血清TRAIL水平与晚期非小细胞肺癌患者免疫治疗反应的关联性研究

目的探讨血清肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)水平与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者免疫治疗反应的关联性。方法回顾性分析2019年1月至2020年5月唐山市人民医院收治的70例晚期NSCLC患者的临床资料。在免疫治疗前24 h内采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定患者血清TRAIL水平。免疫治疗反应通过客观缓解率(ORR)和临床获益率(CBR)进行评估。分析患者血清TRAIL水平与免疫治疗反应、肺功能及肺气肿、临床预后的关联性。结果经免疫治疗后,NSCLC患者获得客观缓解23例,临床获益46例。获得客观缓解患者的血清TRAIL水平显著高于未获得客观缓解者[27.77(23.13,39.13)pg/mL vs 12.36(8.76,18.15)pg/mL;Z=4.508,P<0.001]。临床获益患者的血清TRAIL水平显著高于临床未获益者[23.13(16.99,30.63)pg/mL vs 11.75(8.76,15.56)pg/mL;Z=4.887,P<0.001]。Spearman秩相关性分析结果显示,血清TRAIL水平与1秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)呈正相关(rs=0.288,P=0.016),与肺气肿总比值(rs=-0.257,P=0.032)、肺叶肺气肿比率(LER)(rs=-0.324,P=0.006)呈负相关。多因素logistic回归分析结果显示,以血清TRAIL>27.46 pg/mL为参考,血清TRAIL<18.15 pg/mL患者经免疫治疗不能获得客观缓解和临床获益的风险显著增加(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清TRAIL水平可有效预测NSCLC患者对免疫治疗的反应(P<0.05)。TRAIL高水平组(血清TRAIL≥18.15 pg/mL)的总体生存(OS)、无进展生存(PFS)预后显著优于TRAIL低水平组(血清TRAIL<18.15 pg/mL)(P<0.05)。结论血清TRAIL低水平与晚期NSCLC患者免疫治疗无反应以及临床预后不良有关,该指标监测有助于筛选能从免疫治疗中获益的NSCLC患者。

蛇床子素对TRAIL诱导白血病HL-60细胞凋亡的作用及其相关机制研究

目的:探讨蛇床子素(Osthole)对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导白血病HL-60细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Osthole和TRAIL单独及联合应用对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的100μmol/L的Osthole和40 ng/ml TRAIL单独或联合处理细胞,通过流式细胞术测定HL-60细胞凋亡和细胞线粒体膜电位(MMP)的变化,RT-PCR法检测BCL-2、BAX和DR5 mRNA的表达,用分光光度法检测Caspase-3、-8、-9活性变化。结果:100μmol/L Osthole和40 ng/ml TRAIL联合处理HL-60细胞48 h,HL-60细胞的凋亡率达(33.9±2.7)%,较单用Osthole、TRAIL均显著提高(P<0.05),同时2者联合应用能增强降低MMP和BCL-2/BAX表达比值的效果,提高DR5的表达和Caspase-3、-8、-9活性。结论:Osthole能增强TRAIL诱导HL-60细胞凋亡的敏感性,其机制可能与其激活线粒体凋亡途径和上调DR5的表达密切相关。

骨髓增生异常综合征患者骨髓凋亡细胞类型及TRAIL表达水平研究

目的探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞凋亡累及的细胞类型,以及其与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)表达水平的关系。方法用流式细胞术检测骨髓有核细胞总凋亡率、CD3+、CD3+4细胞凋亡率和TRAIL表达水平,运用CellQuest及ModFit软件对所测得结果进行数据分析。结果MDS患者骨髓有核细胞总凋亡率为(17.39±10.17)%,CD+3、CD3+4细胞凋亡率分别为(20.41±11.61)%、(21.32±12.17)%,TRAIL表达水平为(7.55±3.10)%,均显著高于正常对照组[(5.88±1.38)%、(5.47±1.65)%、(4.92±2.11)%、(1.26±0.46%)],P<0.05。早期MDS有核细胞总凋亡率为(21.95±9.44)%、TRAIL表达水平为(9.00±2.47)%,均高于进展期[(8.26±2.27)%、(4.65±2.04)%],P<0.05。骨髓有核细胞总凋亡率与骨髓原始细胞数呈负相关(r=-0.65,P<0.05),与TRAIL表达水平呈正相关(r=0.85,P<0.05)。结论MDS存在过度凋亡,凋亡累及早期造血细胞和淋巴细胞;TRAIL可能是引起凋亡增加的原因之一。

