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利用CRISPR/Cas9技术构建能克隆难度序列的Stbl2^(TM)菌株
1
作者
覃鸿妮
谢亦潇
+3 位作者
汤淑伟
薛高旭
谢悦
张勇
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
北大核心
2022年第5期87-93,100,共8页
Stbl2^(TM)菌株适合克隆不稳定的外源DNA片段,但该菌株易受噬菌体侵染,且在构建某些高拷贝质粒时,难以克隆成功。利用CRISPR/Cas9技术将Stbl2^(TM)菌株的抗噬菌体相关基因fhuA和控制拷贝数的基因pcnB进行编辑,降低克隆难度,提高克隆效...
Stbl2^(TM)菌株适合克隆不稳定的外源DNA片段,但该菌株易受噬菌体侵染,且在构建某些高拷贝质粒时,难以克隆成功。利用CRISPR/Cas9技术将Stbl2^(TM)菌株的抗噬菌体相关基因fhuA和控制拷贝数的基因pcnB进行编辑,降低克隆难度,提高克隆效率。针对2个基因分别设计sgRNA,构建含有sgRNA的质粒pTarget-fhuA和pTarget-pcnB,分别将2个质粒与pCas9-Red质粒转入Stbl2^(TM)菌株中,经菌落PCR和测序验证基因正确编辑后再将2个外源质粒消除,并将2 kb的线粒体基因组序列作为外源基因,转入菌株进行最终的功能验证。结果表明:fhuA基因被成功敲除103 bp,pcnB基因被成功敲除802 bp,将高拷贝pUC57质粒转入基因编辑后的Stbl2^(TM)菌株,可明显降低质粒的拷贝数,且能正确克隆线粒体基因难度序列。该研究构建的菌株可作为后续克隆难度序列的感受态使用,还可为难度序列的基因克隆提供借鉴方法。
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关键词
CRISPR/Cas9技术
Stbl2^(TM)菌株
fhuA
基因
pcnb基因
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职称材料
题名
利用CRISPR/Cas9技术构建能克隆难度序列的Stbl2^(TM)菌株
1
作者
覃鸿妮
谢亦潇
汤淑伟
薛高旭
谢悦
张勇
机构
苏州工业园区服务外包职业学院生物科技学院
金唯智生物科技有限公司
瑞特佰生物科技有限公司
出处
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
北大核心
2022年第5期87-93,100,共8页
基金
国家自然科学基金面上项目(22077092)
江苏省产学研合作项目(BY2020521)
江苏省高校“青蓝工程”项目(2020)。
文摘
Stbl2^(TM)菌株适合克隆不稳定的外源DNA片段,但该菌株易受噬菌体侵染,且在构建某些高拷贝质粒时,难以克隆成功。利用CRISPR/Cas9技术将Stbl2^(TM)菌株的抗噬菌体相关基因fhuA和控制拷贝数的基因pcnB进行编辑,降低克隆难度,提高克隆效率。针对2个基因分别设计sgRNA,构建含有sgRNA的质粒pTarget-fhuA和pTarget-pcnB,分别将2个质粒与pCas9-Red质粒转入Stbl2^(TM)菌株中,经菌落PCR和测序验证基因正确编辑后再将2个外源质粒消除,并将2 kb的线粒体基因组序列作为外源基因,转入菌株进行最终的功能验证。结果表明:fhuA基因被成功敲除103 bp,pcnB基因被成功敲除802 bp,将高拷贝pUC57质粒转入基因编辑后的Stbl2^(TM)菌株,可明显降低质粒的拷贝数,且能正确克隆线粒体基因难度序列。该研究构建的菌株可作为后续克隆难度序列的感受态使用,还可为难度序列的基因克隆提供借鉴方法。
关键词
CRISPR/Cas9技术
Stbl2^(TM)菌株
fhuA
基因
pcnb基因
Keywords
CRISPR/Cas9
Stbl2^(TM)strain
fhuA gene
pcnb
gene
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用CRISPR/Cas9技术构建能克隆难度序列的Stbl2^(TM)菌株
覃鸿妮
谢亦潇
汤淑伟
薛高旭
谢悦
张勇
《扬州大学学报(农业与生命科学版)》
CAS
北大核心
2022
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