Three new alkaloids isolated from the stem tuber of Pinellia pedatisecta

The present study was designed to determine the chemical constituents of the stem tuber of Pinellia pedatisecta. The chemical constituents were isolated and purified by various chromatographic techniques, and their structures were elucidated on the basis of physicochemical properties and spectral data. Three new alkaloids(compounds 1, 2, and 3) were obtained and identified as 9-((5-methoxypyridin-2-yl)methyl)-9 H-purin-6-amine(1), 4-(2-(2, 5-dioxopyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl acetate(2), and N-(9-((5-methoxypyridin-2-yl)methyl)-9 H-purin-6-yl)acetamide(3). These compounds were evaluated for their cytotoxicity against human cervical cancer He La cells. Compounds 1 and 3 significantly inhibited the proliferation of He La cells with IC_(50) values being 3.02 ± 0.54 and 7.16 ± 0.62 μmol·L^(-1), respectively.

多重连接探针扩增技术鉴别半夏及其常见混伪品

目的基于多重连接探针扩增技术(MLPA)建立一种中药材半夏与其常见伪品虎掌、滴水珠的分子鉴定方法,为半夏药材质量控制提供依据。方法从Genbank数据库下载半夏属核基因组内转录间隔区(ITS)序列,利用MEGA 6.05版软件进行序列比对,依据半夏、虎掌及滴水珠ITS序列中的单核苷酸多态性(SNP)位点设计物种特异性MLPA探针,MLPA反应后采用熔解曲线法对扩增产物进行分析。结果半夏、虎掌和滴水珠样品DNA与物种特异性MLPA探针可分别产生位于84.84,82.76及80.14℃的单一熔解峰,表明探针具有良好特异性;构建的探针体系可对0.1 ng模板DNA进行检测,并可有效检出半夏中掺混1%的虎掌或滴水珠样品。对市场收集样品进行检测,鉴别结果准确,灵敏度高。结论该研究建立的多重连接探针扩增方法可准确鉴别半夏和虎掌、滴水珠,具有特异性强、灵敏度高等特点,可为半夏药材质量控制提供技术支持。

中药饮片虎掌南星微生物污染状况分析

目的:建立虎掌南星的微生物限度检查方法,考察该饮片微生物污染的程度,并评估其潜在的风险。方法:依据《中国药典》2020年版四部通则1105、1106、1108收载中药饮片微生物限度检查法对虎掌南星进行方法适用性试验,对20个批次药品的需氧菌总数(TAMC)、霉菌和酵母菌总数(TYMC)、耐热菌总数(NAIRE)、耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希菌、沙门菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、白念珠菌进行检查,同时对耐热菌做探索性检验。结果:需氧菌总数在102~107之间;霉菌和酵母菌总数在101~105之间;12批次检出耐热菌,检出的耐热菌数在101~103之间;15批次检出耐胆盐革兰阴性菌,N均小于104;13批次检出大肠埃希菌;0批次检出沙门菌;20批次均检出金黄色葡萄球菌;7批次检出铜绿假单胞菌;6批次检出白念珠菌;耐热菌数随水浴时间增加,菌数下降明显。结论:通过对微生物的污染调查分析,给虎掌南星饮片的合理使用提供了一些数据上的保障。建议根据该饮片不同的用药方式,制定不同的微生物限度标准。

超高效液相色谱串联三重四极杆质谱法检查脑立清制剂中水麦冬酸成分

目的建立脑立清制剂中水麦冬酸成分的检测方法。方法样品经萃取富集后,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(UPLC-MS/MS),以水麦冬酸为指标成分,对脑立清制剂中常见掺伪虎掌南星情况进行监控。采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3 C 18(2.1 mm×100 mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量0.2 mL·min^(-1);柱温30℃,进样量2μL;质谱条件采用ESI-多反应监测(MRM)模式扫描,选择m/z 187.0→143.3和m/z 187.0→98.9作为检测离子对。结果以所建立的方法对88批次脑立清制剂进行检测,结果5个厂家的15批样品检查出水麦冬酸成分。结论所建立的方法准确可靠,专属性强,可用于脑立清制剂中的水麦冬酸成分的检查;同时也为其他含半夏制剂中掺伪虎掌南星的监控提供参考。

