基于近红外光谱法快速同时测定天麻中4种成分含量的研究

采用近红外光谱(NIRS)技术结合偏最小二乘法(PLS)建立天麻中4种成分的快速测定方法,以更好地用于天麻的质量控制。收集来自不同产地的天麻样品共116批次。采用HPLC法测定天麻中的天麻素和对羟基苯甲醇的含量,采用HPLC-MS-MS测定巴利森苷和巴利森苷B的含量;以NIRS积分球漫反射模式采集天麻样品的NIRS图;通过PLS法建立NIRS与待测成分含量间的线性关系模型,从而实现用NIRS对待测天麻样品中4种成分含量的快速测定。天麻中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷和巴利森苷B的NIRS预测值与实测值之间具有良好的线性关系,具有预测稳定性和准确性。结果表明NIRS法结合PLS可以快速地对天麻中的4种成分进行定量分析,为建立天麻药材和饮片的现场快速检测方法奠定了基础。

60Co-γ射线辐射灭菌对天麻药材指纹图谱及有效成分的影响

目的:建立天麻药材指纹图谱,考察不同剂量60Co-γ射线辐照灭菌对天麻药材中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、柠檬酸5个有效成分含量的影响。方法:利用HPLC法,采用wondasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)液相色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 ml·min^(-1);检测波长为220 nm;柱温为30℃,进样量为10μl,建立天麻药材HPLC指纹图谱。分别选择辐照剂量2,6,10 k Gy对天麻进行辐照,比较辐照前后天麻指纹图谱及5个有效成分的变化,并采用SPSS 22.0软件分析5个有效成分辐照前后含量变化。结果:共确定14个共有峰,不同剂量辐照前后天麻药材指纹图谱的相似度为0.918~0.999;辐照剂量不超过6 k Gy时,天麻药材中的天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、柠檬酸含量变化无统计学意义(P>0.05)。结论:所建立的天麻指纹图谱及5个成分含量测定方法可作为天麻质控方法,在辐照剂量不超过6 k Gy时,60Co-γ辐照灭菌法可用于天麻药材的灭菌。

高效液相色谱法测定天麻中7种成分含量

目的建立采用高效液相色谱法测定天麻中7种成分含量的方法。方法天麻药材粉碎过三号筛,用60%甲醇溶液涡旋、超声提取,然后过0.45μm滤膜过滤,采用C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,检测波长220 nm,流速1.0 mL·min^(-1),柱温35℃测定,标准曲线法定量。结果 7种成分在相应的范围内线性关系良好,r≥0.999;回收率(n=6)均在为92.1%～103.9%之间,其相对偏差为RSD=0.75%～1.65%;并对25批样品进行了检测。结论本法适用于天麻中腺苷、天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷E含量的测定。

天麻活性成分巴利森苷B对匹鲁卡品致痫小鼠痫性行为的干预作用及网络药理学作用机制分析

目的:研究天麻活性成分巴利森苷B(parishin B,PB)对癫痫小鼠痫性行为的干预作用及其潜在的作用机制。方法:采用匹鲁卡品腹腔注射方法建立小鼠癫痫模型;通过观察小鼠的癫痫潜伏期、持续状态时间、痫性发作等级变化评价PB对癫痫小鼠的干预作用;采用网络药理学技术分析PB抗癫痫作用机制;使用Auto Dock vina软件对PB成分与抗癫痫关键靶点进行分子对接验证。结果:PB给药组(100,200 mg·kg^(-1))可显著延长癫痫小鼠的癫痫潜伏期(P<0.05)、缩短癫痫持续时间(P<0.05),降低癫痫小鼠痫性发作等级;通过网络药理学技术共筛选获得34个PB抗癫痫核心靶点。GO分析得到64个相关过程,KEGG分析共映射出23条信号通路。分子对接结果显示,PB与7个关键核心靶点具有较好的结合活性。结论:PB具有潜在的抗癫痫活性,其效果呈现一定的剂量依赖性,可能通过与NRAS、HRAS、FGFR3等靶点相互作用,调控PI3K-Akt、Rap1、VEGF等信号通路,发挥抗癫痫的作用,本研究为PB抗癫痫创新药物研究提供参考。

基于AHP-CRITIC法结合响应曲面法多指标优选天麻鲜切片加工工艺

目的建立天麻Gastrodia elata鲜切片质量评价方法,为天麻饮片产地加工提供技术参考。方法以7个指标(天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷E、醇溶性浸出物)含量和外观性状得分的综合评分为指标,采用AHP-CRITIC法确定各指标权重系数。在单因素试验结果的基础上,应用响应曲面法考察干燥温度、切片厚度、干燥时间对天麻鲜切片质量的影响,筛选天麻饮片最佳趁鲜加工工艺参数,同时采用化学计量学的方法对不同单因素天麻趁鲜加工工艺进行比较。结果天麻饮片最佳趁鲜加工工艺为新鲜天麻块茎,洗净,待水沸后置于蒸锅上,一级天麻蒸制25 min,二级天麻蒸制15 min,三级天麻蒸制10 min,取出,斜切6 mm,55℃干燥13 h。结论AHP-CRITIC评分法将主客观相结合,综合评价天麻趁鲜加工饮片质量优劣,评分结果科学、可靠,优化后的工艺条件稳定性好、简便可行,可用于天麻饮片趁鲜加工。

