and the seminal vesicles. Finally, the authors demonstrated the caspase-1 transcripts in the epithelia ofthese tissues by in situ hybridization analyses. Conclusion; Castration induces the expression of caspase-1 tran-scripts in the epithelia of ventral prostate and seminal vesicle. These observations suggest a possible role of caspase-1 inapoptosis in male accessory sex organs. 展开更多
关键词 prostate seminal vesicles tissue involution apoptosis CASPASE-1 cDNA cloning CASTRATION epithelium rats
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复发性鼻息肉患者PLUNC、TLR2和HO-1蛋白表达及意义 被引量:3
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作者 司远征 张俊 马赛 《中国实验诊断学》 2018年第6期960-963,共4页
目的探讨复发性鼻息肉患者腭、肺及鼻咽上皮克隆(PLUNC)蛋白、Toll样受体2(TLR-2)蛋白和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达及意义。方法选取2016年1月至2017年10月在我院治疗的鼻息肉患者75例,其中初发性鼻息肉患者40例(初发组)、复发性鼻... 目的探讨复发性鼻息肉患者腭、肺及鼻咽上皮克隆(PLUNC)蛋白、Toll样受体2(TLR-2)蛋白和血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白表达及意义。方法选取2016年1月至2017年10月在我院治疗的鼻息肉患者75例,其中初发性鼻息肉患者40例(初发组)、复发性鼻息肉患者35例(复发组),同时选取40例正常中鼻甲黏膜者作为对照组,采用免疫组织化学法检测PLUNC、TLR2和HO-1蛋白表达情况。结果复发组PLUNC蛋白阳性表达率为17.14%,明显低于初发组和对照组(P<0.05);初发组PLUNC蛋白阳性表达率为45.00%,明显低于对照组(P<0.05);复发组TLR-2和HO-1蛋白阳性表达率为91.43%和85.71%,明显高于初发组和对照组(P<0.05);初发组TLR-2和HO-1蛋白阳性表达率为52.50%和55.00%,明显高于对照组(P<0.05);PLUNC与TLR2、HO-1蛋白表达呈负相关(rs=-0.622和-0.534,P<0.05),TLR2和HO-1蛋白表达呈正相关(rs=0.466,P<0.05)。结论鼻息肉患者PLUNC蛋白表达下调,而TLR2和HO-1蛋白表达上调,3种蛋白的表达与鼻息肉复发有一定的相关性,且三者之间存在相关关系。 展开更多
关键词 腭肺鼻上皮克隆 TOLL样受体2 血红素加氧酶-1 鼻息肉 复发
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色素上皮衍生因子的分段克隆表达对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的影响
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作者 张志彬 彭胜男 +4 位作者 刘藕根 张颖鹏 李春明 彭亚婷 张淑兰 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2019年第10期1014-1018,共5页
目的有关色素上皮衍生因子(PEDF)短肽对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的研究鲜有报道。文中旨在获得PEDF蛋白的分段克隆表达,并观察对人皮肤鳞状细胞癌细胞系(SCL-1)细胞增殖的影响。方法采用PCR扩增PEDF1、PEDF2和PEDF3目的基因,将回收的... 目的有关色素上皮衍生因子(PEDF)短肽对人皮肤鳞状细胞癌细胞增殖的研究鲜有报道。文中旨在获得PEDF蛋白的分段克隆表达,并观察对人皮肤鳞状细胞癌细胞系(SCL-1)细胞增殖的影响。方法采用PCR扩增PEDF1、PEDF2和PEDF3目的基因,将回收的片段用NheI/HindⅢ酶切,插入至pET28a(+)载体。连接产物转化入大肠埃希菌BL21并诱导表达,并把融合蛋白的进行分离、纯化。采用CCK-8方法检测24 h、48 h及72 h,不同浓度100、400、800和1000 nmol/L PEDF1、PEDF2和PEDF3肽段对SCL-1细胞增殖影响。结果成功构建PEDF1、PEDF2和PEDF3的原核表达载体,PEDF1、PEDF2和PEDF3融合蛋白,相对分子质量约为18 000、17 000和13 000。24 h时,800 nmol/L、1000 nmol/L浓度PEDF3 SCL-1细胞增殖[(0.61±0.03)、(0.78±0.07)]较0 nmol/L PEDF3(1.00±0.00)明显降低(P<0.05);48 h时,400、800、1000nmol/L浓度PEDF3SCL-1细胞增殖呈现显著抑制,并呈剂量依赖性(P<0.05);72 h时,800、1000 nmol/L浓度PEDF3 SCL-1细胞增殖[(0.53±0.05)、(0.51±0.05)]较400、0 nmol/L[(0.60±0.05)、(1.00±0.00)]显著降低(P<0.05)。结论成功分段克隆表达PEDF融合蛋白,PEDF3抑制了SCL-1细胞增殖,为进一步筛选PEDF活性功能短肽提供了基础。 展开更多
关键词 色素上皮衍生因子 人皮肤鳞状细胞癌 分段克隆 细胞增殖