天南星中草酸钙针晶形态炮制前后变化比较

目的 :提供天南星样的刺激作用是由其草酸钙针晶尖端所至的实验证据。方法 :从炮制前后及加工过程的动态变化 ,对天南星中草酸钙针晶的显微及超微改变进行了定性定量观察 ,并结合同批样品刺激反应的时效及量效数据的定量分析为南星的刺激物质的确定提供相关证据。结果与结论 :毛须针晶不同含量的天南星具有不同刺激作用。天南星中草酸钙针晶尖端变化率与兔眼结膜刺激反应呈量效关系 (r =0 .995) ;与矾水浸泡时间呈时效关系 (r =0 .993 )。

4种叶型性状半夏和掌叶半夏的ISSR分析

从50条ISSR引物中筛选到5条适合引物,对4种叶型性状半夏和掌叶半夏进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳分析,构建5种不同半夏的DNA指纹图谱.结果表明:5条引物都能够分别扩增出多态性条带,其中引物UBC-868具有较高的多态性,可独自将所测的5种材料区分开.ISSR(Inter Simple Sequence Repeat)-PCR作为一种简便、可靠的分子标记技术,可以作为不同半夏鉴别的方法之一,从而实现对半夏种质资源分子水平的鉴定.

腐植酸对高温胁迫下掌叶半夏生长生理特性及块茎次生代谢的影响

采用不同浓度(0、20、40、60、80、100mg/L)腐植酸(HA)叶面喷施处理,通过盆栽实验分析了HA对高温胁迫下掌叶半夏幼苗生长生理指标及次生代谢的调控效应。结果显示:(1)各浓度HA处理均可不同程度地促进高温胁迫下掌叶半夏的生长发育,且以80mg/L HA处理下其块茎鲜重(6.990 5g/株)、叶柄鲜重(1.755 4g/株)及总叶绿素含量(19.961 3mg/g)最高,较对照分别显著提高21.25%、118.5%和37.19%。(2)当HA处理浓度为60mg/L时,掌叶半夏幼苗叶片中可溶性糖、可溶性蛋白含量均最高,分别比对照显著提高66.67%、40.91%;叶片抗氧化酶(SOD、POD)活性达到最大值,MDA含量降至最低,SOD、POD活性分别比对照显著提高818.98%和48.2%,MDA含量较对照显著降低62.08%;且块茎中鸟苷含量较高,比对照显著提高52.94%。(3)当叶面喷施80mg/L HA时,掌叶半夏幼苗叶片中游离脯氨酸含量和块茎中总生物碱、总有机酸、腺苷的含量均最高,分别比对照显著提高169.63%、27.19%、42.32%、96.23%。研究表明,适宜浓度HA处理可显著提高高温胁迫下掌叶半夏幼苗叶片内抗氧化酶(SOD、POD)的活性及渗透调节物质(可溶性糖、可溶性蛋白、游离脯氨酸)含量,以及块茎中次生代谢产物(总生物碱、总有机酸、鸟苷和腺苷)的含量,有效减轻夏季高温对掌叶半夏幼苗叶片的伤害、延缓衰老、提高其幼苗抗热性,促进生长、延长生长期。

