Fulminant hepatic failure caused by Salmonella paratyphi A infection

We report a case of fulminant hepatic failure associated with Salmonella paratyphi A infection, in a 29-yearold patient who was admitted to the intensive care unit （ICU） with fever of two days, headache and vomiting followed by behavioural changes and disorientation. On examination, the patient appeared acutely ill, agitated, confused, and deeply jaundiced. Temperature 38.5℃, pulse 92/min, blood pressure 130/89 mmHg. Both samples of blood grew S. paratyphi A, which was sensitive to ceftriaxone and ciprofloxacin. Ceftriaxon was administered with high-dose dexamethasone. Two weeks after treatment with ceftriaxon, the patient was discharged in satisfactory condition.

三种疫苗对牦牛免疫血清抗体效价监测分析

为监测牛病毒性/黏膜病灭活疫苗、牛副伤寒灭活疫苗及多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗对牦牛的免疫效果,本试验选取健康牦牛40头,以多杀性巴氏杆菌病灭活疫苗每头4 mL的剂量、牛病毒性/黏膜病灭活疫苗及牛副伤寒灭活疫苗每头2 mL的剂量进行接种,并于免疫后30、60、90、120、150和180 d后采集血液,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法对牦牛血清抗体进行检测。结果表明,病毒性/黏膜病灭活疫苗免疫保护效果较好,免疫6个月后能维持较高的血清抗体效价;牛副伤寒灭活疫苗及多杀性巴氏杆菌灭活疫苗免疫抗体效价较低。本试验对免疫后抗体的监测评估为今后牦牛三种疫病的疫苗免疫防控提供了数据支撑。

某中学不同亚型副伤寒沙门菌感染患者的临床特征与耐药性分析

目的通过分析一起甲型和乙型副伤寒同时暴发流行事件中患者临床特征及分离的甲型和乙型副伤寒沙门菌株对药物的敏感性,为不同血清型副伤寒同时暴发流行的合理治疗提供依据。方法回顾性分析2018年9-11月乌鲁木齐市某中学发生的甲型和乙型副伤寒同时暴发流行事件中所有患者的临床特征、细菌耐药性。结果66例患者确诊副伤寒31例,35例为疑似病例,包含1例甲型和乙型副伤寒沙门菌共感染者;共分离32株副伤寒沙门菌,其中19株为甲型副伤寒沙门菌,13株为乙型副伤寒沙门菌。分离菌株的耐药性分析显示,甲型副伤寒沙门菌对氨苄西林、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑、头孢他啶、头孢曲松、氯霉素的敏感率为100%,乙型副伤寒沙门菌对氨苄西林、左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑的敏感率为100%,所有分离菌株对环丙沙星中介率为100%。结论该轮甲型和乙型副伤寒同时暴发流行事件中存在甲型和乙型副伤寒沙门菌共感染的情况,且存在对环丙沙星耐药率高的特点,应引起实验室及临床的高度关注。

甲型副伤寒沙门氏菌HmpA蛋白的表达纯化及生物学特征预测

目的:原核表达甲型副伤寒沙门氏菌(Salmonella paratyphi A)HmpA蛋白,并对其进行生物信息学分析,为研究副甲菌HmpA蛋白对于宿主体内一氧化氮(NO)信号通路的影响提供理论参考。方法:PCR扩增hmpA基因,亚克隆至T载体后,再构建pNdeI-hmpA表达载体,转化BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDSPAGE检测蛋白表达形式,利用Histrap预装柱亲和纯化HmpA蛋白,并用Western blot鉴定,生物信息学多方法分析HmpA蛋白特征。结果:成功构建了原核表达载体pNdeI-hmpA,低温诱导时,HmpA蛋白以包涵体和可溶表达形式并存;纯化后的HmpA蛋白可被His标签抗体检测。生物信息学分析提示HmpA蛋白为亲水性蛋白;无跨膜结构域、无信号肽;蛋白二级结构主要由α螺旋与不规则卷曲构成,三级结构模型类似环状;蛋白结构域分析表明含有1个功能结构域,属于PRK13289超级家族;共有32个磷酸化位点;与沙门氏菌多个降解硝酸盐和杀伤性NO的蛋白酶或转录因子存在关联。结论:本研究成功利用基因工程技术获得了甲型副伤寒沙门氏菌HmpA蛋白,并通过生物信息学方法预测了其部分生物学特征,为后续揭示甲型副伤寒沙门氏HmpA蛋白对于宿主体内的一氧化氮信号通路的影响提供理论支持。

