葡萄柚(Citrus paradisi Macf.)实生苗根段的离体培养及植株再生研究

【目的】建立葡萄柚（Citrus paradisi Macf.）离体再生体系,为后续遗传转化体系的建立奠定基础。【方法】以10个葡萄柚品种种子萌发的无菌苗根段为材料,在附加不同植物激素种类及浓度的培养基上进行离体培养,并获得再生植株。【结果】在MS＋0.5mg/L 6-BA＋0.5mg/L NAA培养基上培养可以诱导出愈伤组织,其中＂帕利斯＂的诱导率最高,达87.95%;在培养基MS＋2.0mg/L 6-BA＋0.5mg/L NAA可分化出丛生芽,其中＂星路比＂分化率最高为37.84%;分化出的丛生芽在MS＋2.0mg/L 6-BA＋0.2mg/L NAA培养基上可以进行增殖培养;在1/2MS＋1.0mg/L IBA上可诱导出不定根,形成完整再生植株。炼苗移栽成活率均可达75.47%-88.40%。【结论】通过对10个葡萄柚品种根段离体再生培养,建立了6个品种的离体再生体系。

Pure Total Flavonoids from Citrus paradisi Macfad InduceLeukemia Cell Apoptosis In Vitro

Objective： To investigate the potential effect of pure total flavonoids from Citrus paradisi Macfad peel（PTFC） on the proliferation and apoptosis of human myeloid leukemia cells Kasumi-1, HL-60 and K562, and the underlying mechanisms. Methods： PTFC was extracted from Citrus paradisi Macfad peel and was identified by high performance liquid chromatography. The effect of PTFC on the proliferation and apoptosis of leukemia cells were determined by 3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-2,5-diphenyltetrazolium bromide, fluorescent microscopy and flow cytometry, respectively. The effect of PTFC on the expression levels of apoptosis-related regulators was determined by Western blot assay. Results： Treatment with PTFC inhibited leukemia cell proliferation in a dose-and time-dependent manner and triggered Kasumi-1 cell apoptosis. Treatment with PTFC significantly increased the levels of activated poly adenosine diphosphate-ribosepolymerase and caspase-3/-9, but reduced the levels of Mcl-1 expression in Kasumi-1 cells. However, PTFC did not obviously induce HL-60 cell apoptosis. Conclusion： PTFC inhibited leukemia cell proliferation and induced their apoptosis by modulating apoptosisrelated regulator expression in leukemia cells in vitro.

羧甲基壳聚糖诱导培养罗伦隐球酵母处理调控采后葡萄柚果实苯丙烷代谢及其抗青霉病作用

为研究羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMCS)诱导培养罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii)处理对采后葡萄柚果实青霉病害的防控作用,以‘里约红’葡萄柚为试材,蒸馏水为对照,研究CMCS、C.laurentii单独处理和CMCS诱导培养C.laurentii(记为CMCS-C.laurentii)浸泡处理对葡萄柚果实青霉病害的防控效果及其对果实苯丙烷代谢的影响。结果表明,CMCS-C.laurentii处理显著抑制了葡萄柚果实青霉病发病率及病斑直径的扩展(P<0.05)。此外,与对照组相比,CMCS-C.laurentii处理提高了葡萄柚果实苯丙氨酸解氨酶、肉桂酸-4-羟基化酶、4-香豆酸辅酶A连接酶、多酚氧化酶、过氧化物酶、β-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶活力以及总酚、类黄酮、木质素的含量。综上,添加CMSC诱导培养提高了C.laurentii的生防效力,CMCS-C.laurentii处理通过提高采后葡萄柚果实的苯丙烷代谢能力和抗性物质含量,从而增强葡萄柚果实抗青霉病效力,且CMCS-C.laurentii处理果实抗病效果优于CMCS、C.laurentii单独处理。

