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人可溶性白介素-1受体真核表达载体pcDNA3/sIL-1R的构建 被引量:4
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作者 李鹏 徐艳 +2 位作者 张蕴惠 章锦才 王大章 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期140-143,共4页
目的 本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法 将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外... 目的 本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法 将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外连接酶切片段 ,使其定向重组 ,再将重组DNA转化E .coliCompetentCellsJM10 9,经复苏后 ,在含Ampr 的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。结果 挑取的LB固体培养基上的 6个单菌落经酶切及测序鉴定 ,证实均为阳性克隆 ,即sIL_1R与pcDNA3 1(+)体外重组成功。结论 采用体外重组技术 ,成功地将人sIL_1RcDNA插入了真核表达载体pcDNA3 1(+) 展开更多
关键词 人可溶性白介素-1受体 真核表达载体 PCDNA3 骨关节病 基因治疗
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生长激素信号肽可诱导重组蛋白外分泌表达 被引量:4
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作者 张志谦 李金萍 胡颖 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期282-286,共5页
Signal peptide capable of efficiently directing many protein secretion in mammalian cells is one of the key elements in recombinant protein production,gene therapy and the development of DNA vaccines.In order to explo... Signal peptide capable of efficiently directing many protein secretion in mammalian cells is one of the key elements in recombinant protein production,gene therapy and the development of DNA vaccines.In order to explore the possibility of rat growth hormone signal peptide as such an element,a new vector based on the mammalian expression vector pcDNA3 was constructed by employing rat growth hormone(rGH) signal peptide as leading sequence,followed by multiple cloning sites,the myc epitope-tag and 6×his purification tag in the expression cassette.The vector was validated by successfully expressing and secretion of chick MMP-2 C-terminal PEX domain,a potential angiogenesis inhibitor,and tandem peptide repeats of myc epitope-tag in COS-7 cells.These results suggest that rat growth hormone signal peptide is effective in the mediation of recombinant protein expression and secretion,and this vector provides a new tool for universal cloning and secretion of exogenous proteins in mammalian cells. 展开更多
关键词 expression 分泌表达 重组蛋白 生长激素 vector 信号肽 SIGNAL universal elements multiple 诱导 SIGNAL PCDNA3 domain the and MMP-2 COS-7 rat tool new was one key his tag The PEX for ce
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HOGG1特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 张勤 张遵真 衡正昌 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期111-113,共3页
目的 设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因HOGG1cDNA保守序列的真核表达载体。方法 运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶... 目的 设计并合成人8 羟基鸟嘌呤 DNA糖苷酶(HOGG1)特异性的锤头状核酶(hammerheadribozyme)基因并构建其真核表达载体。鉴定含有核酶靶基因HOGG1cDNA保守序列的真核表达载体。方法 运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ) ,将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA 3 1中,重组子由BamHI和EcoRI酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序证实。含有HOGG1基因cDNA保守序列的真核表达载体经BamHI和EcoRI酶切电泳鉴定。结果 RZ人工合成后与pcDNA 3 1连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA 3 1的BamHI和EcoRI位点之间,命名为pcDNA 3 1 RZ。1 3kb的HOGG1基因cDNA保守序列准确克隆于pcDNA 3 1的BamHI和EcoRI酶切位点之间,命名为pcDNA 3 1 HOGG1。结论 成功合成HOGG1特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的真核表达载体。 展开更多