不同形态氮对掌叶半夏生长及块茎主要化学成分的影响

【目的】本文利用盆栽试验,探讨了不同铵态氮、硝态氮供应比例对掌叶半夏生长、相关生理指标及块茎中主要活性成分含量的影响,以期为掌叶半夏的合理施肥、科学种植提供技术依据。【方法】盆栽试验以蛭石为栽培基质,以掌叶半夏为试验材料,采用不同铵态氮、硝态氮比例处理,分析不同铵硝比例处理下掌叶半夏叶片中抗氧化保护酶(SOD、CAT),叶片、块茎中氮代谢关键酶(NR)的活性及块茎中次生代谢产物(MDA、硝酸盐及主要活性成分)的含量变化。【结果】1)叶片鲜重、块茎鲜重及总叶绿素含量总体均随铵态氮比例的升高而呈逐渐增加趋势,其中在全铵营养下,块茎鲜重和总叶绿素含量均达到最高值。2)随着铵态氮比例的升高,植株叶片中SOD、CAT酶活性呈先升高后降低趋势;当铵硝比为50∶50时,SOD、CAT酶活性最高,此时,叶片中NO-3-N含量也达到最高。3)在全铵营养或全硝营养下,MDA含量均高于其他处理;当铵硝比为50∶50时,MDA累积量最低。4)在全硝营养下,叶片、块茎中的NR活性均达到最高值,同处理水平下叶片中NR活性要高于块茎;并且随着铵态氮比例的增加叶片中NR活性呈逐渐降低的趋势,而块茎中的NR活性则呈逐渐增加的趋势。5)块茎中主要活性成分的累积更依赖于两种氮素的配施作用,在较高的铵态氮配施处理下(75∶25时),总生物碱、总有机酸及腺苷的积累量均取得最高值。【结论】适宜比例的铵硝配比可以促进掌叶半夏生长及产量的形成,其促进效果也显著高于全硝营养;当铵硝比为50∶50时,其植物体内的相关酶活性也达到最高,说明适宜的铵硝配比能减轻膜质过氧化对植株细胞膜造成的损伤;同时,较高的NH+4-N也有利于块茎中主要活性成分的积累,尤以铵硝比为75∶25时,累积效果最显著。

虎掌南星炮制工艺研究

目的 :探讨虎掌南星炮制加工中的矾水浓度、浸泡时间及矾水温度对虎掌南星饮片物质基础的影响。方法 :虎掌南星饮片研制 ,HPLC指纹图谱的定量分析 ,多变量多因素分析。结果 :白矾浓度及其溶液体积对HPLC指纹图谱未见有影响。而温度对其有显著影响 ,且呈明显梯度变化。结论 :温热矾水浸泡将加速药用物质流失。应尽量在春秋季节的温度环境炮制虎掌南星。

胆南星不同炮制品的药效和毒性实验研究

以对戊巴比妥钠催眠作用影响为指标,比较研究不同胆南星炮制品的混悬液、水浸液、醇提物对昆明种小鼠的中枢系统抑制作用。同时对两种制品进行了急性毒副作用实验观察。结果:两种制品均未见毒副反应;两种制品的水浸液腹腔给药,均可增强戊巴比妥钠催眠作用;混合蒸制法醇提物腹腔给药较发酵法醇提物有明显的增强作用。

应用等位基因特异聚核酶链式反应鉴别半夏类药材

目的建立能区分半夏正、伪品的分子鉴定方法。方法下载GenBank中半夏属、犁头尖属及天南星属相关序列,利用DNAMAN进行比对分析,根据ITS序列中半夏的SNP位点设计引物PtITS178F和PtITS555R,采用等位基因特异PCR进行扩增。结果对半夏5个产地的新鲜样品、10个产地的药材以及5批虎掌、水半夏样品进行PCR检测。引物PtITS178F和PtITS555R只对半夏类药材扩增395 bp片段,虎掌和水半夏均无扩增条带。结论等位基因特异PCR能准确检测半夏的SNP位点,达到准确鉴别半夏正伪品的目的,是一种有前途的中药材分子鉴定方法。

掌叶半夏超临界CO_2乙醇萃取物的抗惊厥作用(英文)

