戊四氮慢性点燃大鼠海马谷氨酸、γ-氨基丁酸阳性细胞变化及柴胡总皂甙的干预作用

目的研究柴胡总皂甙对戊四氮慢性点燃癫痫模型大鼠海马区谷氨酸(Glu)、γ-氨基丁酸(GABA)细胞表达的影响。方法48只健康SD大鼠被随机均分为6组,即空白组(A组)、生理盐水组(B组)、丙戊酸钠组(C组)和柴胡总皂甙高、中、低3种剂量组(D组、E组、F组),除A组不做处理外,其他各组采用腹腔注射戊四氮慢性点燃造模,造模同时给予丙戊酸钠、柴胡总皂甙高、中、低剂量等不同处理因素,连续4周后取脑组织切片进行Glu、GABA免疫组化染色,从阳性细胞数、灰度值分析结果,并比较其比值的变化。结果Glu结果显示,在海马CA1区B组Glu阳性细胞数高于其他各组,有显著性差异(P<0.05),B组海马各区阳性细胞灰度值低于其它各组,有显著性差异(P<0.05);而在CA2区和DG区,B组阳性细胞数、灰度值与各组无显著性差异;GABA结果显示B组海马CA1、CA2、DG区的阳性细胞数与高于其他各组,有显著性差异(P<0.05),B组海马CA1、CA2、DG区阳性细胞灰度值低于其它各组,有显著性差异(P<0.05);在CA1和CA2区,Glu与GABA阳性细胞数比值,B组与各组差异显著(P<0.05);Glu与GABA阳性细胞灰度比值差异不显著(P>0.05)。结论在本研究中戊四氮点燃大鼠的海马细胞内Glu和GABA表达升高,而且GABA升高显著,柴胡总皂甙可干预Glu和GABA的变化,使之趋于正常,这可能是柴胡总皂甙抗实验性癫痫的途径之一。

戊四氮诱导大鼠癫痫发作对大鼠海马神经元的影响

[目的]观察不同程度癫痫发作对大鼠海马神经元的影响。[方法]雄性SD大鼠40只,随机分为A、B、C、D4组,每组大鼠10只,A组为对照组,腹腔注射生理盐水;B组为急性癫痫组,C组为短时间癫痫持续状态,D组为长时间癫痫持续状态,分别腹腔注射不同剂量戊四氮溶液,于模型制作成功后7d取脑,进行硫堇染色观察大鼠海马CA1、CA3区神经元形态。[结果]A组大鼠海马CA1、CA3区神经元无明显损伤,与之相比,B组、C组神经元密度(ND)差异无统计学意义(P﹥0.05);D组损伤明显,ND值减少(P﹤0.05)。[结论]癫痫发作可导致大鼠海马神经元损伤,其程度与癫痫发作程度有关。

柴胡总皂甙对对戊四氮慢性点燃大鼠海马GFAP表达的影响

目的研究柴胡总皂甙对戊四氮(PTZ)慢性点燃癫痫模型大鼠海马区星形胶质细胞的胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 表达的影响。方法 48只健康SD大鼠被随机均分为6组,即空白组(A组)、生理盐水组(B组)、丙戊酸钠(VPA)组(C 组)和柴胡总皂甙高、中、低3种剂量组(D组、E组、F组),除A组不做处理外,其他各组采用腹腔注射PTZ慢性点燃造模,造模同时给予VPA、柴胡总皂甙等不同处理因素,连续4周后取脑组织切片进行免疫组化染色,从阳性细胞数、截面积、灰度值分析结果。结果 B组海马各区的阳性细胞数、阳性细胞截面积高于其他各组(P<0．01),B组海马各区阳性细胞灰度值低于其他各组,经统计分析CA1区与A组、C组、D组差异显著(P<0．01),CA2区与A组、C组、D组、E组差异显著(P<0．05),而在DG区与F组差异有统计学意义(P<0．05),与A组、C组、D组、E组有显著性差异(P<0．01)。结论柴胡总皂甙可以抑制PTZ点燃大鼠海马GFAP的过度表达,柴胡总皂甙存在抑制点燃大鼠海马星形胶质细胞的异常激活的作用。