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脂多糖诱导SPLUNC1基因的表达 被引量:1
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作者 肖丁良 钟礼立 高喜容 《实用检验医师杂志》 2017年第3期170-172,共3页
目的了解脂多糖(LPS)对人支气管上皮细胞(HBECs)增殖的影响,通过观察不同浓度脂多糖(LPS)不同时间诱导HBECs的短上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)基因表达情况,探讨SPLUNC1在呼吸道感染中的作用。方法采用0.01、0.1、1.0、10 mg/L LPS... 目的了解脂多糖(LPS)对人支气管上皮细胞(HBECs)增殖的影响,通过观察不同浓度脂多糖(LPS)不同时间诱导HBECs的短上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(SPLUNC1)基因表达情况,探讨SPLUNC1在呼吸道感染中的作用。方法采用0.01、0.1、1.0、10 mg/L LPS诱导HBECs,通过噻唑蓝(MMT)法检测LPS对HBECs增殖的影响,诱导HBECs 2、4、8、16、24 h后通过实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测SPLUNC1基因表达情况,结果以SPLUNC1/GAPDH基因拷贝数比值表示。结果 0.01、0.1、1.0、10 mg/L的LPS均可抑制HBECs的生长[吸光度(A值):0.48±0.03、0.37±0.01、0.30±0.03、0.27±0.02,相对生长指数:94.12%、72.55%、58.82%、52.94%],并能诱导SPLUNC1基因表达上调;在同一浓度组,LPS刺激细胞2 h后SPLUNC1基因表达开始上调,随着时间延长逐渐升高,呈时间依赖性[0.01 mg/L组2、4、8、16、24 h分别为0.19±0.03、0.24±0.04、0.26±0.03、0.44±0.05、0.51±0.07;0.1 mg/L组分别为0.43±0.02、0.52±0.05、0.60±0.06、0.63±0.08、0.68±0.05;1.0 mg/L组分别为0.44±0.02、0.48±0.02、0.50±0.03、0.58±0.05、0.70±0.06;10 mg/L组分别为0.34±0.03、0.38±0.04、0.68±0.05、0.96±0.08、0.98±0.07],不同时间点组间比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论 LPS可抑制HBECs的生长,能诱导HBEC细胞SPLUNC1基因表达上调,并在一定浓度范围内表达呈时间依赖性,推测SPLUNC1可能参与细菌感染最初的防御。 展开更多
关键词 脂多糖 人支气管上皮细胞 短上腭、肺及鼻咽上皮克隆1
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LPS对A549和Hela细胞SPLUNC1蛋白表达的影响
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作者 曹留霞 武涧松 陈洁 《武警医学》 CAS 2019年第9期752-755,759,共5页
目的探讨脂多糖(LPS)对人肺腺癌上皮A549细胞和人子宫颈癌上皮Hela细胞短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)蛋白表达的影响。方法将两类细胞各随机分为对照组、实验组,CCK-8法观察LP... 目的探讨脂多糖(LPS)对人肺腺癌上皮A549细胞和人子宫颈癌上皮Hela细胞短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate,lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)蛋白表达的影响。方法将两类细胞各随机分为对照组、实验组,CCK-8法观察LPS与细胞增殖活性的时间-反应和剂量-反应关系,筛选各自的最佳效应浓度和作用时间,以LPS最佳效应浓度和作用时间处理后,免疫组化和免疫荧光定量法检测两类细胞SPLUNC1蛋白相对表达量的变化。结果 LPS对A549细胞的最佳效应浓度为20 mg/L,最佳效应时间为12 h,对Hela细胞的最佳效应浓度为40 mg/L,12~24 h为其最佳效应时间窗。SPLUNC1在两类细胞中均呈阳性表达,LPS处理后表达均显著上调(P <0. 05),两类细胞间比较,LPS处理后Hela细胞SPLUNC1相对表达量高于A549细胞(P <0. 05),较对照的增量值(Δ)也明显大于A549细胞(P <0. 05)。结论 SPLUNC1在宫颈癌细胞中存在表达,可能是肺腺癌和宫颈癌病变中的保护性因子,具有潜在的临床应用价值。 展开更多
关键词 短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1 A549细胞 HELA细胞 肿瘤 发病机制
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PLUNC、TLR2及NF-κB在鼻息肉组织中的表达及意义 被引量:8
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作者 丁楠 李春苗 巴云鹏 《临床耳鼻咽喉头颈外科杂志》 CAS 北大核心 2017年第2期130-134,共5页
