青霉素酰化酶在甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物上的固定化

用共价键合法将青霉素酰化酶固定化在珠状多孔的甲基丙烯酸缩水甘油酯 (GM)共聚物上 ,研究了固定化反应时间、温度、pH值和酶液用量对固定化青霉素酰化酶的表观活性、表观偶联效率、活性回收及稳定性的影响 .将GM共聚物载体加入到磷酸缓冲液 ( 0 1mol L ,pH 10 8)与青霉素酰化酶液 (每克干载体用酶液 1ml)的混合溶液中 ,在 3 0℃下反应 72h ,单位质量 (干重 )固定化酶的表观活性为 3 48U g ,表观偶联效率为 66 7% ,活性回收为 3 1 7% .

聚甲基丙烯酸缩水甘油酯固定化青霉素酰化酶性质的研究

应用反相悬浮技术合成了珠状甲基丙烯酸缩水甘油酯 - N ,N′-亚甲基双 (丙烯酰胺 )共聚物 ,并将巨大芽孢杆菌 ( Bacillus megaterium)青霉素酰化酶共价偶联到甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物载体上 ,制成固定化青霉素酰化酶 ,其表观活性为 3 71 U/g(干重 ) ,水解青霉素 G钾盐的最适温度为 47°C,最适 p H为 8.5 ,在 p H4.5～ 9.0 ,温度 40°C以下时酶的活性稳定 ,表观米氏常数 Km为 1 .3 3× 1 0 -2 mol/L ,最大反应速度 vmax为 1 .2 7× 1 0 -5mol/min,固定化酶在 4°C冰箱保存 3 5 d,再水解 w=0 .0 2的青霉素 G钾盐溶液 ,重复使用 3 0次 ,保留酶活性 88.1 %。