汤卜逊沙门菌暴发分离株的鉴定及与丙型副伤寒沙门菌的鉴别

目的探讨丙型副伤寒、猪霍乱以及汤卜逊沙门菌的血清型鉴定要点,评价不同诊断血清的鉴定能力。方法用三家不同生产厂家的沙门菌诊断血清对丙型副伤寒、猪霍乱、猪霍乱库氏变种沙门菌三株标准株以及GSS中国区监测的疑似丙型副伤寒暴发分离株、猪霍乱和汤卜逊沙门菌进行血清鉴定,同时利用PCR、生化、以及MLST分型分析对这些菌株进行辅助分析。结果血清分型显示暴发菌株为汤卜逊沙门菌,那些原来鉴定为猪霍乱沙门菌的菌株也是汤卜逊沙门菌;PCR结果显示这些暴发菌株和散发菌株的Vi基因为阴性;还发现某些诊断血清的H:c因子血清能够与H:k抗原发生交叉凝集,从而导致血清型的误判;另外,MLST分型分析显示这些汤卜逊沙门菌菌株与丙型副伤寒、猪霍乱等沙门菌之间有差异;卫矛醇、粘液酸和H2S三种生化反应显示丙型副伤寒、猪霍乱、猪霍乱库氏变种沙门菌之间具有明显的生化差别。结论近期我国报告为丙型副伤寒的暴发中,需要鉴定是否为汤卜逊沙门菌所致,注意诊断血清的交叉反应所致的误判,可用生化鉴定、MLST分型分析以及PCR等方法进一步鉴定。

需氧厌氧培养方式对甲型副伤寒沙门菌检出率的影响

目的探讨需氧和厌氧血培养方式的选择对甲型副伤寒沙门菌检出率的影响。方法使用mini VI-TAL自动荧光血培养仪或BacT/Alert 3D培养仪对18684例疑似血流感染患者血液(含骨髓)标本进行需氧和(或)厌氧培养(其中仅做需氧培养935例,仅做厌氧培养16例,需氧和厌氧配对培养17733例,每瓶注入约5 ml血液)。结果18684例血液标本,共分离到甲型副伤寒沙门菌3888例(20.81%)。在17733例需氧和厌氧配对培养中检出3613例,其中仅需氧阳性406例占11.24%(406/3613),仅厌氧阳性405例占11.21%(405/3613),需氧和厌氧培养均阳性者2802例占77.55%(2802/3613),需氧和厌氧均生长的阳性报警时间分别为(22.56±13.22)h和(26.69±15.80)h,仅需氧阳性的报警时间为(32.85±23.33)h,仅厌氧阳性的报警时间为(34.46±18.44)h。结论需氧和厌氧血培养方式获得甲型副伤寒沙门菌的阳性率相同,采用需氧和厌氧瓶配对培养可提高阳性检出率,只做厌氧或需氧培养将有11.24%或11.21%阳性病例被漏检。