戊四氮急性癫痫模型齿状回分子层突触的可塑性变化

目的 :探讨戊四氮 ( pentetrazole,PTZ)急性癫痫模型大鼠齿状回分子层突触的可塑性变化。 方法 :采用PTZ诱发大鼠急性癫痫发作 ,采用透射电镜观察 ,对癫痫大鼠海马齿状回分子层内突触的密度、不同形式突触连接面的数量变化进行了研究。结果 :( 1 )PTZ后 3d ,大鼠海马齿状回分子层内突触密度明显下降 ,PTZ后 7d、1 4d ,突触密度则恢复到与对照组相似的水平。 ( 2 )与对照组及PTZ后 3d相比 ,PTZ后 7d ,笑型突触占突触总数比例明显减少 ,愁型突触所占比例明显增加。结论 :癫痫敏感性长期增强是癫痫长期反复发作的原因之一 ,而癫痫敏感性增强的时间出现于急性癫痫发作后

戊四氮致痫大鼠脑神经型钙黏附素和神经营养因子-4表达的变化及灵芝孢子粉的干预作用

目的:观察戊四氮致痫大鼠脑神经型钙黏附素(N-cadherin)和神经营养因子-4(NT-4)表达的变化及灵芝孢子粉的干预治疗作用,研究癫痫的发病机制及灵芝孢子粉的作用机制。方法:健康雄性Wistar实验大鼠30只,随机分为正常对照组、癫痫模型组和灵芝孢子粉治疗组,每组10只。模型组和治疗组均用致痫亚惊厥剂量的戊四氮(PTZ)腹腔注射制作Wistar大鼠慢性点燃模型。在低温条件下迅速取脑,通过免疫组化和Westernblotting检测皮质和海马区N-cadherin和NT-4的变化。结果:实验性癫痫大鼠模型制作成功,灵芝孢子粉组和癫痫模型组实验动物均达到点燃标准,与癫痫模型组动物相比,灵芝孢子粉组大鼠潜伏期明显延长,但持续时间无显著差异。免疫组化和Western blotting检测实验结果表明:癫痫模型组实验大鼠脑海马和皮质N-cadherin含量比正常对照组增高(P<0.01);灵芝孢子粉组N-cadherins含量比癫痫模型组下降(P<0.01)。同时癫痫模型组大脑海马和皮质NT-4含量比正常对照组增加(P<0.05);灵芝孢子粉组NT-4含量比癫痫模型组增加(P<0.01)。结论:灵芝孢子粉能够降低N-cadherin的表达,调整病变神经元兴奋性,起到抗癫痫作用,还能增强NT-4的表达从而减轻癫痫发作对神经系统的损伤。

灵芝孢子粉对戊四氮致痫大鼠脑组织GDNF与NT-3表达的影响

目的:观察和探讨灵芝孢子粉干预后戊四氮(PTZ)致痫大鼠皮质和海马区胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)和神经营养因子-3(NT-3)的变化,进一步研究癫痫的发病机制及灵芝孢子粉的作用机制。方法:Wistar大鼠30只,随机分为正常对照组、癫痫模型组和灵芝孢子粉治疗组,每组10只。模型组和治疗组采用PTZ腹腔注射制作Wistar大鼠慢性点燃模型。实验后断头迅速取脑,采用免疫组化方法检测皮质和海马区GDNF和NT-3表达的变化;同时用Westernblotting检测海马各指标蛋白的变化。结果:灵芝孢子粉干预后,免疫组化显示:皮质和海马区GDNF和NT-3较癫痫模型组明显增加;Western blotting检测显示:海马中GDNF和NT-3表达较癫痫组显著增加。结论:灵芝孢子粉能够增强GDNF和NT-3的表达从而减轻癫痫发作给神经系统带来的损伤,所以灵芝孢子粉可能具有减轻痫性发作、保护神经元的作用。

