福建东山湾人工养殖池红树林浮岛养殖拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的生长及肌肉营养成分分析

为探究海水养殖池塘红树林浮岛养殖拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的生长及其与野生拟穴青蟹营养成分的差异,选择福建省漳浦县东山湾北部的海水养殖池塘内设置四个拟穴青蟹养殖实验组,分别为红树林(秋茄)浮岛养殖组、海马齿浮岛养殖组、空白浮岛养殖组(水面无种植植物)和外围环沟养殖组,并以试验点附近海区捕获的拟穴青蟹(野生组)作为对照,对各组拟穴青蟹的肌肉营养成分进行分析。结果显示,空白浮岛组拟穴青蟹增重率、特定生长率、出肉率及存活率均高于红树林浮岛组、海马齿浮岛组和外围环沟组;红树林浮岛养殖拟穴青蟹肌肉粗蛋白含量(71.66%)最高,粗脂肪含量(2.52%)相对较低,各组拟穴青蟹肌肉中氨基酸总量在60.54%~68.68%之间,其中红树林浮岛组拟穴青蟹肌肉中氨基酸总量、必需氨基酸总量上均显著高于野生组(P<0.05);从氨基酸评分(AAS)和化学评分(CS)结果可以得出拟穴青蟹的第一限制性氨基酸是蛋氨酸+胱氨酸,各组拟穴青蟹肌肉中必需氨基酸指数(EAAI)均高于0.75;肌肉中均富含不饱和脂肪酸,尤其是多不饱和脂肪酸;红树林浮岛组拟穴青蟹肌肉中多不饱和脂肪酸总量(ΣPUFA)、n-3系列多不饱和脂肪酸总量(Σn-3PUFA)均显著高于其他组(P<0.05)。综上,红树林浮岛养殖组拟穴青蟹肌肉的蛋白质和脂肪酸营养价值优于其他实验组。

不同饵料对拟穴青蟹大眼幼体变态发育的影响

为探寻适用于拟穴青蟹大眼幼体发育时期投喂的饵料,在自然光照、水温(30±1)℃、盐度23条件下,将(1000±30)只大眼幼体放入盛水360 L的孵化桶中孵化,投喂卤虫无节幼体、冰冻桡足类、冰冻卤虫、配合饲料,及不投喂任何饵料,直至蜕壳变态为仔蟹,并分析不同饵料投喂对养殖水体的水质、大眼幼体蜕壳变态、仔蟹免疫相关酶及消化酶活性的影响等。结果显示:投喂卤虫无节幼体组的养殖水体中氨氮、亚硝态氮含量最低,成活率最高,幼体发育时间比其他3个投喂组缩短1~3 d,甲长、甲宽均显著大于配合饲料组的个体,但与冰冻桡足类组、冰冻卤虫组无显著差异;4个投喂组间仔蟹酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、超氧化物歧化酶、α-淀粉酶活性无显著差异;卤虫无节幼体组溶菌酶活性、总抗氧化能力与冰冻桡足类、冰冻卤虫组无显著差异,但显著高于配合饲料组;卤虫无节幼体组胰蛋白酶活性和脂肪酶活性显著高于其他3个投喂组。试验结果表明,卤虫无节幼体对育苗水体水质及仔蟹的蜕壳成活率、生长、免疫相关酶活性、消化酶活性均存在积极作用,更适合作为拟穴青蟹大眼幼体阶段的饵料;冰冻桡足类、冰冻卤虫使用效果稍差,但均优于配合饲料组,可以用于替代部分卤虫无节幼体,以降低育苗成本,简化生产流程。试验结果可为拟穴青蟹苗种人工培育过程中饵料选择提供依据。