TRAIL与导向肽融合基因的克隆、表达及其表达产物的生物学活性

目的获得具有生物学活性的与导向肽融合表达的重组TRAIL蛋白,提高TRAIL对肿瘤细胞的杀伤作用。方法构建TRAIL与导向多肽PEPHC1的融合基因,克隆入质粒pGEM-3zf(-)中进行测序,序列正确后,亚克隆入表达载体pBV220中,转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达。结果42℃诱导4h,融合基因得到了表达,SDS-PAGE表明目的蛋白占菌体总蛋白的15%以上,以包涵体形式存在。经包涵体洗涤、变性、复性,并经离子交换层析柱纯化后可得到融合蛋白PE-TRAIL,经体外试验证明具有生物学活性。结论成功克隆并表达了具有生物学活性的与导向肽融合表达的重组TRAIL蛋白。

脐带间充质干细胞运载scFvCD20：sTRAIL融合蛋白对B-淋巴瘤细胞的生长抑制作用

目的:探讨脐带间充质干细胞运载scFvCD20:s TRAIL融合蛋白的新型双重靶向系统对CD20+BJAB细胞的生长抑制作用。方法:采用传统分子生物学技术构建p LenR.sc FvCD20:s TRAIL、p LenR.ISZ-s TRAIL、p LenR.sc Fv CD20及p LenR.cop GFP四种慢病毒表达载体,利用四质粒慢病毒包装系统于293T细胞中包装慢病毒颗粒,并感染人脐带组织来源的MSCs(HUMSCs),使其稳定表达融合蛋白。于体外采用CCK8细胞增殖抑制实验检测sc Fv CD20:s TRAIL融合蛋白对CD20阳性BJAB细胞和Raji细胞、CD20阴性Jurkat细胞以及正常人外周血单个核细胞(PBMCs)的生长抑制作用。建立NOD/SCID鼠BJAB细胞皮下移植瘤模型,将MSC.sc Fv CD20:s TRAIL经尾静脉注射入小鼠体内,每3 d测量瘤体积,根据肿瘤体积计算抑瘤率。结果:成功构建了慢病毒表达载体p LenR.sc Fv CD20:s TRAIL、p LenR.ISZ-s TRAIL、p LenR.sc Fv CD20及p LenR.cop GFP,且经慢病毒感染可在HUMSCs中稳定表达。体外实验显示,sc Fv CD20:s TRAIL融合蛋白可不同程度地提高对CD20阳性BJAB和Raji细胞的生长抑制作用,而对CD20阴性Jurkat细胞的生长抑制作用降低;而且不影响PBMCs的生长。体内实验表明,MSC.sc Fv CD20:s TRAIL可显著抑制BJAB淋巴瘤的生长,初始治疗后第24天,抑瘤率达65.2%,与MSC.ISZ:s TRAIL治疗组比较(抑瘤率为52.7%),具统计学差异(P<0.05)。结论:建立了HUMSCs运载sc Fv CD20:s TRAIL融合蛋白的双重靶向治疗系统,HUMSCs可向BJAB淋巴瘤部位归巢并表达分泌sc Fv CD20:s TRAIL融合蛋白,后者在局部经sc Fv CD20的二次导向发挥CD20特异性抑瘤作用。为MSCs作为肿瘤靶向治疗载体在临床中的应用提供了理论依据。

肿瘤坏死因子诱导凋亡配体TRAIL研究进展

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族成员之一,能通过与死亡受体结合选择性诱导多种肿瘤细胞系的凋亡,而对正常细胞无明显影响,有望成为一种新的抗肿瘤制剂。介绍了TRAIL及其受体的诱导凋亡机制、开发现状及临床应用方面的研究进展。