目的研究掌叶半夏超临界CO2乙醇萃取物(SEE-CO2 PP)对青霉素诱发惊厥的对抗作用。方法采用大鼠皮质局部定位注射青霉素诱发惊厥模型,研究SEE-CO2 PP对惊厥发作的潜伏期以及惊厥行为变化的影响,并用RM6240C型多道生理信号采集处理仪记录皮质和海马痫性放电的潜伏期、频率和痫波最高发放波幅,同时应用高效液相色谱法测定海马谷氨酸(Glu)、天冬氨酸(Asp)、甘氨酸(Gly)和γ-氨基丁酸(GABA)递质的含量。结果 SEE-CO2 PP 15和30 g·kg-1(ig)可延长青霉素诱发惊厥的潜伏期,并减弱发作强度。SEE-CO2PP能够延长痫性放电的潜伏期,减少痫性放电的频率,减小皮质和海马发放痫波的最高波幅,同时,SEE-CO2PP可以增加海马GABA的水平,对Gly,Asp和Glu水平无明显影响。结论 SEE-CO2PP可对抗青霉素诱发的惊厥行为和痫样放电,具有抗惊厥作用。

天南星(虎掌南星)炮制工艺改进研究

采用《药典》规定的天南星质量鉴别标准，并结合对小鼠的毒性反应为指标，优选出消除天南星毒副作用最佳辅料为白矾。通过比较提出了两种炮制合理的新工艺。中试证明新工艺用于大生产是可行的。

掌叶半夏细胞悬浮培养及单细胞培养再生植株

掌叶半夏成熟胚在含2,4-D 2.0mg/L,BA 0.5mg/L的 MS培养基上可诱导形成颗粒状胚性愈伤组织。用附加2,4-D 2.0mg/L, BA 0.1mg/L,CH300mg/L的MS液体培养基对胚性愈伤组织进行悬浮振荡培养,经3～4次继代培养即可得到悬浮的单细胞,其细胞多为圆形或椭圆形,具有较强的分裂能力。经测定,悬浮培养过程中细胞生长曲线呈“S”型,培养20天时细胞数量和鲜重达到最大值;随着细胞的生长,细胞内可溶性蛋白质含量增加,培养液PH下降。悬浮单细胞经固体或液体培养分裂形成细胞团,进而形成愈伤组织,其植板率约为10^(-4)。再生后的愈伤组织转移到含BA0.5mg/L,NAA 0.1mg/L的培养基上,光照培养,分化出了完整植株。

高效液相色谱法测定半夏中琥珀酸含量

目的:建立半夏、掌叶半夏和水半夏等中药品种中琥珀酸含量的HPLC测定法.方法:用Inertsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,4μm),以磷酸盐缓冲液(pH 2.5)为流动相,检测波长为210 nm,柱温为40℃,流速为1.0 mL·min-1.结果:琥珀酸在样品中的平均回收率为98.67%,RSD为1.8%.半夏样品中的琥珀酸含量,以干燥品计为0.0038%～0.0304%,掌叶半夏中为0.0110%～0.0559%.结论:该方法可供半夏等中药中进行琥珀酸的含量测定时参考.

药用作物掌叶半夏组织培养及药物成份分析

药用作物掌叶半夏(Pinellia Pedatisecta Schott)的种子在附加2,4-D0.5—6.0mg/L+BA0.5 mg/L的MS或B_5培养基上均能诱导出大量愈伤组织,但2,4-D的浓度变化对愈伤组织的形成和生长无明显影响,且无分化现象.愈伤组织生长快,分散性好,适于悬浮培养.种子在附加NAA0.1—4.0mg/L+BAO.5mg/L的MS培养基上均能形成愈伤组织并分化出根和芽,随NAA浓度降低,分化率增高.掌叶半夏愈伤组织经分析会有生物碱、β-谷甾醇、及多种氨基酸等成份,氨基酸含量多比半夏生药粉的含量高.