拟穴青蟹循环水养殖系统生物滤池细菌群落变化

【目的】探究拟穴青蟹(Scylla paramamosain)循环水养殖系统(Recirculating aquaculture systems,RAS)生物滤池启动过程中细菌群落的演替过程,为设计适合拟穴青蟹RAS养殖的生物过滤器提供指导。【方法】在2、5、10、20、30、40、50 d检测RAS养殖池的水质,采集填料生物膜和养殖池水体微生物样品,采用多种生物信息学分析方法研究生物膜微生物群落演替过程,并运用实时荧光定量PCR技术检测生物膜碳循环和氮循环功能基因拷贝数。【结果与结论】氨氮(NH4+-N)、分子氨(NH3)和亚硝态氮(NO2--N)的质量浓度总体呈先上升后下降趋势,硝态氮(NO3--N)和总氮(TN)在实验结束时(50 d)积累,总有机碳(TOC)质量浓度在前10 d保持稳定,从10 d至50 d呈先升高后下降趋势,差异显著(P<0.05),且总氮和硝态氮质量浓度对生物膜细菌群落变化的影响最大。生物膜细菌群落的多样性、均匀性和丰富度在10 d达到峰值,然后达到平稳状态。基于FAPROTAX的功能预测发现生物膜大多数功能主要富集在氮循环和有机物降解这两方面,生物膜碳循环和氮循环绝对基因拷贝数随时间增加总体呈升高趋势。根据FEAST分析结果,除10 d以外,前20 d同一时期的水体细菌对生物膜的贡献较高,后30 d主要来源于生物膜本身前期细菌贡献,且贡献率随时间增加呈增长趋势,到后期趋于稳定。结果表明,拟穴青蟹RAS生物滤池启动过程中,生物膜的细菌群落结构随时间增加变化显著,功能主要富集在氮循环和有机物降解这两方面,生物膜细菌来自本身细菌的贡献率也逐渐升高,到后期趋于稳定。

拟穴青蟹精氨酸激酶的重组表达及致敏性分析

为比较拟穴青蟹(Scylla paramamosain)重组精氨酸激酶(recombinant arginine kinase,rAK)和天然AK(native AK,nAK)的致敏性,并鉴定AK分子中的致敏优势区域,首先基于AK的抗原表位分布与空间结构,将AK分子分为AK-E1(氨基酸(amino acids,AA)1~92)、AK-E2(AA 87~187)、AK-E3(AA 172~265)和AK-E4(AA 276~357)4个片段,采用大肠杆菌原核表达系统对其进行分段表达,并分别分离纯化nAK、rAK及AK的4个分段表达产物。用BALB/c小鼠模型评价重组蛋白的致敏性,结果显示,rAK致敏小鼠血清中特异性抗体水平、脾脏淋巴细胞的Th2型细胞因子释放水平均显著升高,表明rAK可使机体致敏,但其免疫原性较nAK弱;AK的4个分段表达产物中AK-E2的免疫原性最强。同时,rAK能够刺激RBL-2H3细胞释放β-己糖苷酶,但rAK对效应细胞的刺激作用低于nAK;4个分段表达产物中AK-E2和AK-E4对效应细胞的刺激作用较强。综上,通过原核表达系统获得的rAK免疫原性较nAK弱,而AK分子中免疫原性较强的区域为AA 87~187,免疫反应性较强的区域为AA 276~357。

拟穴青蟹Spfox-1基因及调控其表达的lncRNA的鉴定与分析

为探究Spfox-1基因及存在靶向关系的lncRNA在拟穴青蟹性腺发育和幼体发育过程中的作用,从其成熟雌雄性腺转录组中得到开放阅读框全长为1410 bp的Spfox-1序列,该序列编码的蛋白包含1个RRM结构域,进一步预测获得1个可能与Spfox-1基因存在靶向关系的lncRNA HX26820。多重比较和进化树分析表明,Spfox-1的RRM结构域高度保守且与其他节肢动物的fox-1亲缘关系较近。实时荧光定量PCR结果显示:Spfox-1基因在成熟青蟹各组织器官中均有不同程度的表达,其中在卵巢和雄性脑神经节中表达量最高。在性腺不同发育阶段,Spfox-1基因在卵黄发生期的表达量显著高于卵巢其他发育阶段,而在精巢发育过程中,则表达量持续下降。在幼体不同发育过程中,Spfox-1基因的表达量从溞状幼体Ⅴ期到仔蟹Ⅰ期表达量呈逐渐上升趋势。lncRNA HX26820在卵巢发育过程中表达量持续下降,在幼体发育过程中只在溞状幼体Ⅴ期有较高的表达量。研究表明Spfox-1和lncRNA HX26820可能参与卵巢发育和幼体发育。过表达试验显示,lncRNA HX26820能够抑制Spfox-1基因的表达,推测其可能对Spfox-1在性腺及幼体发育中的功能具有负调控作用。本试验结果可为甲壳动物lncRNA调控机制的研究奠定基础。