目的:检测鼻息肉组织及正常下鼻甲黏膜腭肺鼻上皮克隆(PLUNC)、Toll样受体2(TLR2)、核转录因子-κB(NF-κB)的表达情况,分析三者表达的相关性,探讨其在鼻息肉发病机制中的作用及临床意义,为鼻息肉的治疗提供理论依据和新的思路。方法:收... 目的:检测鼻息肉组织及正常下鼻甲黏膜腭肺鼻上皮克隆(PLUNC)、Toll样受体2(TLR2)、核转录因子-κB(NF-κB)的表达情况,分析三者表达的相关性,探讨其在鼻息肉发病机制中的作用及临床意义,为鼻息肉的治疗提供理论依据和新的思路。方法:收集2013-06-2014-12期间郑州大学第一附属医院住院的患者标本。以慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者的息肉组织为实验组(46例),以鼻中隔偏曲矫正术患者的正常下鼻甲黏膜为对照组(19例)。苏木精-伊红染色法测定实验组和对照组嗜酸粒细胞(EOS)浸润情况,免疫组织化学技术测定PLUNC、TLR2及NF-κBp65在实验组及对照组中的表达及其分布,探讨PLUNC、TLR2及NF-κBp65在实验组和对照组中的阳性表达情况及其相关性。结果:实验组EOS浸润程度明显高于对照组(χ~2=12.01,P<0.05)。实验组PLUNC的表达明显低于对照组(χ2=16.09,P<0.05),实验组TLR2、NF-κBp65表达明显高于对照组(χ~2=23.74、χ~2=18.59,P<0.05)。相关性分析显示,实验组PLUNC与TLR2、NF-κBp65呈负相关(r=-0.675、r=-0.550,P<0.05),TLR2与NF-κBp65呈正相关(r=0.540,P<0.05)。EOS浸润程度与TLR2及NF-κBp65呈正相关(r=0.417、r=0.470,P<0.05),与PLUNC呈负相关(r=-0.859,P<0.05)。结论:鼻息肉较正常下鼻甲黏膜组织中PLUNC明显降低,TLR2及NF-κB表达明显升高,提示天然免疫功能的下降,感染性因素的加剧,可能与鼻息肉的发病机制有关。 展开更多
关键词 鼻息肉 腭肺鼻上皮克隆 TOLL样受体2 核转录因子-ΚB
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姜黄素对子宫颈癌Hela细胞凋亡及SPLUNC1蛋白表达的影响 被引量:1
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作者 任妍 高慧婕 +2 位作者 高红刚 王光辉 孔佑华 《中国临床研究》 CAS 2017年第1期11-14,共4页
目的探讨姜黄素对子宫颈癌Hela细胞凋亡及对短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)表达的影响。方法取对数生长期Hela细胞,分别设置对照组(姜黄素0μmol/L)、实验A组(姜黄素4μmol/L)... 目的探讨姜黄素对子宫颈癌Hela细胞凋亡及对短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate lung and nasal epithelium clone 1,SPLUNC1)表达的影响。方法取对数生长期Hela细胞,分别设置对照组(姜黄素0μmol/L)、实验A组(姜黄素4μmol/L)、实验B组(姜黄素8μmol/L)、实验C组(姜黄素16μmol/L)、实验D组(姜黄素32μmol/L)、实验E组(姜黄素64μmol/L)、实验F组(姜黄素128μmol/L),采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定姜黄素对子宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞凋亡形态,异硫氢酸荧光素标记的膜联蛋白V/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测SPLUNC1蛋白的表达。结果与对照组比较,实验各组细胞增殖抑制率均明显增加(P均<0.05),且除实验F组外,细胞增殖抑制率随姜黄素剂量增加而增加,呈剂量依赖性,差异有统计学意义(P均<0.05);其半数抑制浓度(IC50)=43.32μmol/L。对照组细胞形态正常,实验C、D、E组出现了典型的细胞凋亡形态变化,细胞核碎裂、固缩。与对照组比较,实验C、D、E组凋亡率随姜黄素剂量增加而增加,差异有统计学意义(P均<0.05);与对照组比较,实验C、D、E组SPLUNC1蛋白表达随姜黄素剂量增加而下降。结论在一定浓度范围内,姜黄素可明显促进子宫颈癌Hela细胞凋亡,抑制Hela细胞的增殖,其作用可能与下调SPLUNC1的表达相关。 展开更多
关键词 姜黄素 子宫颈癌 HELA细胞 凋亡 短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1
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短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1与耳鼻咽喉科疾病 被引量:1
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作者 刘娟 王德辉 《国际耳鼻咽喉头颈外科杂志》 2011年第4期219-222,共4页
短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate lung and nasal epithelium clone 1,是近年发现的一个特异性表达在呼吸道的天然免疫分子,其结构与杀菌/渗透性增加蛋白(bactericidal/permeability increasing protein, BPI)相似,且... 短的上腭、肺及鼻咽上皮克隆1(short palate lung and nasal epithelium clone 1,是近年发现的一个特异性表达在呼吸道的天然免疫分子,其结构与杀菌/渗透性增加蛋白(bactericidal/permeability increasing protein, BPI)相似,且具有明显的疏水性,在免疫防御中发挥着重要的作用,参与对外界刺激的反应,与耳鼻咽喉科多种疾病包括感染、变态反应和肿瘤等相关。本文将对SPLUNC1在耳鼻咽喉科的新进展做一综述。 展开更多
关键词 短的上腭 肺及鼻咽上皮克隆l(short PALATE lung and nasal epithelium clone 1) 免疫 天然(Immunity Natural) 耳鼻咽喉科学(Otolaryngology)
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