制备型高效液相色谱法制备巴利森苷B对照品

目的制备用于含量测定的巴利森苷B对照品。方法采用大孔吸附树脂柱和硅胶柱色谱结合制备型高效液相色谱分离获得巴利森苷B,并通过紫外、红外、质谱、核磁共振波谱数据鉴定其结构,薄层色谱法和高效液相色谱法检测其纯度,最后在温度、光照等变化下考察其稳定性。结果从天麻中分离制备了符合含量测定用要求的巴利森苷B对照品,HPLC检测质量分数>99.0%。结论本研究制备的巴利森苷B可作为对照品,用于含有该成分的天然产物及其制剂的质量评价和药效物质基础研究。

天舒胶囊化学成分、药理作用和临床应用的研究进展及质量标志物(Q-Marker)的预测分析

天舒胶囊是由古代经典名方“大川芎方”改进研制而成的中药复方,由川芎、天麻2味药物组成,现代药理学研究表明该药具有镇痛、镇静、降压、抗炎、抑制血小板聚集及血栓形成等药理作用。临床上主要用于治疗偏头痛、血管神经性头痛、脑梗死、紧张型头痛、高血压血瘀证等疾病。对天舒胶囊的化学成分、药理作用及临床应用方面的研究进展加以总结,并结合中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)中“五原则”的概念对天舒胶囊的潜在Q-Marker进行预测分析,提示天麻素、天麻苷元、巴利森苷B、阿魏酸、藁本内酯、洋川芎内酯I、洋川芎内酯H和川芎嗪可作为天舒胶囊的Q-Marker,可选择其作为质控指标,为天舒胶囊的质量控制与后续研究提供参考。

基于响应面法的天麻产地加工炮制一体化工艺研究

目的利用响应面法优选天麻产地加工的一体化工艺。方法采用Box-Behnken中心组合设计方法对一体化加工工艺中蒸制时间、干燥温度和干燥时间3个因素进行考察,以天麻中5个指标性成分天麻素及巴利森苷A、B、C、E质量分数的综合评分作为考察指标进行产地加工一体化工艺优化研究。结果最佳一体化加工工艺为蒸制30 min,60℃干燥12 h。结论响应面法优选天麻产地加工一体化工艺简便易行,准确度较好,为中药饮片生产提供了科学的依据和新颖的思路。

HPLC-MS法同时测定天麻饮片中8种活性成分

目的建立同时测定天麻饮片中天麻素、对羟基苯甲醇、香荚兰醇、对羟基苯甲醛、香荚兰醛、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷A8种成分的高效液相色谱．质谱（HPLC-MS）分析方法。方法采用Agilent1220高效液相系统，Hypersil C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；流动相为0．5％醋酸水溶液（A）-0．5％醋酸甲醇溶液（B），梯度洗脱：0～10min，98％A；10～60min，98％～60％A；60～75min，60％A；分析时间75min；体积流量0．8mL／min；柱温30℃；进样量20uL。采用电喷雾离子源进行负离子模式监测，多反应监测模式用于定量分析，源喷射电压为-4500V，离子源温度为550℃。结果测定的8种成分在线性范围内均具有良好的线性关系（r≥0．9992）：平均回收率在94．51％～102．70％，RSD〈3．50％。在不同产地的天麻饮片中，8种成分的量差异较大。其中，3种巴利森苷类成分的量较高，香荚兰醇和香荚兰醛的量均较低。结论建立的测定方法分离效果及重复性好，且快速、简便，可作为天麻饮片的质量控制方法。

天麻中6种天麻素类成分一测多评分析法的建立

目的建立天麻药材中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷E 6种天麻素类成分的一测多评测定方法。方法采用Agilent Zorbax SB-C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.05%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱,0~5 min,2%A;5~20 min,2%~30%A,20~25 min,30%~2%A,检测波长220 nm,体积流量1.0 m L/min,柱温25℃。以天麻素为内参物,分别建立对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷E的相对校正因子,利用该相对校正因子计算其他5种成分的量,同时利用外标法测定天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷E的量,比较2种测定方法的差异,验证一测多评法的可行性和准确性。结果在线性范围内,天麻素与对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷E的相对校正因子分别为0.663、1.278、1.435、1.389、1.591,在不同实验条件下相对校正因子重现性良好,6种天麻素类成分的计算值与实测值无显著性差异。结论一测多评法测定天麻药材中6种天麻素类成分准确且可行,可用于天麻药材的质量控制。