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)血卵涡鞭虫病的流行病学分析

为解析拟穴青蟹(Scylla paramamosain)血卵涡鞭虫病的流行病学特征,于2012年4—11月采用跟踪监测和实地调查的方法,结合病原分离鉴定及病蟹的病理学观察,统计分析了浙江省温州地区养殖拟穴青蟹血卵涡鞭虫病的流行情况。结果表明,患病拟穴青蟹的肝胰腺、肌肉、鳃等组织病理显示有大量血卵涡鞭虫侵染,并能用PCR方法快速检出。温州地区养殖拟穴青蟹血卵涡鞭虫病在每年5—11月均有发生,7—9月为集中发病时间,死亡高峰出现于8—9月之间,年份间(2010—2012)与发病率无相关性,而不同月份对病害的发生有极显著影响(P<0.01)。不同发育阶段以脱壳期的发病率相对较高,发病蟹的规格主要以50g以下的幼蟹和250g以上的成蟹为主。拟穴青蟹血卵涡鞭虫病的发生与水温(r=0.756)和盐度(r=0.631)变化关系较密切,夏、秋季节受梅雨、台风影响而引起水温和盐度的剧烈变化可能是暴发血卵涡鞭虫病的诱发因素。

拟穴青蟹DDX5基因的表达及功能初步分析

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)是我国东南沿海重要的经济养殖蟹类之一。DDX5基因是DEAD-box解旋酶基因家族中的成员,已有研究表明其在生殖细胞的成熟分化及功能维持中起重要的调控作用。我们从拟穴青蟹转录组数据库中筛选获得了DDX5(SpDDX5)基因序列,采用实时荧光定量PCR技术分析了其在成熟青蟹各组织、性腺各发育时期及胚胎各发育时期的表达模式。此外,利用RNAi技术分析了SpDDX5在性腺发育中可能发挥的作用。结果如下:SpDDX5的开放阅读框长1 893 bp,编码630个氨基酸,具有DEXDc和HELICc两个结构域。SpDDX5在拟穴青蟹的各组织中广泛表达,且在精巢中的表达水平明显高于其他组织(P<0.05);在精巢发育过程中,SpDDX5的表达水平逐渐降低;在胚胎发育过程中,SpDDX5的表达水平逐渐升高。干扰SpDDX5后,生殖细胞分子标记基因Vasa和Nanos表达上调,性腺发育相关基因foxl-2表达下调,Dmrt家族基因Dsx表达上调,Dmrt-like和idmrt-2表达下调。根据以上结果,我们推测SpDDX5基因可能在拟穴青蟹生殖细胞发育和精巢发育中发挥重要作用。

铵氮胁迫对拟穴青蟹Scylla paramamosain免疫力的影响

实验室条件下测定了在氨氮浓度0,0.5,1.5,2.5 mg/L胁迫0,24,48,72和96 h下,拟穴青蟹(Scylla paramamosain)血细胞总数(THC)、血细胞吞噬能力及其血清中溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、过氧化物酶(POD)、酚氧化酶(PO)、溶血素等免疫相关因子的活力变化。结果表明:铵氮胁迫24 h时各试验组血细胞吞噬能力明显增强,其后逐渐减弱;铵氮浓度0.5 mg/L组AKP,SOD,PO,POD,溶血素等活力在试验24和48 h时均显著高于对照组(P<0.01);铵氮浓度1.5 mg/L组仅SOD和POD活力在试验48 h内略高于对照组,其后下降,而其它试验组各测定指标在整个实验过程中均低于对照组并呈下降趋势,且下降的幅度与胁迫浓度、时间成正相关。说明低浓度的铵氮胁迫短时间内会使青蟹产生应激反应,适当提高其免疫力,而长时间或高浓度的铵氮胁迫会抑制青蟹各免疫因子的活性,从而降低其免疫力。