钙敏感受体在癫痫大鼠发作中的表达和凋亡通路的变化

目的观察钙敏感受体(CaSR)在癫痫大鼠发作中的表达和凋亡通路的变化。方法采用连续28d亚惊厥剂量的戊四氮pentetrazole(PTZ 35mg/kg)腹腔注射制备大鼠癫痫模型。Wistar大鼠随机分为2组:正常对照组(control group);癫痫组(epilepsy group),癫痫模型组用PTZ(35mg/kg)腹腔注射,每天1次。采用Western blotting分别观察CaSR、Bax、Bcl-2和caspase-3的蛋白表达;TUNEL染色观察海马神经元凋亡情况;光镜观察海马神经元尼氏染色形态学结构变化;紫外分光法检测髓过氧化物酶(MPO)和黄嘌呤氧化酶(XOD)。结果与正常组比较,癫痫组XOD、MPO的含量明显增高,细胞凋亡指数以及CaSR、Bax和caspase-3的表达均达高峰,同时Bcl-2表达减少,海马神经元超微结构损伤严重。结论 CaSR表达增多可能参与了大鼠癫痫的发生,氧化应激和凋亡可能参与癫痫的发生。

NF-κB在发育鼠戊四氮反复点燃癫痫形成中的作用

目的:用NF-κB阻滞剂吡咯烷二硫基甲酸盐(PDTC)阻断NF-κB的表达,探讨核因子κB(NF-κB)在发育鼠戊四氮(PTZ)点燃癫痫形成过程中的作用。方法:生后10 d(P10)Wistar大鼠72只,随机分为PTZ组、PDTC+PTZ组及生理盐水对照组3组,制备戊四氮反复点燃癫痫模型。观察各组大鼠行为学改变、海马各区细胞形态及细胞计数、NF-κB表达、5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)阳性细胞数和苔藓纤维发芽等指标。结果:(1)NF-κB表达,PTZ组显著高于对照组及PDTC+PTZ组(P<0.01);(2)海马神经细胞计数,PTZ组齿状回(DG)区颗粒细胞较对照组显著增加(P<0.05);PDTC+PTZ组CA1、CA3和门区神经元数较PTZ组均明显减少(P<0.05);(3)DG区BrdU阳性细胞数,PTZ组和PDTC+PTZ组均较对照组显著增加(P<0.01);PDTC+PTZ组DG区BrdU阳性细胞数目明显较PTZ组少(P<0.01);NF-κB吸光度值与BrdU阳性细胞数/颗粒细胞数相关性分析呈正相关,具有统计学意义(P<0.01);(4)苔藓纤维发芽,PDTC+PTZ组和PTZ组均有苔藓纤维发芽,两组比较没有显著差异。结论:NF-κB在发育鼠癫痫中发挥重要作用,促进海马神经元发生,保护海马神经细胞,但对苔藓纤维发芽无明显作用。

