PINCH-1基因RNAi慢病毒载体的构建及鉴定

目的构建人PINCH-1基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并转染人骨髓基质细胞初鉴定转染效果。方法利用RNAi设计软件,设计合成针对人PINCH-1基因的特异性siRNA序列,利用酶切反应合成包含特异性shRNA序列的pGC-SIL-GFP慢病毒载体GC-shBC047440,通过GC-shBC047440与pHelper 1.0载体和pHelper 2.0载体共转染包装293FT细胞产毒,并利用GFP蛋白表达水平进行滴度测定。获取的病毒上清筛选最适感染复数(MOI值),并感染骨髓基质细胞,RT-PCR和Western blot检测重组慢病毒对骨髓基质细胞PINCH-1蛋白和RNA表达的影响。结果酶切鉴定证实成功构建针对人PINCH-1基因的RNAi慢病毒干扰载体GC-shBC047440,载体感染人骨髓基质细胞后PINCH-1RNA表达较未感染组和空载体对照组显著下降。结论成功构建针对人PINCH-1基因的RNAi慢病毒载体,该载体能有效沉默PINCH-1基因的表达。

结直肠癌组织中VEGF、PINCH mRNA的表达变化及意义

目的观察结直肠癌组织中VEGF、PINCH mRNA的表达变化,探讨其在结直肠癌发生、发展中的作用。方法采用RT-PCR法检测40例结直肠癌组织、配对的癌旁无瘤黏膜组织、手术近端及远端切缘正常黏膜组织中的VEGF、PINCH mRNA。结果结直肠癌组织中VEGF、PINCH mRNA的表达量分别为0.975±0.397、0.772±0.591;癌旁无瘤黏膜组织中分别为0.351±0.255、0.494±0.327;近端切缘黏膜中分别为0.441±0.360、0.518±0.298;远端切缘黏膜中分为为0.423±0.248、0.488±0.335,P均<0.01。结直肠癌组织中VEGF mRNA的表达与组织学分级、浸润深度及淋巴结转移密切相关(P均<0.05),PINCH mRNA表达与组织类型有关(P<0.05);结直肠癌组织中VEGF mRNA的表达与PINCH mRNA的表达呈显著正相关(r=0.431,P=0.022)。结论结直肠癌组织中VEGF、PINCH mRNA的表达上调。VEGF和PINCH mRNA与结直肠癌的发生、发展及转移密切相关。