北部湾拟穴青蟹(Scylla paramamosain)群体遗传结构及其扩张分析

利用线粒体16SrRNA基因片段分析北部湾拟穴青蟹群体遗传结构及其扩张历史。结果表明,16SrRNA基因片段长度在521—523bp之间,6个拟穴青蟹群体具21种单倍型。群体总体水平的单倍型多样性(h)和核甘酸多样性(π)分别为0.6259和0.001851。群体间遗传距离与地理距离之间无相关性。群体间遗传分化系数(Gst)在0.02008—0.04362之间,基因流(Nm)值在5.48—12.20之间。AMOVA分析表明,群体间遗传变异占0.1%,群体内遗传变异占99.9%。群体间固定指数(Fst)的绝对值在0.00026—0.02977之间,暗示群体间没有产生遗传分化。单倍型邻接树和单倍型中介网络图显示,单倍型没有按采样地形成谱系分支。中性检验和错配分析揭示,北部湾拟穴青蟹群体在历史上经历过群体扩张。群体扩张时间大致在更新世晚期的0.04698—0.01879MY前或0.04520—0.01808MY前。

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)两种Ⅰ型高血糖激素基因全长cDNA的克隆及组织表达分析

采用RT-PCR及RACE技术,从拟穴青蟹眼柄组织中克隆了两种Ⅰ型高血糖激素CHH基因(分别命名为C1与C2)cDNA全序列。序列分析结果表明:C1基因全长1859bp,开放阅读框长420bp,编码139个氨基酸,分子量为15.326kDa,等电点为5.540;C2基因全长1739bp,开放阅读框长426bp,编码141个氨基酸,分子量为15.621kDa,等电点为7.618。与其它物种CHH氨基酸序列进行同源性比较分析显示,拟穴青蟹CHH基因与榄绿青蟹CHH基因同源性最高(92%),依次为日本鲟(80%)、三疣梭子蟹(78%)。聚类分析表明,拟穴青蟹CHH氨基酸序列与榄绿青蟹和日本鲟紧密聚为一支。经荧光定量检测,拟穴青蟹CHH基因在眼柄、肝胰腺、心脏、肠中表达量较高,鳃、胃中表达量很少,肌肉中表达极少。盐度骤变试验结果表明:盐度胁迫24h后,C2的表达量是C1的30倍以上;C2基因盐度5时与对照组的表达量差异不显著(P>0.05),盐度15时差异显著(P<0.05),盐度22、25、30时差异极显著(P<0.01);盐度变化越大,C2的表达量越大。上述结果为进一步深入研究CHH基因的功能及调控机理奠定基础。

汞胁迫对拟穴青蟹(Scylla paramamosain)主要消化和免疫因子的影响

采用实验生态学方法,开展了汞胁迫下拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的消化和免疫因子变动的研究。在实验室条件下,测定了0.00、0.005、0.01、0.02、0.04、0.08mg/L浓度Hg2+在1d、3d、5d、7d、9d胁迫时间下的消化和免疫因子变化。结果表明,汞胁迫下拟穴青蟹AMS活性快速升高,但激活效应随胁迫时间延长而逐渐下降,后期表现为抑制效应。汞胁迫能激发Pepsin活性,短期内Pepsin活性和胁迫浓度、胁迫时间呈正相关;长期高浓度胁迫(0.04、0.08mg/L),则激发效应减弱。汞胁迫对LPS活性的影响主要表现为抑制作用。免疫因子的研究结果表明,汞胁迫对AKP有激发作用,可迅速刺激机体AKP活力上升。低浓度汞胁迫对AKP活性提升最显著(0.005、0.01、0.02mg/L),高浓度组AKP活性先升后降。汞胁迫对ACP活性有激发作用,且存在显著的时间效应和浓度效应。汞胁迫下SOD活性短期内即显著升高,且SOD活力随胁迫时间延长而持续升高。汞胁迫对LZM活性有激活作用,且激活效应存在时间效应和浓度效应。汞胁迫对PO活力快速产生抑制作用,抑制作用存在时间效应而无显著的浓度效应。汞胁迫对拟穴青蟹消化和免疫因子能产生胁迫效应,对Pepsin、AMS、AKP、ACP、SOD、LZM表现为激发,而对LPS、PO表现为抑制。