超声辅助提取西柚果皮黄酮及抗氧化活性研究

以西柚果皮为原料,采用超声辅助法提取西柚果皮中黄酮。以黄酮得率为指标,采用单因素试验和正交试验优化提取工艺,并研究其体外抗氧化活性。结果表明:最佳提取条件为乙醇体积分数60%、料液比1∶20(g/mL)、提取时间60 min、提取温度70℃,在此工艺条件下黄酮得率为(19.586±0.124)mg/g。西柚果皮黄酮对DPPH·、ABTS^(+)·和·OH的最大清除率分别为94.50%±0.33%、97.45%±0.32%、41.09%±0.85%,清除率是等质量浓度维生素C的96.97%、99.45%和156%,表明西柚果皮黄酮具有良好的抗氧化活性。

胡柚皮有效成分的分离鉴定及其药理活性

为了进一步揭示常山胡柚(Citrusparadisicv.Changshanhuyou)活性成分的药理作用,对胡柚皮进行综合开发利用,对其有效成分的药理活性进行了研究。利用柱层析和薄层层析及现代波谱法(IR、NMR、MS)分离鉴定了常山胡柚果皮中3种化学成分的结构,它们分别为柚皮素(I,naringerin)、柚皮甙(II,naringin)、柠檬苦素(III,limonin),并在体外做了免疫生物活性筛选实验。结果表明这3种化学成分均为首次从该种植物中分离,并证明这3种化学成分对T、B淋巴细胞的增殖反应有较好的抑制作用,揭示了其免疫生物活性部位为氯仿部位。

常山胡柚降血脂成分提取工艺及其功能研究

为综合利用常山胡柚的果皮果渣,提高其经济价值,减少环境污染,以常山胡柚果皮果渣为原料,研究其所含黄酮类和柠檬苦素类物质的提取与纯化工艺,并对其降血脂辅助作用进行评价。结果表明：将原料烘干后磨成粉末,用95%乙醇提取5h,提取液经大孔树脂层析、蒸馏水去除多糖类物质、40%乙醇洗脱,洗脱液旋转蒸发蒸干,可得到纯化的黄酮类和柠檬苦素类物质,纯度为86%~99%,得率约为0.95%。胰脂肪酶活性抑制结果表明,制备的活性成分具有较强的降血脂作用。在此基础上,初步制成胶囊状保健品。本研究为常山胡柚的综合利用提供了新的途径。

胡柚中3种主要黄酮类物质的含量测定

目的:建立常山胡柚3种主要黄酮类物质含量的测定方法,并比较常山胡柚中皮、肉、籽中该3种黄酮类物质含量的差异。方法:采用反相高效液相色谱法分离检测胡柚中柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量;流动相为乙腈-水(23:77,V/V),柱温25℃,流速1.0mL/min,检测波长283nm。结果:柚皮苷在3.22～1030μg/mL、橙皮苷在0.59～380μg/mL、新橙皮苷在0.077～990μg/mL范围内,黄酮类物质的质量浓度与峰面积呈良好的线性关系;柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的平均回收率分别为98.43%(RSD=4.07%)、98.70%(RSD=4.30%)、99.90%(RSD=3.47%);并以柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷为标准比较胡柚副产物皮、籽与胡柚肉含量的差异,初步得出皮>肉>籽。结论:该方法简便、准确、可靠、重复性好,可用于常山胡柚的质量控制。

亚临界水萃取常山胡柚皮中橙皮苷的工艺研究

以常山胡柚(Citrus paradisi cv.Changshanhuyou)皮为原料,研究了采用亚临界水萃取橙皮苷的工艺技术参数。探讨了温度、压力、液料比、萃取时间以及蒸馏水流速对胡柚皮中橙皮苷提取率的影响。结果表明,动态亚临界水萃取最佳提取工艺条件为温度150℃,压力10 MPa,流速为40 m L/min,在此条件下50.0 g烘干胡柚皮提取110 min,橙皮苷提取率为0.070 09%。静态亚临界水萃取最佳提取工艺条件为温度150℃,液料比40∶1(m L∶g),反应时间40 min,橙皮苷提取率为0.066 7%。亚临界水萃取具有绿色环保、无有机溶剂残留、提取率高等特点。