NMDA受体NR2A、NR2B亚基在戊四氮诱导慢性癫痫大鼠中的作用

目的:探讨NMDA受体NR2A、NR2B亚基在戊四氮(PTZ)诱导慢性癫痫大鼠惊厥发作中的作用及机制。方法:48只雄性SD大鼠随机分为:Control组、PTZ组、PTZ+MK-801组、PTZ+NVP组、PTZ+Ifenprodil组;连续腹腔注射35 mg/kg PTZ 28 d,注射PTZ 0.5 h前,各组分别注射等量0.9%氯化钠溶液、0.1 mg/(kg·d)MK-801、5.0 mg/(kg·d)NVP、10 mg/(kg·d)Ifenprodil。按照Racine分级标准每天记录行为学评分。第29天处死动物,尼氏染色观察大鼠海马神经元丢失情况,Western blot法测定大鼠海马NR2A、NR2B亚基水平。结果:与PTZ组比,MK-801组和NVP组戊四氮诱导慢性癫痫大鼠的惊厥发作减轻,而Ifenprodil组无减轻。与Control组比,PTZ组海马神经元大量丢失;与PTZ组比,MK-801、NVP和Ifenprodil均能减少海马神经元丢失;其中,MK-801、NVP减轻神经元损伤效果显著。与对照组比,各组惊厥发作后海马NR2A、NR2B亚基水平均下降,PTZ组最明显;NR2A亚基水平,PTZ+NVP组高于PTZ组;NR2B亚基水平,各药物干预组均高于PTZ组。结论:非选择性抑制NMDA受体和选择性抑制NR2A亚基能够减轻慢性癫痫大鼠发作强度和海马神经元损伤,而选择性抑制NR2B亚基仅能减轻海马神经元损伤,这提示惊厥发作可能与NR2A亚基有关,而神经元损伤可能与NR2A、NR2B亚基均有关。

戊四氮致痫大鼠海马GSK-3β表达与苔藓纤维出芽关系研究

目的观察戊四氮（PTZ）致痫大鼠海马各区糖原合成酶激酶-3β（GSK-3β）蛋白及其mRNA表达和苔藓纤维出芽（MFS）情况,探讨GSK-3β在癫痫发病机制中的作用。方法SD雄性成年大鼠120只,随机分为实验组和对照组;实验组分为PTZ第1次注射后3d、1w、2w、4w、6w共5个亚组,每亚组12只。对照组同样随机分为5个亚组,每亚组12只,与实验组各时间点对应。以上各亚组再分2个小组,每小组6只大鼠,分别进行（1）GSK-3β的免疫组化和原位杂交染色并测定其相应的光密度值;（2）Timm染色并评分。结果实验组大鼠海马各区GSK-3β蛋白及其mRNA表达在点燃过程中逐渐增多,点燃后表达逐渐下调到正常对照组水平,在点燃前后除6w组外GSK-3β表达与对照组相应时间点比较差异有统计学意义（P〈0.05）;实验组CA3区在点燃前可见1-4级MFS,点燃后可见4-5级MFS;癫痫点燃过程中CA3区GSK-3β表达与MFS评分有线性正相关关系。结论GSK-3β在海马表达变化可能在苔藓纤维出芽的过程中起促进作用,从而促进癫痫的发生。

戊四氮诱发癫痫大鼠海马齿状回颗粒细胞树突发芽

目的利用化学点燃大鼠癫痫模型,观察癫痫发作后大鼠海马齿状回颗粒细胞树突的形态学变化,探讨癫痫敏感性形成机制。方法利用戊四氮(PTZ)制作化学点燃大鼠癫痫模型。采用点燃成功后3d、7d两个时间点,应用神经元高尔基染色法,在光镜下观察和定量分析大鼠海马齿状回颗粒细胞的树突改变。结果颗粒细胞的形态学参数(树突总长度、树突分支点数、树突野最大伸展距离和树突棘密度)在PTZ点燃后3d时均显著降低(P<0.05),而在PTZ点燃后7d时明显回升,并明显高于生理水平(P<0.05)。结论在PTZ点燃大鼠癫痫发作后,颗粒细胞树突出现明显的可塑性改变,并在PTZ点燃后7d时出现发芽现象,这可能与癫痫敏感性的形成有关。