拟穴青蟹对盐度变化的生态适应及渗透调节机制研究进展

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)属节肢动物门(Arthropoda)、软甲纲(Malacostraca)、十足目(Decapoda)、梭子蟹科(Portunidae)、青蟹属(Scylla),其野生种群主要分布于中国东南沿海和其他印度洋-太平洋海域,是中国传统海水养殖蟹类之一。该蟹个体大、生长速度快、肉质鲜美、营养丰富,且具有较高的经济价值。人们对青蟹的需求呈现上升趋势,仅通过海捕天然蟹苗或增加养殖密度,难以达到预期的产量,且不具有可持续性。合理规划拟穴青蟹养殖区域,拓展养殖空间,是推动青蟹产业迅速发展、扩大生产规模的有力举措。目前,青蟹养殖还未充分利用河口和沿岸地区众多亟待开发的不同盐度水域。结合国内外有关研究报道,总结了青蟹对盐度变化的生态适应性,尤其是盐度对青蟹生长发育的影响,并分析其渗透调节的分子机制,为不同盐度水域养殖推广,以及青蟹耐盐等新品种的开发提供参考。

盐碱水池塘不同饵料投喂条件下拟穴青蟹生长、营养及血清生化指标的比较

为探究盐碱水池塘养殖条件下投喂不同饵料对池塘水质及拟穴青蟹生长、营养品质及血清生化指标的影响,实验设置青柳蛤、矛尾复虾虎鱼、鹰爪虾3种生物饵料组和1种人工配合饲料组,各组设置3个重复,实验周期4个月,分析各组池塘水质变化,并采用单因素方差分析(One-Way ANOVA)方法比较各组蟹的生长、营养及血清生化指标。结果显示,各组水温、盐度与pH差异较小,而溶解氧、氨氮、亚硝酸盐氮差异较大,其中,矛尾复虾虎鱼组溶解氧从11.5降至9.2 mg/L,而氨氮、亚硝酸盐氮分别从养殖初期0.44、0.022 mg/L上升到养殖末期的0.89、0.050 mg/L。青柳蛤组的体重(334 g)、增重率(332.7%)和特定生长率(0.076%/d)显著高于其他组,人工配合饲料组存活率最高,达到66.67%,矛尾复虾虎鱼组的肥满度(0.221 g/cm^(3))显著高于其他组;青柳蛤组的肌肉必需氨基酸中的缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸含量及肝胰腺呈味氨基酸总量和鲜味氨基酸总量在各组中最高,人工配合饲料组肝胰腺必需氨基酸中的苏氨酸、亮氨酸、赖氨酸、组氨酸含量在各组中最高,鹰爪虾组的肌肉呈味氨基酸总量和鲜味氨基酸总量在各组中最高,青柳蛤组的肌肉与肝胰腺饱和脂肪酸、多不饱和脂肪酸、脂肪酸含量均为最高;青柳蛤组的总蛋白含量显著高于其他组,矛尾复虾虎鱼组的总胆固醇显著高于其他组,人工配合饲料组的谷草转氨酶、甘油三酯、葡萄糖显著高于其他组,相关性分析显示青柳蛤等生物饵料常规营养与拟穴青蟹各生长指标存在显著正相关。研究表明,青柳蛤组拟穴青蟹在生长、营养及血清蛋白质指标上具有显著优势,可以作为盐碱水池塘养殖拟穴青蟹的适口饵料。本研究将为拟穴青蟹北方盐碱水池塘养殖和推广提供数据参考。

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)微卫星位点开发-基于(AG)12探针杂交

采用FIASCO(Fast Isolation by AFLP sequences containing repeats)技术和磁珠富集方法开发拟穴青蟹微卫星位点。结果表明,400bp以下长度的序列含微卫星的概率超过400bp以上长度的序列;从二碱基重复类型到五碱基重复类型,完美型微卫星的概率在增加。利用设计的28对引物扩增一个供试群体,其中12对引物能稳定扩增且片段大小基本符合理论长度,10个微卫星位点表现出高度多态性,9个微卫星位点显著偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.05),两组两两位点间存在连锁不平衡现象(P<0.0042,经Bonferroni法校正)。Micro-checker分析揭示其中的5个微卫星位点可能存在无效等位基因。排除混合微卫星位点的引物对以及扩增位点PIc值在0.5以下的引物对,8对引物能用于拟穴青蟹群体遗传学等研究。