不同产地衢枳壳药材质量的熵权TOPSIS法综合评价

目的:综合评价不同产地衢枳壳药材的质量。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)测定衢枳壳药材中圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷的含量;采用紫外-可见分光光度法测定衢枳壳药材中总黄酮的含量;采用2020年版《中国药典》(四部)附录2204挥发油测定法甲法测定衢枳壳药材中挥发油的含量。以14批不同产地衢枳壳药材中上述6个黄酮类成分、总黄酮及挥发油的含量为指标,采用熵权TOPSIS法综合评价衢枳壳药材的整体质量。结果:14批不同产地衢枳壳药材中圣草次苷、芸香柚皮苷、柚皮苷、柚皮素、橙皮苷、新橙皮苷、总黄酮的含量分别为2.530 4~2.915 1、4.273 7~5.313 8、34.715 8~36.695 8、3.061 1~4.456 0、4.560 9~5.773 5、45.153 6~47.019 7、145.480 1~157.022 5 mg/g,挥发油的含量为0.034~0.040 mL/g。熵权TOPSIS法分析结果显示,上述各指标权重分别为0.109 0、0.140 7、0.148 3、0.125 5、0.067 0、0.139 0、0.124 2、0.146 3;14批不同产地衢枳壳药材的平均相对贴近度分别为0.809 0、0.711 9、0.807 0、0.681 5、0.447 0、0.363 1、0.439 8、0.349 6、0.449 6、0.376 5、0.486 6、0.458 7、0.282 0、0.167 0。质量排名前4位的衢枳壳药材分别为常山县大宝山、常山县太公山、常山县鹭山和常山县小翠山产样品。结论:采用熵权TOPSIS法可对衢枳壳药材质量进行综合评价;常山县所产衢枳壳药材质量较优。

农杆菌介导的葡萄柚转化再生体系建立研究

【目的】建立邓肯葡萄柚上胚轴遗传转化再生体系,为葡萄柚基因转化研究奠定基础。【方法】以邓肯葡萄柚上胚轴为外植体,研究上胚轴不定芽和生根诱导、遗传转化的影响因子。【结果】在添加TDZ0.50～1.00mg/L的培养基上,上胚轴不定芽诱导率为72.7%～81.6%;无菌枝条的最适生根条件为1/2MT添加ABT6号1.0mg/L,生根率可达81.3%。不同抗菌素中,以替门汀杀菌效果较好,且对外植体出芽无明显抑制作用。转化芽选择初期,5～7d的暗培养有利于卡那霉素抗性芽的诱导发生。PCR检测结果显示,7株抗性植株中有6株呈阳性。【结论】建立了邓肯葡萄柚上胚轴植株再生繁殖体系,为其基因转化奠定了基础。

旱季不同水肥管理对葡萄柚果实营养品质的影响

采用L9(34)正交试验设计,研究旱季水肥管理技术三因素(品种、施肥量、灌溉强度)对葡萄柚果实营养品质的影响。经直观分析和方差分析综合评价,结果表明:旱季不同水肥处理对葡萄柚果实水分、可溶性固形物、Vc、总酸和还原糖含量变化具有明显提高。灌溉因素是影响果实水分、可溶性固形物含量的主要因子,品种因素是影响Vc、总酸、总糖和还原糖的关键因子。3种因素对果实可溶性固形物的影响均达到极显著水平,品种因素对Vc、总酸和还原糖的影响达到极显著水平,施肥、灌溉因素分别对总糖、还原糖的影响极显著。本试验中,葡萄柚果实营养品质最优组合处理为星路比施肥1kg灌溉2次/株/月。