天南星各种炮制品的药效学初步研究

以抗惊厥、凝血、化痰药理指标，对天南星的不同炮制品进行了比较研究。实验结果表明：南星生品的水浸液具有明显的抗惊厥作用，而生品的水煎液及其他炮制品的水浸、水煎液均无抗惊厥作用；胆南星除外的南星各种炮制品的水煎液均有促凝血作用，而它们的水浸液则具有抗凝血作用；

干旱及盐胁迫对虎掌苗生理特性的影响

为了探明减缓干旱、盐胁迫对虎掌的伤害途径和方法,用不同浓度的PEG和NaCl分别模拟干旱和盐胁迫,研究不同干旱程度及不同盐胁迫程度下虎掌的生理响应及其机理.结果表明：处理10 d后,在PEG浓度5％～30％范围内随着干旱程度的加大,虎掌叶片可溶性蛋白、可溶性糖含量不断升高,超氧阴离子（O2-·）及丙二醛（MDA）水平持续升高,超氧化物歧化酶（SOD）活性先升高后降低,过氧化物酶（POD）活性持续升高,过氧化氢酶（CAT）活性持续下降；在NaCl浓度50～300 mmol/L范围内随着盐浓度的提高,虎掌叶片可溶性蛋白、可溶性糖含量先升后降,超氧阴离子及MDA水平持续升高,SOD、POD活性先升高后降低,CAT活性持续下降.

利用等位基因特异PCR鉴别虎掌南星及其部分混淆品

目的:建立中药材虎掌南星的分子鉴定方法,为天南星药材质量控制提供依据。方法:GenBank中下载半夏属、天南星属、犁头尖属物种的叶绿体rpl20基因序列,利用DNAMAN进行比对分析,发现半夏属和虎掌南星的SNP位点,并设计鉴别引物Ptrpl94F,Ptrpl708R和Pprpl148F,Pprpl484R,采用等位基因特异PCR方法对虎掌南星、半夏、水半夏3个物种的10个样品进行扩增。结果:引物Pprpl148F和Pprpl484R仅对虎掌南星扩增333 bp条带,半夏、水半夏均无扩增,能准确鉴别虎掌南星。引物Ptrpl94F和Ptrpl708R对半夏、虎掌南星均扩增611 bp条带,水半夏无扩增。结论:本实验建立的等位基因特异PCR方法能准确区别出虎掌南星和半夏、水半夏,为虎掌南星及半夏的正确用药提供了保障。

虎掌(天南星科)中草酸钙晶体的形态和分布

在光学显微镜下对虎掌(Pinellia pedatisecta)营养器官和繁殖器官中晶体的类型和分布进行了观察和分析,探讨晶体的功能与作用机制。结果表明:(1)虎掌各个器官中都发现有晶体,且晶体类型有针晶、簇晶、砂晶和柱晶4种形态,其中针晶最为常见。(2)虎掌叶中的晶体大多以针晶状分布在叶片上表皮下的叶肉中,少数分布在叶下表皮下的叶肉中,其次砂晶和星芒状簇晶也在叶中较常见,叶中也有少量的柱晶。(3)虎掌的块茎中分布有大量的针晶束,在输导组织附近还有一些大的簇晶;虎掌的不定根中分布有不整齐的针晶和排列不规则的针晶束以及少量大的簇晶。(4)虎掌的佛焰苞中分布有针晶、簇晶和砂晶,且在佛焰苞中的针晶主要分布于上、下表皮之下的叶肉中,砂晶多分布在佛焰苞的上、下表皮上。(5)虎掌的花药壁中分布有针晶束,其方向和花药壁表面垂直,而花粉囊中只有小的簇晶。(6)虎掌的果皮和种皮上分布有大量的针晶。根据晶体在酸中的溶解性,虎掌体内所有晶体的化学成分都为草酸钙。研究认为,虎掌各个器官中的各种草酸钙晶体对于保护虎掌免受食草动物取食具有重要的作用。