28 292份临床血液标本细菌培养结果

目的调查某院临床送检血液标本中病原菌的分布特征。方法采用mimiⅥTAL全自动荧光血培养仪、Bact/ALERT 3D培养仪和ⅥTEK32自动细菌鉴定仪对该院1999-2008年临床送检的28 292人份55 606瓶血标本进行培养鉴定,对培养结果作统计分析。结果 28 292份临床血液标本进行需氧和厌氧培养,其中5 837份细菌培养阳性,阳性率20.63%;需氧生长和厌氧生长分别占阳性培养的83.50%(4 874/5 837)和82.30%(4 804/5 837)。共检出各种临床细菌43属117种5 837株,其中甲型副伤寒沙门菌4 486株,占76.85%,2001年(1 263株)、2004年(740株)和2006年(713株)为检出高峰年份。除外传染病因子,菌群组成以革兰阳性球菌为主,革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌、真菌的比例为65.73:25.30:2.74。凝固酶阴性葡萄球菌占阳性检出菌(沙门菌属除外)的37.46%(493/1 316),居分离菌首位,并有逐年上升趋势(x^2=127.81,P<0.01)。近年真菌的分离率也在逐渐升高(x^2=29.77,P<0.01)。专性厌氧菌占全部分离菌的0.38%(22/5837),占除沙门菌属外的1.67%(22/1316)。结论同时做需氧和厌氧培养可以提高细菌培养的阳性检出率。甲型副伤寒沙门菌的持续检出和某些条件致病菌(凝固酶阴性葡萄球菌和真菌)的上升趋势应引起临床的高度关注。

甲型副伤寒杆菌pagC基因分布及其重组表达产物免疫保护作用

目的:了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性,确定甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核重组表达产物rPagC免疫原性和保护作用。方法:采用PCR及其产物测序了解甲型副伤寒沙门菌临床菌株pagC基因携带率及序列保守性。构建甲型副伤寒沙门菌pagC基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提纯表达的rPagC。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测rPagC表达情况及其产量。采用免疫扩散法、ELISA和Western Blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用小鼠感染模型了解rPagC对甲型副伤寒杆菌感染的免疫保护效果,微量肥达试验检测rPagC免疫小鼠血清凝集伤寒和副伤寒沙门菌的效果。结果:所有被检测的甲型副伤寒沙门菌临床菌株均携带pagC基因,其核苷酸和氨基酸序列相似性分别高达99.1%～100%和98.4%～100%。所构建的原核表达系统能高效表达rPagC。rPagC免疫家兔可产生高效价抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号。ELISA结果显示,97.1%(66/68)甲型副伤寒患者血清标本rPagC抗体阳性。100μg和200μg rPagC对感染小鼠的免疫保护率分别为73.3%(11/15)和86.7%(13/15)。rPagC免疫小鼠血清对甲型副伤寒沙门菌和伤寒沙门菌H抗原凝集效价高达1∶10～1∶40。结论:pagC基因在甲型副伤寒沙门菌株中分布广泛。rPagC有良好的免疫原性及较强的免疫保护作用,可作为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。

宁波地区甲型副伤寒沙门菌基因分型

目的了解宁波地区甲型副伤寒沙门菌的脉冲场凝胶电泳(PFGE)基因型和流行优势型,为探讨传播途径和追踪传染源等提供依据。方法用全自动细菌鉴定仪(Vitek32)确定细菌的生物学特征;用诊断血清确定细菌的血清型;用PFGE方法对细菌的染色体进行基因分型。结果102株甲型副伤寒沙门菌可分成9个PFGE型,其中X2型73株,占71.57%,X1型21株,占20.58%,X7型2株,占1.96%,其他6个型各1株,分别占0.98%。其中优势型为X2型,菌株的带型变化在l^3条范围内,表明宁波地区的甲型副伤寒沙门菌变异不大,有可能是同一克隆系的甲型副伤寒沙门菌。结论PFGE分型对探讨伤寒、副伤寒疫情内在联系具有重要意义,该法特异性高、重复性好、结果容易判读,有实际应用价值。

杭州甲型副伤寒分离菌株脉冲场凝胶电泳分型

目的研究杭州部分地区甲型副伤寒暴发与散发分离菌株的分子流行病学关系及菌株耐药状况。方法对2002-2005年杭州地区L县和X区5起暴发疫情和10起散发病例的分离菌株,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法进行分子分型,采用纸片法(K-B法)测定2种分离株的抗生素敏感性。结果分离自2个地区的15株菌株被分为A、B、C、D共4型,A、B、C等3个型密切近缘,同属一个克隆系。L县2005年7月和8月2起暴发菌株和8月3株散发菌株的PFGE型别均属B型,X区2004年12月和2005年9月的2起暴发菌株和9,10月的6株散发菌株的PFGE型别同属C型。4个型别的菌株对复方磺胺甲唑和利福平均100%耐药,对头孢唑啉、头孢曲松、链霉素、庆大霉素、阿米卡星、氯霉素、诺氟沙星、环丙沙星、呋喃唑酮均敏感,对氨苄西林、多西环素和四环素等不同程度耐药。结论除1株散发菌株外,2002-2005年分离自杭州L县和X区的甲型副伤寒病原菌属于同一克隆系。散发病例可能均属于暴发流行后的散发流行。