GnRH受体与TRAIL在前列腺肿瘤中表达的研究

目的 研究促性腺激素释放激素受体 (GnRH R)和凋亡相关蛋白 (TRAIL)在前列腺肿瘤中的表达及临床意义。方法 采用SABC免疫组化法及原位定量法 ,对前列腺肿瘤和前列腺增生患者中GnRH R和TRAIL的表达进行检测及半定量分析。结果 在前列腺癌组织高分化的 11例 ,中分化的 4例以及低分化的 5例中 ,各种不同分化的癌组织均显示不同程度的GnRH R和TRAIL阳性免疫反应 ,原位定量显示GnRH R与TRAIL的表达均分别随着组织分化程度增高而增高 (P <0 0 5 ) ,并且TRAIL较GnRH R阳性免疫反应强。结论 GnRH R和TRAIL表达量可能与前列腺恶性肿瘤的发生与发展有关。

三氧化二砷增强TRAIL杀伤人A549细胞的作用及机制研究

目的研究三氧化二砷(As2O3)增强重组人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)对人非小细胞肺癌细胞(A549)的作用及其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测As2O3及联合TRAIL对人A549的IC50值;不同浓度As2O3与TRAIL联合作用48 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR检测Survivin、Caspase-3 mRNA表达变化。结果 As2O3有抗肿瘤活性,IC50值为(42.44±0.66)μmol.L-1;As2O3与TRAIL联用时IC50值为(7.04±0.19)μmol.L-1;As2O3协同增强TRAIL的抗肿瘤活性,CDI值为0.94。联合药物组作用48h后,随As2O3浓度增高Survivin mRNA的表达降低,Caspase-3mRNA的表达增强。结论 As2O3是有效的化疗药物,通过下调Survivin mRNA的表达,上调Caspase-3 mRNA的表达,逆转A549的耐药性,协同TRAIL增强对肺癌细胞的杀伤作用。

重组人可溶性TRAIL分子诱导白血病细胞株凋亡的研究

比较重组人可溶性TRAIL(rhsTRAIL)诱导Jurkat细胞株、K562细胞株以及HL-60细胞株凋亡之间的差异,探讨这些差异与细胞表面TRAIL受体(DR4、DR5、DcR1和DcR2)表达量的关系。不同浓度的rhsTRAIL分别处理Jurkat细胞、K562细胞和HL-60细胞12 h、24 h和48 h后,用流式细胞仪检测经碘化丙啶(PI)染色后的细胞凋亡情况;用RT-PCR方法检测细胞表面受体DR4、DR5、DcR1、DcR2的表达。培养12 h、24 h、48 h后,不同浓度rhsTRAIL诱导Jurkat细胞株的凋亡率均明显高于对照组,且具有剂量依赖性和时间依赖性;但K562细胞株和HL-60细胞株未见明显的凋亡发生。RT-PCR结果显示,培养12 h、24 h、48 h后,Jurkat细胞株表面DR4的表达随时间的延长和rhsTRAIL浓度的升高而升高,而DR5、DcR1和DcR2的表达未检出;K562和HL-60细胞株表面DR4的表达没有明显变化,而且DR5、DcR1和DcR2的表达也未检出。rhsTRAIL诱导Jurkat细胞株的凋亡具有剂量依赖性和时间依赖性,且与其细胞表面DR4的表达呈正相关;在一定的浓度条件下,rhsTRAIL未能诱导K 562和HL-60细胞株发生明显凋亡,且其细胞表面DR4的表达也未见明显变化。这些结果提示,应用TRAIL治疗不同种类白血病时,应注意它的使用剂量和适应范围。

TRAIL死亡受体通路蛋白抗肿瘤小分子多肽的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导细胞凋亡优先选择肿瘤细胞,而对正常细胞低毒性,具有潜在的抗肿瘤药物开发价值.随着肿瘤治疗研究的不断深入,小分子多肽物因分子量小、易穿过细胞膜且稳定性较强,已成为肿瘤治疗药物开发研究的一个热点.本文基于TRAIL死亡受体通路蛋白抗肿瘤小分子多肽物的研究及应用进行简要概述.