关键词 G1特异性 真核表达载体pcdna3.1 鉴定 HOGG1 基因CDNA 8-羟基鸟嘌呤 琼脂糖凝胶电泳 锤头状核酶基因 DNA测序 保守序列 计算机软件 基因克隆 人工合成 基因序列 靶基因 酶切 糖苷酶 重组子 克隆人 设计 准确 位点
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重组hPPAR-α受体表达质粒的构建 被引量:1
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作者 唐小峦 《海峡药学》 2014年第9期144-145,共2页
目的构建人PPAR-α受体的重组表达质粒。方法从基因库获取人PPAR-α基因蛋白编码区全长序列,依照引物设计原则及编码序列上已有酶切位点设计引物并添加酶切位点。从正常肝组织细胞提取总RNA,逆转录得cDNA,PCR扩增目的片段,克隆到pcDNA3.... 目的构建人PPAR-α受体的重组表达质粒。方法从基因库获取人PPAR-α基因蛋白编码区全长序列,依照引物设计原则及编码序列上已有酶切位点设计引物并添加酶切位点。从正常肝组织细胞提取总RNA,逆转录得cDNA,PCR扩增目的片段,克隆到pcDNA3.1真核表达载体,测序鉴定重组质粒目的基因蛋白编码区全长序列及开放阅读框的正确性,命名为pcDNA-hPPAR-α。结果核酸测序结果表明所得pcDNA-hPPAR-α的蛋白编码全长序列与基因库一致,正向插入载体pcDNA3.1多克隆位点NheⅠ和KpnⅠ之间,开放阅读框正确。结论成功构建重组质粒pcDNA-hPPAR-α。 展开更多
关键词 PPAR-Α 质粒 pcdna3.1
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pcDNA 3.1-AKR1B10真核表达载体的构建
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作者 杨少龙 徐文涛 石斌 《现代诊断与治疗》 CAS 2012年第2期95-97,共3页
从胰腺癌PaTu8988S细胞中提取总RNA,并克隆AKR1B10基因,构建pcDNA 3.1-AKR1B10真核表达载体。转化感受态大肠杆菌DH5α细胞,提质粒,酶切及测序鉴定,pcDNA 3.1-AKR1B10真核表达载体构建成功。
关键词 AKR1B10 pcdna3.1 真核表达载体
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人端粒酶催化亚单位(hTERT)特异性锤头状核酶真核表达载体的构建及鉴定
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作者 樊丽 许景伟 邹宇 《齐齐哈尔医学院学报》 2008年第21期2564-2566,共3页
目的设计并合成人TERT特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体。含有核酶靶基因hTERTcDNA保守序列的T载体pMD18-T-hTERT的构建。方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体... 目的设计并合成人TERT特异性的锤头状核酶(hammerhead ribozyme)基因并构建其真核表达载体。含有核酶靶基因hTERTcDNA保守序列的T载体pMD18-T-hTERT的构建。方法运用计算机软件人工设计并合成核酶基因(RZ),将核酶基因克隆到真核表达载体pcDNA 3.1(+)中,重组子由BamH I和EcoR I酶切,琼脂糖凝胶电泳鉴定及DNA测序。RT-PCR法扩增目的基因cDNA保守序列,与pMD-18进行T-A连接,重组子经菌液PCR及测序鉴定。结果RZ人工合成后与pcDNA 3.1(+)连接,酶切电泳及DNA测序证实合成的核酶基因序列正确并已被准确克隆入pcDNA 3.1(+)的BamH I和EcoR I位点之间,命名为pcDNA 3.1-RZ。220bp的hTERT基因cDNA保守序列准确克隆于pMD18-T,命名为pMD18-T-hTERT。结论成功合成hTERT特异性的锤头状核酶基因并构建了该基因的真核表达载体,以及核酶靶基因的pMD18-T-hTERT载体。 展开更多
关键词 HTERT 锤头状核酶 真核表达载体pcdna3.1(+)
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人GRP78基因真核表达载体的构建及鉴定 被引量:1
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作者 吴琼 蔡云鹏 +1 位作者 汤海澎 魏嘉 《辽宁医学院学报》 CAS 2007年第4期26-28,共3页
目的利用PCR技术克隆人GRP78基因编码基因(约2000bp)。方法将PCR产物连接到pcDNA3.1(+)载体上,酶切鉴定后测序分析。结果序列分析表明,扩增片段与GenBank里登陆的序列同源性为100%。并以pcDNA3.1(+)表达载体为框架结构,尝试构建真核表... 目的利用PCR技术克隆人GRP78基因编码基因(约2000bp)。方法将PCR产物连接到pcDNA3.1(+)载体上,酶切鉴定后测序分析。结果序列分析表明,扩增片段与GenBank里登陆的序列同源性为100%。并以pcDNA3.1(+)表达载体为框架结构,尝试构建真核表达载体。结论测序分析结果表明序列同源性为100%。 展开更多
关键词 人GRP78基因 表达载体pcdna3.1(+) 真核细胞
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HBV DNA免疫的实验研究
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作者 刘东辉 汪兴太 +3 位作者 汪德刚 李长贵 张华远 李河民 《临床输血与检验》 CAS 1999年第3期1-3,51,共4页
从中国人血清中克隆出HBsAg adr亚型基因,采用pcDNA 3.1HisC真核细胞表达质粒进行基因重组。重组质粒pcDNA 3.1HisC-HBsAg分别用0.01、0.1、1、10和100μg腿部胫骨肌多点免疫BALB/C小鼠,4周时进行同样剂量加强免疫。初次免疫后4周和8周... 从中国人血清中克隆出HBsAg adr亚型基因,采用pcDNA 3.1HisC真核细胞表达质粒进行基因重组。重组质粒pcDNA 3.1HisC-HBsAg分别用0.01、0.1、1、10和100μg腿部胫骨肌多点免疫BALB/C小鼠,4周时进行同样剂量加强免疫。初次免疫后4周和8周时分别检测HBsAg和HBsAb。结果表明,1μg以上剂量组加强免疫后,均可诱导小鼠产生特异性抗体。揭示HBV有发展DNA疫苗的可能性。 展开更多
关键词 HBVDNA 加强免疫 实验研究 剂量 免疫后 真核细胞表达质粒 胫骨 克隆 重组质粒 基因重组
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