广西某中学甲型副伤寒暴发的流行特征及原因

目的 调查甲型副伤寒暴发疫情的流行特征及原因。 方法 对发热病人进行个案调查、采样和疫点环境卫生学调查 ,运用描述性流行病学和卫生统计学方法对现场调查资料和实验室结果进行统计和分析。 结果 本起疫情共发生甲型副伤寒病例 3 2 2例 ,罹患率 9.2 1%。其中学生 3 2 1例 ,食堂从业人员 1例 ;内宿罹患率 (14 .3 8% )高于外宿(0 .2 9% ) (P <0 .0 1) ;男性罹患率 (12 .45 % )高于女性 (6.0 2 % ) (P <0 .0 1) ;流行时间为 3 6d ,流行过程有两个波峰 ;共分离出甲型副伤寒沙门氏菌 41株 ,其中发热病人血和粪便培养分别为 2 0株和 2株 ,无症状学生肛拭培养为 19株 ;2 3株菌株对 18种常用抗生素均敏感。流行原因为无安全饮用水、食堂卫生状况不良、学生有饮生水等不良卫生习惯等 ;传播途径流行前期极可能为水型传播所致 ,后期则为生活接触传播。 结论 加强学校水源及食堂卫生的管理和监督、改善学生卫生习惯是防止甲型副伤寒疫情暴发的关键措施 ;流行早期及时采取严格、有效的措施和保证资金投入是短期内疫情得到有效控制的保证。

甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白的分离纯化及其抗血清的制备

目的 提纯甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白并制备其抗血清。方法 酸裂解法分离副伤寒杆菌鞭毛蛋白,通过半饱和硫酸铵提取、AKTAExplorer蛋白纯化系统除盐及弱阴离子交换层析纯化,所获得鞭毛蛋白的产量通过考马斯亮蓝法测定。纯化后的鞭毛蛋白免疫新西兰大白兔,通过免疫印迹试验和双向免疫扩散试验,确定血清中是否有抗鞭毛蛋白抗体产生及其效价。结果 SDS PAGE提示,纯化的鞭毛蛋白为1条相对分子量为5 2×10 3 蛋白带;免疫印迹实验亦提示条带在5 2×10 3 处;蛋白定量测得每1克湿重的细菌可提取(4 8±0 5 )mg鞭毛蛋白;抗鞭毛蛋白抗血清效价为1∶64。结论 经酸裂解法可获得高产量的鞭毛蛋白,其抗血清易于制备,滴度高,该抗血清可能在拮抗脓毒血症炎症损伤作用方面有积极意义。

一起甲型副伤寒沙门菌污染水源所致腹泻暴发疫情的病原学调查

目的对一起腹泻暴发疫情进行病原学调查,以便明确病因、进行有效的预防控制。方法采用荧光PCR快速检测、常规病原学分离培养、噬菌体裂解试验、ATB微生物自动鉴定系统等方法对疑似患者、环境水源水和饮用水采样,进行病原学的检测和鉴定。结果经荧光PCR检测与病原分离培养鉴定,来自患者粪便、血液、水源水和饮用水共12份疑似标本中,10份为甲型副伤寒沙门菌阳性,检出率为83.33%,其中4份来自粪便标本,4份来自血,1份来自水源水,1份来自饮用水。10株不同来源甲型副伤寒沙门菌的血清学分型、生化反应、药物敏感性、噬菌体裂解试验均相同。结论这是一起由甲型副伤寒沙门菌水源污染所致的腹泻暴发疫情。该菌的检出为本地区腹泻病原谱增加了一种新的病原菌。