人重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导急性髓系白血病细胞凋亡的实验研究

为了研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 (TRAIL)对急性髓系白血病 (AML)细胞的作用 ,通过MTT比色法测定不同浓度TRAIL对 3 9例AML患者 (病例组 )和 2 1例健康人 (对照组 )的骨髓或外周血单个核细胞的杀伤率 ,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果发现 ,不同浓度TRAIL对AML细胞均有不同程度的杀伤作用 ,而对正常细胞无此作用。结论 :TRAIL能通过诱导细胞凋亡而杀伤AML细胞 ,是一种有望应用于临床白血病治疗的新型生物制剂。

TRAIL及其受体在咖啡因抑制肝癌细胞系HepG2增殖中的作用

目的探讨TRAIL及其受体在咖啡因(caffeine)抑制肝癌细胞系HepG2增殖中的作用。方法HepG2细胞分别经caffeine、TRAIL及caffeine+TRAIL作用24h,采用MTT法检测HepG2细胞增殖抑制情况,根据中效原理进行联合用药效应评价;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布;Westernblot法检测caffeine作用不同时间HepG2细胞中TRAIL受体相关蛋白的表达。结果在1.25～20mmol.L-1浓度范围内,caffeine明显抑制HepG2细胞增殖;在0.01275～0.2040μmol.L-1浓度范围内,TRAIL可明显抑制HepG2细胞增殖。Caffeine联合TRAIL在多数效应范围内的合用指数小于1,具有协同作用。Caffeine5mmol.L-1和TRAIL0.0510μmol.L-1联合用药组HepG2细胞凋亡率明显高于各单独用药组,且两者联合用药对HepG2细胞周期具有明显的影响,使G0/G1期细胞比例明显增加,S期及G2/M期细胞比例明显减少;caffeine5mmol.L-1作用HepG2细胞24h时,其DR4及DR5的表达量明显增加,而DcR1和DcR2的表达无改变。结论TRAIL在caffeine抑制HepG2细胞增殖过程中具有一定的协同作用,其机制可能与caffeine上调HepG2细胞表面DR4、DR5的表达,联合TRAIL后能够进一步诱导凋亡及调节细胞周期有关。

TRAIL受体在子宫内膜癌细胞株的表达

目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)受体在正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织和癌旁组织的表达特征。方法:采用RT-PCR技术,检测20例正常子宫内膜、20例子宫内膜癌及癌旁组织中TRAIL受体DR4、DR5和假受体DcR1、DcR2阳性表达情况。结果:TRAIL受体DR4、DR5的mRNA在人正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织和癌旁组织中均表达,诱骗受体DcR1的mRNA在子宫内膜各组织中的表达率不同,但差异无统计学意义(P>0.05),而诱骗受体DcR2的mRNA在子宫内膜癌组织中的表达率明显低于正常子宫内膜组织和癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.005),癌旁组织细胞中DcR2表达和正常子宫内膜组织相近(P>0.05)。结论:TRAIL诱骗受体DcR1、DcR2在子宫内膜癌中的低表达可能与其发病机制有关,可能对防止子宫内膜癌变具有一定作用。

TRAIL抗肿瘤的优化研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员。因其具有选择性杀伤绝大多数肿瘤细胞而对人体正常细胞无明显细胞毒性的特性而被广泛研究,并已有相关制剂进入临床抗肿瘤研究。虽然TRAIL在体内外实验中均展现出良好的抗肿瘤效果,前期临床研究结果也表明了其相对安全性,但其临床抗肿瘤效果却不太理想。总结其临床效果差的主要原因,可能有体内稳定性差、肿瘤靶向性差、肿瘤获得性耐受等。对于TRAIL临床疗效差的问题,许多针对性的研究也相应开展,目前已有不少报道表明通过一些合理的优化方式有可能解决上述问题。我们从TRAIL的基因治疗、重组蛋白及死亡受体抗体治疗、TRAIL联合用药治疗及其他治疗方法等方面,简要综述TRAIL在抗肿瘤方面的应用及其应用中的优化。

肿瘤细胞对TRAIL耐受机制以及克服耐受性的研究进展

TRAIL的全称是肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体,也称为APO-2L,因为TRAIL与TNF和CD95/FasL具有同源性序列,因此确定TRAIL为TNF超家族成员之一,它属于Ⅱ型跨膜蛋白。到目前为止,研究重点关注于TRAIL诱导凋亡的作用机制和产生TRAIL耐受性的过程。化学疗法或放射疗法联合应用可使对TRAIL耐受的肿瘤恢复TRAIL敏感性。本综述关注TRAIL受体诱导的凋亡信号通路、肿瘤耐受TRAIL的机制以及可能克服耐受的方法。