超临界二氧化碳萃取常山胡柚外果皮中天然色素的工艺研究

为了得到萃取常山胡柚Citrus paradisi‘Changshan Huyou’天然色素的最佳工艺条件,为规模化、产业化提取常山胡柚天然色素提供理论依据,以常山胡柚外果皮为原料,采用超临界二氧化碳萃取技术对常山胡柚天然色素的提取工艺进行了较为系统的研究,并对提取中的若干关键因素如萃取时间、萃取压力、夹带剂(体积分数为95%乙醇)用量和萃取温度等分别进行单因素试验和正交试验,得到了常山胡柚天然色素提取的最佳工艺条件为:萃取时间2 h,萃取压力25 MPa,夹带剂(体积分数为95%乙醇)用量300 mL,萃取温度35℃。提取后将色素液烘干至恒质量,从而计算其得率,常山胡柚天然色素的提取率为3.78%。

2种葡萄柚果实发育过程中金属营养元素变化及活性氧代谢差异

对两种葡萄柚(Citrus paradisi marcf)果实发育过程中K、Ca、Mg、Zn、Cu、Mn、Fe 7种金属营养元素的含量与分布、吸收规律及其与活性氧代谢相关性差异进行了初步研究。结果表明:(1)红宝石果实生长期(4～10月)较甜葡萄(4～12月)短,红宝石果实果重较大,果皮较厚。(2)两葡萄柚中7种营养元素大多以幼果期含量最高,并随着果实的发育总体呈递减规律。K、Zn、Fe以果肉中含量较多,Ca、Mg、Mn、Cu则主要分布于果皮,其中Ca在果皮果肉间含量的差异较大。K含量位居7元素之首。(3)葡萄柚对K、Ca、Mg、Zn、Mn的吸收集中于果肉迅速生长期,Cu和Fe在果实转色期出现另一吸收峰。(4)7种金属营养元素间和元素与活性氧代谢指标间的相关性显著率均为:甜葡萄高于红宝石,果肉高于果皮。其中与活性氧代谢指标间显著率最高的元素是Mg、Zn,最低的是Cu,相关性较好的活性氧代谢指标是O.-2,SOD最差。

西柚果皮中果胶的提取工艺优化

通过单因素和正交试验研究料液比、温度、pH值、提取时间4个理化因素对西柚果皮中果胶得率的影响,确定西柚皮果胶提取的最佳工艺参数。结果表明,酸提取最佳工艺为料液比1:20、提取温度60℃、提取时间1.5 h、pH 2.0,果胶得率为15.84%;超声波辅助提取最佳工艺为料液比1:20、pH 2.5、提取温度65℃、超声功率150 W、超声时间30 min,果胶得率为18.21%。超声波辅助提取时,西柚果皮中果胶得率高且提取时间缩短。

基于GIS技术的常山胡柚冻害风险评估

对常山胡柚(Citrus paradisi cv.Changshanhuyou)冻害进行风险评估,为常山县胡柚种植提高产量及冻害防灾减灾提供科学指导。通过自然灾害风险指数及层次分析法,综合考虑常山县致灾因子危险性、孕灾环境敏感性、承灾体脆弱性和防灾减灾能力4个方面的影响,确定常山县胡柚冻害的风险分布情况。常山县胡柚冻害地区分布不均匀,从西南到东北冻害风险有递增趋势。西南部是遭受冻害的低风险区,更适宜胡柚的种植,而东北部及南部的山地丘陵地带是遭受冻害的高风险区,不适宜胡柚的种植。冻害区划可以为今后胡柚的种植及防灾减灾提供指导。

旱季水肥管理对葡萄柚幼树生长的影响

为了给葡萄柚的栽培管理提供理论依据,以促进葡萄柚幼树的生长发育,采用正交试验设计,就不同施肥与灌水处理对云南引进的不同品种葡萄柚幼树生长的影响情况进行了田间试验。结果表明:施肥处理对幼树树高、地径、冠幅及抽梢的影响都很大,灌水次数对其影响次之,而不同品种所受影响程度的差异不大。文中的试验结果与生产实际经验说明,每株幼树施复合肥400 g,每月灌水4次,这对葡萄柚树体生长较为有利。