甲型副伤寒沙门菌外环境中存活力研究

目的 了解甲型副伤寒沙门菌在蛏子、水体及物体表面等外环境中的存活力，为防控甲型副伤寒的流行提供实验依据。方法将活蛏养殖在适量甲型副伤寒沙门菌污染的海水中，观察不同温度下甲型副伤寒沙门菌在蛏体内的存活时间；在海水、井水、河水、污水、自来水中加入适量甲型副伤寒沙门菌后保存，分别观察不同温度情况下甲型副伤寒沙门菌存活时间；在玻璃表面污染适量甲型副伤寒沙门菌，自然干燥后，置于不同温度保存，观察甲型副伤寒沙门菌存活时间。结果甲型副伤寒沙门菌在4～8℃养殖的蛏子体内可存活10d以上；在井水、河水、污水中可存活3d，在自来水中〈6h，在27℃以下海水中存活3～5d。在27℃以上海水中可存活1～2d，在干燥非吸水性物体表面存活1～2d。结论甲型副伤寒沙门菌在实验蛏体内可存活至蛏子死亡，在温度较低海水中的存活时问比井水、河水、污水、自来水长，环境温度越高死亡越快。

甲型副伤寒沙门氏菌主动外排多重耐药基因与表达研究

目的调查临床分离甲型副伤寒沙门氏菌对常用抗生素的耐药情况与多重耐药主动外排基因acrB的检测、序列分析及其表达水平。方法用琼脂二倍稀释法测定7种抗生素对甲型副伤寒沙门氏菌的抗菌活性,以基因库序列为参考设计引物PCR扩增acrB、测序并用RT-PCR方法检测其表达。结果12株甲型副伤寒沙门氏菌对氧氟沙星、环丙沙星、头孢噻肟、哌拉西林、氯霉素、四环素、庆大霉素的耐药率除氯霉素为0外,其余均为8.33%。对三类不同种类抗菌药物多种耐药者1株。所有细菌均检测到多重耐药外排基因acrB,测序结果与参考沙门氏菌序列(No.AL627267)比较,有1处碱基差异。与大肠埃希氏菌(No.ECU00734)比较,碱基同源性为84.41%(70/449),提示其碱基序列同源性均极高。分别选取对两类抗菌药物耐药及敏感甲型副伤寒沙门氏菌各一株进行RT-PCR检测,结果两株细菌均检测到多重耐药外排基因acrB的表达。结论甲型副伤寒沙门氏菌对喹诺酮类、第三代头孢菌素类等药物耐药率低,但有多重耐药。甲型副伤寒沙门氏菌中均存在acrAB主动外排系统,与大肠埃希氏菌同源性高,可检测到其表达。主动外排机制可能是甲型副伤寒沙门氏菌形成多重耐药的主要原因之一。

伤寒和甲型副伤寒沙门菌复合PCR检测

目的建立用于快速和特异检测伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌的复合PCR方法。方法根据rfbS、rfbEf、liC和vi基因序列设计4对PCR引物,对54株沙门菌和其他菌属的菌株进行复合PCR检测。结果采用所建立的复合PCR方法可分别检测到伤寒和甲型副伤寒沙门菌的3条和2条特异性条带带型,可与其他菌株带型准确分开。结论本研究建立的复合PCR方法可用于检测伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌。

388株甲型副伤寒沙门菌对常用抗菌药物的敏感性

目的测定临床分离甲型副伤寒沙门菌对21种常用抗菌药物的敏感性,为治疗该菌感染提供依据。方法自病人血液、骨髓穿刺液中分离出甲型副伤寒沙门菌388株,采用ATB全自动鉴定及药敏测试仪测定此菌的体外药物敏感性。结果测定该菌对21种常用抗菌药物敏感率,氯霉素、氧氟沙星、亚胺培南和美罗培南为100%;敏感率在90%以上者为哌拉西林、替卡西林、替卡西林-克拉维酸、氨曲南、头孢噻肟、头孢哌酮、头孢吡肟、头孢西丁、庆大霉素、奈替米星、妥布霉素和环丙沙星等。结论甲型副伤寒沙门菌体外药敏试验对常用的半合成青霉素,头霉素类,碳青霉烯类,氨基糖苷类,第三、四代头孢菌素和氟喹诺酮类等药物均敏感。