复方磺胺嘧啶口灌给药在拟穴青蟹(Scylla paramamosain)体内药动学和组织分布与消除

研究了水温为(27±1)℃、盐度为10条件下,单剂量(100 mg/kg)口灌给药复方磺胺嘧啶(磺胺嘧啶SD∶甲氧苄啶TMP=5∶1)后,SD和TMP在拟穴青蟹(Scylla paramamosain)体内的药动学以及在肌肉、肝胰腺和鳃组织中的分布和消除规律。结果显示,拟穴青蟹口灌复方磺胺嘧啶后,血淋巴中SD和TMP药物浓度-时间关系曲线均符合一级吸收二室模型,SD和TMP的峰浓度(C_(max))分别为49.56 mg/L和2.79 mg/L,药时曲线下面积(AUC)分别为1417.6 mg/L·h和82.7 mg/L·h;肝胰腺是SD和TMP峰浓度最高的组织,其C_(max)分别为59.36 mg/kg和74.82 mg/kg。由此可见,大量TMP蓄积在肝胰腺中,进入血液循环的TMP很少。在鳃组织中,SD和TMP的C_(max)分别为51.89 mg/kg和42.58 mg/kg,消除半衰期分别为23.28 h和25.29 h;鳃组织中药物浓度比较高,且消除速度较快,推测其在药物代谢中承担着消除功能。在肌肉中,SD和TMP的C_(max)分别为44.95 mg/kg和10.09 mg/kg,消除半衰期分别为25.09 h和35.08 h。以0.1 mg/kg和0.05 mg/kg分别为SD和TMP的最高残留限量(MRL),95%置信区间,推算SD和TMP在拟穴青蟹肌肉中的理论休药期分别为290.6 h和302.8 h,在肝胰腺中分别为340.4 h和377.0 h。

低盐养殖对拟穴青蟹肌肉营养成分的影响

为探究低盐对拟穴青蟹(Scalla paramamosain)肌肉营养成分的影响,将平均体质量为(254.00±36.81)g的拟穴青蟹在循环水中饲养60 d,一蟹一盒。试验将盐度25的正常海水直接降至20,再以日均2.5的幅度将盐度降至15和10,最后以日均2的幅度将盐度降至5,使试验组盐度分别为5(S_(5))、10(S_(10))、15(S_(15))、20(S_(20))和25(S_(25),对照组),每组设3个重复,每组30只蟹。结果显示:低盐养殖青蟹的肌肉粗蛋白含量变化在(16.2±1.9)%~(19.5±0.7)%之间,与对照组无明显差异;S_(10)组蟹肌肉粗脂肪含量显著高于对照组S_(25)(P<0.05);S_(15)组的肌肉氨基酸总量(TAA)为(18.63±0.91)%,必需氨基酸(EAA)(6.49±0.41)%和呈味氨基酸(DAA)(7.48±0.21)%均高于对照组,氨基酸指数(EAAI)最优为80.36。S_(10)组的高度不饱和脂肪酸(HUFA)与EPA含量显著高于对照组(P<0.05),n-3族多不饱和脂肪酸(∑n-3PUFA)含量为33.0%,达到最高。结果表明,在10~15的低盐环境下养殖拟穴青蟹,有助于改善肌肉营养。

