花生致敏蛋白Ara h2提取纯化及免疫分析

对花生致敏蛋白Ara h2的提取纯化方法进行探究以及对纯化后的花生致敏蛋白Ara h2的免疫特性进行鉴定,以建立得率较高、操作简单的蛋白纯化方法。

花生主要变应原Ara h2的克隆及原核表达

目的:在原核载体中克隆、表达花生主要变应原Ara h2,为其重组变应原应用研究奠定基础。方法:合成花生主要变应原Ara h2基因,设计特异性引物行PCR扩增,经Eco RⅠ、HindⅢ双酶切后与做相应酶切的pET-28a载体连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序分析,使用IPTG诱导融合蛋白表达,使用Ara h2特异性多克隆抗体对表达产物进行免疫印迹鉴定。结果:成功扩增了Ara h2基因,重组质粒双酶切见目的条带,基因测序显示Ara h2在正确开放阅读框中,基因长423bp,编码140个氨基酸,预测的等电点为5.3,分子量约16660.17 Da,基因比对分析显示其与相关报道的核苷酸序列一致性达100%。重组pET-28a-Ara h2/BL21经0.6 mmol/L IPTG诱导表达可见重组融合蛋白在相应分子量大量表达,使用Ara h2多克隆抗体免疫印迹法能检测到目的蛋白。结论:成功克隆、表达了花生主要变应原Ara h2,为其重组变应原应用研究奠定了基础。

花生过敏原蛋白Ara h2的分离纯化研究

食物过敏是食品安全领域内比较突出的问题,花生因其高致敏性被列为八大致敏原之首。在花生致敏原中,Ara h2是主要致敏原。以Ara h2为研究对象,通过对花生脱脂,设置不同浸提液、pH、料液比、浸提时间的蛋白质浸提条件,透析分离纯化目标蛋白质,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳对优化结果进行鉴定,正交试验确定最佳浸提工艺。结果表明:最佳浸提工艺参数为浸提时间90min、浸提pH值7.4、浸提料液比1∶8、浸提液Tris-HCl缓冲液。在此优化条件下目标蛋白质含量可达1.58mg·mL^(-1),浸提率可达47.8%。

花生致敏蛋白Ara h1、2、3的研究进展

花生仁含有丰富的营养物质,是常见的营养食品,但是花生仁内也含有很多致敏蛋白质,它们可以与过敏患者血清中的IgE抗体结合,引起IgE介导的过敏反应,最终导致机体生理功能的紊乱或组织损伤。Ara h 1(Arachishypogaea allergy 1)、Ara h 2和Ara h 3被认为是主要的花生致敏原,其热稳定性强,不易被蛋白酶彻底消化。致敏原含有的IgE抗体结合表位是其引发机体过敏反应的物质基础。人类食用花生而引发的过敏症因其潜在的危险性、长期性而日益受到关注。本文对近几年来国内外在这三种主要致敏原的理化性质、结构特点、基因表达模式、免疫学特性和功能方面取得的研究成果进行了全面综述,并对其今后的研究方向提出了展望。