甲型副伤寒沙门菌对喹诺酮类药耐药机制的研究

目的探讨甲型副伤寒沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性变异及其机制。方法药敏检测,采用VITEK-32自动微生物分析系统或纸片扩散法;基因分析,采用聚合酶链反应(PCR)法扩增含有喹诺酮类耐药决定区的gyrA、gyrB、parC和parE4个基因片段,并进行测序分析。结果3 528株甲型副伤寒沙门菌的耐药率在1999-2006年8年中上升最显著的是喹诺酮类药,其中萘啶酸由20.00%升至99.07%,培氟沙星由0升至97.37%(χ2=259.39,P<0.01;χ2=406.20,P<0.01);青霉素类也有不同程度的耐药。15株耐药菌株上述4个基因序列检测结果,gyrA基因均存在同一个突变位点,即83位氨基酸Ser→Phe突变(TCC→TTC),突变率达100%;其余3个基因未发现突变。结论甲型副伤寒沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性严重,主要机制是喹诺酮类耐药区gyrA基因的第83位表现出高频单点突变,其耐药表型和基因突变有较高的一致性。

云南玉溪地区甲型副伤寒沙门菌的耐药性变迁

目的了解本地区甲型副伤寒沙门菌对几种临床常用药物的耐药现状,重点讨论培氟沙星的耐药性变迁。方法就本院1999年1月至2004年8月从患者临床标本中分离的2335株甲型副伤寒沙门菌,对几种临床常用抗菌药物的药敏试验结果作动态分析。结果甲型副伤寒沙门菌对培氟沙星的耐药率已由1999年的0上升到2004年的98.1%(P<0.01),MIC90≥4mg·L-1;头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁、亚胺培南、呋喃妥因以及复方磺胺甲口恶唑的耐药率均相对较低,MIC90分别为≤4、8、4、4、32和10mg·L-1。结论甲型副伤寒沙门菌对培氟沙星的耐药率上升迅速;临床需加强对氟喹诺酮类药物的合理使用。

2008-2018年北京市伤寒、副伤寒沙门菌病原学特征

目的了解北京市伤寒、副伤寒沙门菌流行特征、耐药及分子分型特点,为伤寒、副伤寒防制工作提供依据。方法通过对2008-2018年北京市肠道门诊监测系统收集到的65株伤寒、副伤寒沙门菌,采用最小抑菌浓度(minimal inhibition concentration,MIC)法进行16种抗生素药敏试验;采用脉冲场凝胶电泳PFGE方法进行分子分型研究。结果 65株菌包含4种血清型:伤寒沙门菌24株,占36.9%,甲型副伤寒沙门菌7株,占10.8%,乙型副伤寒沙门菌20株,占30.8%,丙型副伤寒沙门菌14株,占21.5%。随着年代的推移,会出现血清型的交替变迁,2013年以后,以伤寒和乙型副伤寒沙门菌为主。高发年龄组为0～10岁组和31～40岁年龄组。65株菌对阿莫西林-克拉维酸、强力霉素、阿奇霉素和亚胺培南4种抗生素全部敏感,对其他12种抗生素有不同程度的耐药。对磺胺异噁唑、萘啶酸、链霉素和氨苄西林等经典抗生素的耐药性有上升趋势,对头孢菌素和三代氟喹诺酮类环丙沙星不同血清型间耐药性存在差异,多重耐药率为10.8%(7/65)。58株伤寒、副伤寒沙门菌分成34种PFGE型别,带型分散。除2018年一起输入性伤寒暴发识别出9株菌为同一带型,其余每种带型菌株数1～3株不等,相似度为32.2%～100.0%。结论 2008-2018年,北京市伤寒、副伤寒沙门菌维持在较低水平,血清型正逐步转变成以伤寒和乙型副伤寒为主。不同血清型间抗生素耐药程度不同,临床应合理用药。PFGE型别多样,未出现优势克隆群。