室外虾池笼养拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的存活、蜕壳与生长

本文介绍了在对虾养殖池中笼养青蟹的研究结果。养殖试验历时60 d,以存活率、蜕壳率、甲长增长率、甲宽增长率和增肉系数为指标参数,比较了不同材质、容积和放置层次的养殖容器对笼养青蟹存活、蜕壳与生长的影响。结果表明：在水温25～30℃、盐度13～20、 pH7.8～8.3条件下,笼养青蟹的存活率为（59.85±9.50）%、蜕壳率为（40.69±5.90）%、甲长增长率为107.73%、甲宽增长率为89.39%、增肉系数为286.11%、肥满度＞1。养殖容器的材质、容积和放置层次对笼养效果有影响：胶绳网箱明显优于（ P〈0.05）塑料箱；容积10 L组与6 L组、18 L组相比养殖效果最佳,差异显著（ P〈0.05）, S组略优于B组,差异不明显（ P＞0.05）；第二层（中层）笼箱与第三层（底层）、第一层（表层）相比,笼养效果最佳,差异极为显著（P〈0.01）,第三层（底层）笼箱略优于第一层（表层）,但差异不明显（P＞0.05）。研究结果显示了在对虾养殖池内实施笼养青蟹方式的可行性。

副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)诱导拟穴青蟹(Scylla paramamosain)血淋巴cDNA文库构建及表达序列标签初步分析

利用SMART技术构建副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)诱导的拟穴青蟹(Scylla paramamosain)血淋巴cDNA文库。结果表明,该文库的滴度为1.04×107CFU/mL,文库总容量达1.144×107CFU,克隆子插入片段大小为500—2000bp,重组率达98%。将随机挑选的300个阳性克隆测序,经过质量控制和拼接,共得到141个单基因组簇(UniGenes),75个UniGenes与NCBI非冗余蛋白质数据库中登录的蛋白质序列存在显著相似性,其中20个与免疫防御相关,如kazal-like丝氨酸蛋白酶抑制剂类蛋白、kazal-type蛋白酶抑制剂arasin-like蛋白、抗内毒素因子、抗微生肽、金属硫蛋白、铁蛋白、类70kD热休克蛋白等,达总测序数的6.67%。研究结果证实,构建cDNA文库是获得拟穴青蟹免疫相关基因的可靠途径。

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)六个地理群体肌肉氨基酸和脂肪酸的比较分析

本文对广西钦州(Gq)、福建霞浦(Fx)、浙江温州(Zw)、浙江三门(Zs)、浙江宁海(Zn)、浙江慈溪(Zc)等6个野生群体拟穴青蟹(Scylla paramamosain)肌肉进行了氨基酸及脂肪酸分析。共测定出19种游离氨基酸和26种脂肪酸。氨基酸含量在80.94—191.39mg/g之间, Gq为最高;总脂肪酸含量在7.97—11.38mg/g之间,Zn为最高。主要氨基酸为甘氨酸和精氨酸;主要脂肪酸为C20:5n3(EPA),占总脂肪酸含量的平均值为(22.47±5.84)%。各群体风味氨基酸和多不饱和脂肪酸含量丰富,占总氨基酸比例(TDAA/TFAA)和总脂肪酸比例(PUFA/TFA)分别为(53.62±5.43)%和(59.27±5.29)%。Zs群体的必需氨基酸含量及C22:6n3(DHA)均为最高。主成分分析结果表明:各群体的氨基酸与脂肪酸组成与含量相似性与地理距离分布具有一定的相关性,特别是Gq群体,在氨基酸与脂肪酸的分类中与其他群体区分比较明显。各群体风味氨基酸和多不饱和脂肪酸的聚类分析结果均表明:Zw、Zc与Gq群体较为接近,具有较强的甜味; Fx、Zn与Zs群体较为接近,具有较强的香味及不饱和脂肪酸营养价值。

拟穴青蟹(Scylla paramamosain)NOS蛋白结构分析及同源建模

为了进一步认识拟穴青蟹一氧化氮合成酶(S.paramamosain nitric oxide synthetase,SpNOS)蛋白的结构和功能,深入研究该蛋白的生物学特性,本研究采用生物信息学方法,对SpNOS蛋白质的理化性质、二级结构及三级结构等进行生物信息学分析,并在获得三级结构的基础上进行同源建模.分析结果表明,拟穴青蟹NOS蛋白与眼斑龙虾NOS蛋白组成较为接近.二级结构以α螺旋和随机卷曲为主.NOS全长1214个氨基酸,其空间结构分别以2G60、3HR4、1QGY的A链为模板,分三段进行建模,得到合理的空间结构.实验数据为深入研究一氧化氮合成酶的蛋白结构和免疫功能的关系奠定了基础.