下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌(I-10)细胞凋亡

目的探讨Pannexin2(Panx-2)蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平以及干扰Panx-2表达对顺铂诱导睾丸癌(I-10)细胞凋亡的影响。方法免疫印迹法Panx-2蛋白在睾丸癌细胞中的表达水平;以睾丸癌I-10细胞株为研究对象,实验分为转染试剂对照组(mork组)、阴性对照质粒组(NC组)、干扰Panx-2组(shRNA1质粒组和shRNA2质粒组),采用免疫印迹法验证Panx-2的表达;在转染细胞中添加16μmol/L的顺铂诱导细胞死亡,通过MTT法分别检测细胞在24、48、72 h的存活率,集落克隆法检测细胞的集落形成能力;在顺铂(16μmol/L)处理8 h后,采用AnnexinV/PI双染法检测细胞的早期凋亡;在顺铂(16μmol/L)作用24 h后,免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的表达水平。结果与I-10细胞和Tcam-2细胞相比,I-10/DDP细胞(P<0.001)和Tcam-2/DDP细胞(P<0.01)中Panx-2的表达显著增加;干扰Panx-2基因后,免疫印迹结果显示,与NC组相比,shRNA1和shRNA2组中Panx-2的表达量下降(P<0.05);MTT法显示shRNA1和shRNA2组细胞的存活率均低于NC组(P<0.001);在含顺铂培养基的培养下,集落克隆法显示shRNA1和shRNA2组细胞的集落形成能力低于NC组(P<0.001);AnnexinV/PI双染法显示shRNA1和shRNA2组的早期凋亡率(P<0.01)均低于NC组;免疫印迹结果显示,与NC组相比,shRNA1和shRNA2组中凋亡相关蛋白caspase-3表达升高(P<0.05),Bcl-2表达降低(P<0.01),Bax表达升高(P<0.05)。结论下调Pannexin2通道能增强顺铂诱导睾丸癌(I-10)细胞凋亡。

沉默P2X4受体减少帕金森病细胞模型的凋亡

目的 研究P2X4受体(P2X4R)在帕金森病(PD)细胞模型中的作用。方法 用6-羟基多巴胺(6-OHDA)处理人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y,建立PD细胞模型并检测P2X4R的表达。在SH-SY5Y细胞中沉默P2X4R,采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测凋亡因子和泛连接蛋白1(PANX1)的表达。在PD模型中沉默P2X4R、抑制P2X4R、过表达PANX1,用蛋白质印迹法检测细胞中Toll样受体2(TLR2)蛋白的表达。在PD模型细胞中过表达TLR2,检测细胞活性、细胞凋亡情况和凋亡因子表达。结果 100、150μmol/L 6-OHDA处理后PD模型细胞中P2X4R蛋白和mRNA表达水平均高于对照组(P均<0.05)。P2X4R沉默后PD模型细胞凋亡减少、细胞存活率提高,caspase 3、cleaved caspase 3及PANX1蛋白表达降低(P均<0.05)。沉默P2X4R和抑制P2X4R后PD模型细胞中TLR2蛋白表达均降低(P均<0.05),过表达PANX1后TLR2蛋白表达降低(P<0.05),过表达TLR2后caspase 3和cleaved caspase 3蛋白表达降低(P均<0.05)、细胞存活率提高。结论 P2X4R可能通过调控PANX1及TLR2表达减少PD模型细胞凋亡。

新诊断2型糖尿病患者血清Pannexin-1、Apelin、RBP4、VEGF水平与糖脂代谢和胰岛素抵抗的关系研究

目的:探讨新诊断2型糖尿病患者血清缝隙连接蛋白-1(Pannexin-1)、爱帕琳肽(Apelin)、视黄醇结合蛋白4(RBP4)、血管内皮生长因子(VEGF)水平与糖脂代谢和胰岛素抵抗的关系。方法:选择2018年2月至2020年2月我院诊治的120例新诊断2型糖尿病患者作为糖尿病组,选择同期在我院进行体检的120例健康者作为对照组。检测所有受试者甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)水平、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、Pannexin-1、Apelin、RBP4、VEGF水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、胰岛素敏感性指数(ISI)和胰岛β细胞功能指数(HOMA-β)。分析Pannexin-1、Apelin、RBP4、VEGF水平与糖脂代谢和胰岛素抵抗相关指标的关系,分析影响上述指标表达的相关因素。结果:与对照组相比,糖尿病组体质量指数(BMI)、TG、TC、FPG、FINS、Pannexin-1、Apelin、RBP4、VEGF水平,HOMA-IR明显升高(P<0.05),ISI和HOMA-β明显下降(P<0.05)。新诊断2型糖尿病患者血清Pannexin-1、Apelin、RBP4、VEGF水平与ISI和HOMA-β均呈负相关(P<0.05),与BMI、TG、TC、FPG、FINS、HOMA-IR均呈正相关(P<0.05)。TG与Pannexin-1表达联系密切(β=0.006,P<0.05),ISI和HOMA-IR与Apelin表达联系密切(β=-6.673、0.049,P<0.05),FPG和TC与RBP4表达联系密切(β=22.309、0.506,P<0.05),HOMA-IR与VEGF表达联系密切(β=0.574,P<0.05)。结论:新诊断2型糖尿病患者血清Pannexin-1、Apelin、RBP4、VEGF水平异常升高,并参与新诊断2型糖尿病患者的糖脂代谢和胰岛素抵抗,在2型糖尿病的诊断和预防中有一定临床价值。

血清pannexin-1与2型糖尿病周围神经病变的相关性研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)合并糖尿病周围神经病变(DPN)患者血清缝隙连接蛋白(pannexin)-1水平及临床意义。方法选取2017年6月至2020年6月中南大学湘雅医学院附属海口医院收治的350例T2DM患者纳入研究,根据患者是否合并DPN,将其分为T2DM合并DPN组和T2DM非DPN组,分别为163例和187例,其中,T2DM合并DPN组又分为痛性病变组(PDPN组)和非痛性病变组(NPDPN组),分别71例和92例。另选取体检健康者50名作为对照组。分别采集3组血液标本,检测并比较3组血清pannexin-1水平及相关实验室指标。结果3组血清pannexin-1水平比较差异显著(P均<0.05);T2DM合并DPN组患者血清pannexin-1水平显著高于T2DM非DPN组和对照组(P均<0.05);T2DM非DPN组患者血清pannexin-1水平显著高于对照组(P<0.05);PDPN组患者血清pannexin-1水平显著高于NPDPN组(P<0.001);与对照组比较,T2DM合并DPN组和T2DM非DPN组甘油三酯(TG)、糖化血红蛋白A1c(HbA1c)、空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(Fins)及稳态模型评估-胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)较高,而感觉神经的神经传导速度(NCV)、运动神经NCV及高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)较低(P均<0.05);与T2DM非DPN组比较,T2DM合并DPN组HbA1c和FPG较高,而运动神经NCV较低(P均<0.05);由Spearman分析结果可知,血清pannexin-1与HbA1c、FPG呈正相关(P均<0.05);血清pannexin-1与感觉神经NCV、运动神经NCV呈负相关(P均<0.05);logistic分析结果显示,血清pannexin-1、HbA1c、FPG、运动神经NCV是影响T2DM并发DPN的独立危险因素(P均<0.05)。结论Pannexin-1在T2DM合并DPN患者血清中呈高表达,且其表达水平与DPN患者疼痛程度有关,其有助于T2DM并发DPN的临床诊断。