田间不同水肥管理对葡萄柚果实外观品质的影响

采用L9(34)正交试验设计,研究田间不同水肥管理技术3因素(品种、施肥量、灌溉强度)对葡萄柚果实单果重、硬度、果皮厚度、可食率、横径和纵径等外观品质的影响。采用直观分析和方差分析进行综合评价,结果表明,田间不同水肥处理对葡萄柚果实硬度和果实横、纵径变化具有显著影响。其中,品种因素对果形指数的影响最大。施肥因素是影响果实硬度、可食率和果实横、纵径的关键因子,对果实硬度和果实横、纵的影响分别达到显著(P=0.023)和极显著(P=0.002,P=0.003)水平。本试验中,葡萄柚果实外观品质最佳处理为星路比施肥1 kg灌溉2次/株/月。

湖北巴东寿带鸟繁殖行为观察

20 0 2年 5月～ 2 0 0 4年 8月 ,在湖北省巴东县沿渡河镇的东圩口、小溪、锯锯湾、两河口等 4个村 ,对寿带鸟 (Terpsiphoneparadisiincei)的繁殖生态进行了初步研究。研究结果显示 ,寿带鸟在湖北巴东的繁殖时间为 5月下旬～ 7月上旬 ,主要在农田居民区附近的阔叶树上营巢 ,巢材主要有青苔、草叶、草茎、细草根、棕丝、树耳、蜘蛛网等。筑巢工作主要由雌鸟承担 ,一般需要 5～ 7d即可完成。巢距离地面高度1 72～ 6 45m ,巢外径 6 0～ 8 8cm ,巢内径 4 9～ 6 4cm ,巢深 2 9～ 4 1cm ,巢高 6 3～ 9 5cm。雌鸟每天产 1枚卵 ,产卵时间均在清晨。窝卵数 4枚 (n =1 1 ) ,卵产齐后即开始孵化 ,雌雄鸟轮流孵卵 ,孵化期 1 3d。雏鸟晚成性 ,雌雄共同育雏 ,育雏期 9d。寿带鸟对不同的外界干扰反应明显不同 ,当有对其卵和雏鸟构成威胁的动物接近时 ,护巢行为表现十分强烈 ;而对其没有威胁的物种接近其巢时则无动于衷。面对同样的干扰 ,雌雄亲鸟的反应存在显著差异。

不同产地不同品种柚皮中总黄酮和柚皮苷的含量比较

目的:测定不同产地柚皮中总黄酮和柚皮苷的含量,筛选各种不同柚皮作为柚皮苷提取原料的可行性。方法:以紫外分光光度法测定不同产地柚皮中总黄酮的含量,检测波长为283 nm;用高效液相色谱法测定不同产地柚皮中柚皮苷的含量。流动相为甲醇-水-乙酸(v∶v∶v=35∶61∶4),柱温30℃,流速为1.0 mL.m in-1,检测波长为283 nm。结果:化橘红中总黄酮和柚皮苷的含量最高,胡柚皮次之,普通柚皮中总黄酮和柚皮苷含量都较少。结论:化州橘红是最理想的提取柚皮苷的原料,胡柚皮也可做为提取柚皮苷的药材资源。

胡柚果醋的发酵工艺研究

胡柚是浙江的特色杂柑,果实营养丰富,口感独特,极耐储藏,是非常适宜加工的柑桔品种。文章以出汁率适中的胡柚小果为原料,采用气相色谱测定发酵液中的酒精和醋酸含量,研究胡柚果醋的发酵工艺。确定以安琪酵母股份有限公司的葡萄酒酵母为菌种进行酒精发酵,其适宜温度为28℃,发酵时间为72 h。确定来源于自然发酵胡柚果醋的巴氏醋杆菌HY05为菌种,以浅层液体方式进行醋酸发酵,其适宜的液面深度为3 cm;适宜温度为30℃,时间为72 h;发酵液过滤,所得原果醋密封后置于20℃避光处陈酿25 d,过滤、灌装、封口后于70℃灭菌10 m in,所得胡柚果醋特色风味突出。