内源性一氧化氮提高TRAIL诱导的细胞凋亡率

目的探讨内源性一氧化氮在TRAIL诱导的细胞凋亡中的作用,以期了解许多肿瘤组织表达诱导性一氧化氮合成酶的分子和细胞学机制。方法用短暂转染、稳定转染方法在人胚胎肾细胞HEK293中进行重组质粒载体转染,并对可诱导表达一氧化氮合成酶NOS2载体筛选稳定可被诱导的细胞克隆。一氧化氮表达通过ponastrone A试剂进行诱导表达实现。Caspase活性通过相应试剂盒进行检测,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果成功构建了稳定可诱导表达一氧化氮合成酶的细胞克隆;内源性一氧化氮可提高TRAIL诱导的细胞凋亡率,与凋亡相关的caspase-8激酶活性亦显增加。结论内源性一氧化氮可提高由TRAIL诱导的细胞凋亡率。*

融合蛋白Kininogen D5_(60-148)-TRAIL_(114-281)的表达及其抑制血管新生和诱导细胞凋亡的作用

目的:采用原核表达系统表达人Kininogen D560-148-TRAIL114-281融合蛋白,并对其生物学活性进行研究。方法:PCR技术扩增Kininogen D560-148和TRAIL114-281的编码序列,分别构建原核表达载体pMAL-Kininogen D560-148(pMAL-KD5)、pMAL-TRAIL114-281(pMAL-TRAIL)和pMAL-Kininogen D560-148-TRAIL114-281(pMAL-KT),重组质粒分别转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT,并经亲和层析纯化。MTT法检测细胞的增殖,管状形成实验检测内皮细胞血管形成,流式细胞仪和电镜检测细胞凋亡。结果:成功构建原核表达载体pMAL-KD5、pMAL-TRAIL和pMAL-KT,并获得纯化的融合蛋白MBP-KD5、MBP-TRAIL和MBP-KT。融合蛋白MBP-KT与MBP-KD5、MBP-TRAIL相比可显著抑制内皮细胞ECV304和胰腺癌细胞SW1990的增殖、明显抑制ECV304细胞体外管腔的形成,同时,MBP-KT剂量依赖性地诱导SW1990细胞凋亡。结论:融合蛋白Kininogen D560-148-TRAIL114-281既能诱导肿瘤细胞凋亡又能抑制血管生成,为进一步开发靶向性抗肿瘤药物奠定了基础。

TRAIL与卡铂联合诱导卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)与卡铂(CBP)联合应用对体外培养的卵巢A2780细胞的生物学效应及其作用机制。方法采用MTT法、流式细胞术,检测体外培养的A2780细胞在卡铂和TRAIL共同作用下的细胞增殖抑制效应以及细胞凋亡程度,应用半定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测TRAIL受体的mRNA表达水平。结果A2780细胞对TRAIL敏感,TRAIL与卡铂联合用药对细胞的增殖抑制呈现高效协同作用,与单独用药组比较有显著性差异(P<0.05);流式细胞术分析协同性杀伤作用主要由于TRAIL和CBP联合诱导细胞凋亡引起;RT-PCR法检测结果显示A2780细胞在TRAIL与卡铂联合用药后均表现死亡受体DR4、DR5表达水平上调和诱骗受体DcR1、DcR2表达水平下调。结论在体外TRAIL与化疗药物联用能明显抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,卡铂能明显增强TRAIL对肿瘤细胞的敏感性,其诱导机制可能与死亡受体DR4、DR5表达水平上调和诱骗受体DcR1、DcR2表达水平下调相关。

TRAIL诱导凋亡的研究进展

TRAIL能选择性地诱导肿瘤细胞凋亡,而对大多数正常细胞无毒性作用。TRAIL和TRAIL受体生理作用的研究有助于对TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的传导通路的研究。本文综述了近年来TRAIL、TRAIL受体及其凋亡调控途径及TRAIL诱导凋亡的影响因素的研究进展。

TRAIL联用化疗药物抗妇科肿瘤的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)因其选择性诱导肿瘤细胞凋亡的特点而受到关注。目前,TRAIL及其受体已被广泛运用于妇科肿瘤的治疗研究中,不同的妇科肿瘤细胞株对TRAIL诱导的凋亡敏感性不同,某些细胞株对TRAIL耐药。克服肿瘤细胞对TRAIL的耐药,同时保护正常细胞免受伤害,