神经干细胞移植治疗癫痫海马区r-GABA和Glu的变化

目的研究神经干细胞移植对戊四氮慢性癫痫模型大鼠海马区r-氨基丁酸(r-GABA)和谷氨酸(Glu)及脑电图的变化。方法56只雄性大鼠选择雄性SD大鼠56只,腹腔注射生理盐水组8只,癫痫模型组分神经干细胞移植实验组24只,未移植对照组24只。然后3组中再分A,B,C,D4组。其中注射组生理盐水每组2只,实验组和对照组各6只。建立脑电电极。制作成四氮慢性癫痫模型,记录脑电图和高效液相色谱仪测定大脑海马组织GABA、Glu含量。结果移植组1周,2周GABA、Glu的变化不大,而到第4周后,GABA逐步升高,Glu逐步下降,第8周时GABA明显升高,Glu明显下降。未移植组GABA、Glu含量基本无变化,移植组对癫痫大鼠的脑电具有明显的抑制作用,移植组与未移植组比较P<0.05,组间有明显差异。结论神经干细胞移植可以干预癫痫大鼠海马区GABA、Glu的变化。

Munc13-1及RIM1在颞叶癫痫患者及戊四氮大鼠模型中的表达

目的通过研究神经突触前膜胞内蛋白13-1(mammalian uncoordinated 13-1,Munc13-1)及神经元突触膜胞外分泌调节蛋白1(rab-interacting molecules 1,RIM1)在颞叶癫痫患者皮质和戊四氮点燃癫痫大鼠模型中的表达变化及两者的相关性,初步探讨Munc13-1及RIM1在癫痫发生中的作用及机制。方法以颞叶癫痫患者病灶切除的皮质为癫痫组(n=18),以脑外伤患者切除的正常皮质为对照组(n=15);取40只SPF级雄性SD大鼠抽签均分成2组,其中一组连续腹腔注射戊四氮(3.5 mg/kg)21 d,出现至少连续3 dⅣ级及以上癫痫发作的大鼠为癫痫组(n=15),另一组注射等量生理盐水为对照组(n=20);分别采用免疫组化及免疫荧光技术对Munc13-1进行定位和表达分析,Western blot检测Munc13-1和RIM1的表达变化,免疫共沉淀验证Munc13-1和RIM1的相互作用。结果 (1)免疫荧光定位结果显示Munc13-1主要表达于神经元;(2)免疫组化及Western blot结果显示:在癫痫组中Munc13-1和RIM1的表达均升高,差异有统计学意义(P<0.01);(3)免疫共沉淀示Munc13-1与RIM1之间存在相互作用的关系。结论 Munc13-1及RIM1在癫痫组中的表达均明显升高,且两者间存在相互作用的关系,提示Munc13-1可能通过结合RIM1参与癫痫的发生。

戊四氮致痫大鼠对学习记忆及海马齿状回PSD-95表达的影响

目的探讨戊四氮(PTZ)点燃癫痫对大鼠空间学习记忆及海马齿状回突触后致密物-95(PSD-95)表达的影响。方法戊四氮腹腔注射点燃慢性癫痫(CEP)模型,采用Morris水迷宫对大鼠进行行为学检测,运用免疫组织化学方法观察海马齿状回PSD-95的表达。结果癫痫组大鼠空间学习记忆能力受损;其海马齿状回PSD-95免疫阳性产物与对照组间差异有统计学意义(P<0.01)。结论戊四氮点燃癫痫大鼠空间学习记忆受损可能与海马神经元PSD-95的表达减少有关。

乙酰谷酰胺对戊四氮致痫大鼠大脑病理改变以及GABABR和NMDAR1的影响

目的研究乙酰谷酰胺对戊四氮致痫大鼠大脑病理改变的影响,以及乙酰谷酰胺对大鼠脑内GABABR和NMDAR1表达的影响,寻找乙酰谷酰胺对癫痫的治疗的机制。方法戊四氮腹腔注射建立癫痫模型,分组给与不同剂量乙酰谷酰胺治疗,经主动脉灌注取脑组织,HE染色观察大脑病理改变情况,用免疫组织化学方法检测GABABR和NMDAR1的表达。结果各组神经细胞坏死率有显著差异(P<0.05),治疗组和模型组GABABR表达明显低于空白对照组(P<0.05),NMDAR1表达明显高于空白对照组(P<0.05)但各治疗组之间无明显差异(P>0.05)。结论乙酰谷酰胺对癫痫导致的脑损伤有治疗作用,并且其疗效呈现一定的剂量和治疗时间依赖性。乙酰谷酰胺对脑内GABABR和NMDAR1表达的影响不显著,因此推测乙酰谷酰胺的作用机制不是通过这两个受体起作用,具体机制有待进一步研究。