UPLC指纹图谱结合多成分含量测定的天麻饮片质量研究

目的建立天麻饮片UPLC指纹图谱和同时测定天麻饮片中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷B、巴利森苷C、巴利森苷A的超高效液相色谱分析方法。方法采用Waters Acquity超高效液相系统,Waters ACQUITY UPLC BEH C18(50 mm×2.1 mm,1.7μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.1%甲酸水,梯度洗脱,检测波长270 nm(指纹图谱)、220 nm(含量测定),体积流量为0.3 mL/min,柱温35℃。通过相似度评价、主成分分析、偏最小二乘判别分析对28批天麻饮片指纹图谱进行分析,通过对照品比对对主要共有峰进行指认和含量测定。结果建立了不同产地天麻的指纹图谱,标定了20个共有峰,并指认了其中6个共有峰:天麻素(1号峰)、对羟基苯甲醇(3号峰)、对羟基苯甲醛(7号峰)、巴利森苷B(14号峰)、巴利森苷C(15号峰)、巴利森苷A(18号峰)。28批样品相似度均在0.90以上,主成分分析将不同产地天麻分为5组,并发现对羟基苯甲醇、对羟基苯甲醛、巴利森苷A等6个差异成分。同一成分在各产地天麻饮片中的含量差异明显,不同成分的波动范围不同,各产地5种成分总量贵州(2.52%)>云南(2.49%)>陕西(2.33%)>湖北(2.10%)>浙江(1.90%)>安徽(1.65%)。结论建立不同产地天麻UPLC指纹图谱结合多成分含量测定方法为完善天麻饮片的质量控制提供了参考。

天麻的化学成分研究(Ⅱ)

目的研究天麻Gastrodia elata的化学成分。方法利用柱色谱、凝胶柱色谱、高效液相色谱等各种色谱技术对天麻50%乙醇提取物进行分离,根据其所得化合物的理化性质与UV、IR、MS、NMR等光谱数据鉴定其结构。结果从天麻50%乙醇提取物中分离得到9个化合物,分别鉴定为1-furan-2-yl-2-(4-hydroxy-phenyl)-ethane-1,2-dione(1)、2,4-bis(4-hydroxybenzl)-phenol(2)、4-(甲氧甲基)苯基-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、1-furan-2-yl-2-(4-hydroxy-phenyl)-ethanone(4)、巴利森苷B(5)、巴利森苷C(6)、{1-[4-(β-D-吡喃葡萄糖-(1→3)-β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基],2-[4-(β-D-吡喃葡萄糖氧)苄基]}柠檬酸酯(7)、bis(4-hydroxybenzyl)sulfide(8)、对羟基苄基二硫醚(9)。结论化合物1为未见报道的新化合物,命名为天麻呋喃二酮,化合物9为该属植物中首次分离得到。

HPLC-FLD法同时测定不同产地天麻中5个成分含量

目的:建立高效液相色谱-荧光检测方法测定天麻中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C的含量。方法:采用资生堂MGⅢ色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.1%甲酸水(A)-乙腈(B),流速为1 mL·min^(-1),柱温35℃,进样量5μL,荧光检测器,激发波长为228 nm,发射波长为300 nm。结果:天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷A、巴利森苷B、巴利森苷C的线性范围分别在10～5000(r=0.999 6)、10～5 000(r=0.999 9)、250～50 000(r=0.999 6)、250～50 000(r=0.999 9)、250～50 000 ng·mL^(-1)(r=0.999 7)范围内线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为98.5%、97.2%、99.2%、98.7%、96.8%,RSD分别为5.8%、4.6%、0.86%、2.4%、4.8%;28批样品中上述5个成分的含量分别为0.5～20.0、0.1～2.5、0.5～15.4、1.6～8.2、0.7～2.1 mg·g^(-1)。结论:建立的方法杂质干扰少,分离度好,灵敏度高,线性范围宽,适于天麻成分分析及药材质量控制。

基于多指标同时定量的天麻块茎不同部位质量特征研究

目的 通过分析天麻Gastrodia elata块茎不同部位中多种指标成分的差异,为天麻药材不同部位的质量评价及合理应用提供依据。方法 运用HPLC法同时测定12批天麻药材中不同部位(箭芽端、中端、肚脐端)的天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷E、巴利森苷B、巴利森苷C和巴利森苷A6种指标成分的含量;应用SPSS软件对天麻药材不同部位各12批数据进行统计学分析,以综合分析天麻块茎不同部位的质量特征。结果 天麻箭芽端中6种指标成分含量均最高;6种成分总含量在天麻3个部位中的分布规律为箭芽端>中端>肚脐端,分别达到2.727%、1.258%、1.129%,而其中的巴利森苷类成分总量的分布规律与6种成分总量一致,其质量分数分别为2.318%、1.007%、0.862%,占所测成分总量的76%~85%。天麻样品中对羟基苯甲醇在箭芽端、中端和肚脐端的分布均无显著性差异;天麻中的天麻素和巴利森苷类总成分在箭芽端与另外2部分之间的含量差异极显著,而在肚脐端和中端之间的含量差异不显著。综合分析结果表明,天麻箭芽端部位的质量显著优于其他2个部位。结论 天麻块茎不同部位的6种指标成分含量存在差异性,具有明显的质量特征,可为天麻块茎不同部位的合理应用及药材的质量控制提供参考。