维生素D受体野生型及FokⅠ突变型真核表达载体的构建

目的:克隆人维生素D受体(VDR)全长,构建VDR野生型及FokⅠ突变型重组真核表达质粒。方法:提取总RNA,RT-PCR方法扩增将产物用EcoRⅠ和HindⅢ进行双酶切后与pcDNA3.1(-)B-myc/his载体连接形成重组载体;对野生型VDR基因行定点诱变,构建突变型FokⅠVDR质粒。结果:重组质粒被酶切为两条带,一条为1300bp(代表人VDR),一条为5500bp(空载体);片段大小与理论值相符。测序结果与Genbank序列完全相同。结论:成功克隆了人VDR基因全长并成功构建了人野生型和突变型FokⅠVDR重组真核表达载体pcDNA3.1(-)B-myc/hishVDR,为进一步研究VDR基因变异与相关肿瘤易感性的分子机制奠定了实验基础。