耐抗癫痫药大鼠模型脑内P-糖蛋白的表达

目的：通过耐丙戊酸钠（VPA）、耐卡马西平（CBZ）大鼠惊厥模型探讨癫痫耐药机制。方法：采用大鼠腹腔注射戊四氮（PTz）21d的点燃方法，建立大鼠惊厥模型。在此基础上分别以CBZ及VPA灌胃14d，建立耐CBZ及耐VPA大鼠惊厥模型。实验分4组：正常对照组、惊厥对照组、耐CBZ组及耐VPA组，每组8只鼠。以惊厥潜伏期和Racine行为学分级作为评定药效指标。采用免疫组化法检测大鼠脑内P-糖蛋白（Pgp）的表达变化；统计分析各组大鼠脑内Pgp表达量，探索癫痫大鼠的耐药机制。结果：①24只大鼠在连续腹腔注射PTZ21d达点燃标准，成功建立惊厥模型；②取16只惊厥大鼠分两组各灌胃CBZ及VPA14d后，两组大鼠惊厥潜伏期（5．84士2．94和6．23土2．57min）较惊厥对照组的惊厥潜伏期（3．32±1．83min）显著延长（P〈0．01），提示耐CBZ及耐VPA模型制备成功；③惊厥对照组PgP的表达（12．40±10．35）比正常对照组（1．62±0．85）增高，差异有统计学意义（P〈0．01）；耐CBZ组（38．67±17．28）及耐VPA组大鼠的PgP的表达（42．33±15．54）较惊厥对照组（12．40±10．35）增高，差异有显著意义（P〈0．01）；而耐CBZ组与耐VPA组之间PgP的差别则无统计学意义（P〉O．05）。结论：①大鼠腹腔注射PTz21d，建立惊厥模型，再进一步分别灌胃CBZ及VPA14d，成功建立耐CBZ及耐VPA模型；②CBZ和VPA可显著诱导Pgp的表达，而长期惊厥发作对其表达也可能有一定的诱导Pgp表达的作用。

戊四氮致痫大鼠脑组织NT-4的变化及百里香与薄荷精油的干预作用

目的观察戊四氮致痫大鼠脑组织神经营养因子-4（Neurotrophin-4，NT-4）的变化，利用百里香与薄荷精油制备雾化吸入剂进行干预治疗，研究癫痫的发病机理及精油的作用机制。方法健康雄性Wistar实验大鼠40只，随机分为正常对照组、癫痫模型组、精油治疗I组、精油治疗Ⅱ组、每组10只。模型组和治疗组均用致痫亚惊厥剂量的戊四氮（PTZ）腹腔注射制作Wistar大鼠慢性点燃模型。在低温条件下迅速取脑，通过免疫组化检测皮质区NT-4的变化。结果实验性癫痫大鼠模型制作成功，精油组和癫痫模型组实验动物均达到点燃标准，与癫痫模型组动物相比，精油组大鼠潜伏期劈显延长，但持续时间之间的差别没有显著性。免疫组化检测实验结果表明：癫痫模型组大脑皮质NT--4含量比正常对照组增加，差异显著具有统计学意义性（P〈0．05）；精油组NT-4含量比癫痫模型组增加，差异显著有统计学意义（P〈0．01）。结论精油能够增强NT-4的表达，减轻癫痫发作时神经系统的损伤，可能有抗癫痫作用。

丁螺环酮加强戊四氮致小鼠惊厥作用

新型非苯二氮(艹卓)类抗焦虑剂丁螺环酮(Bus)(1～10 mg·kg^1)使戊四氮(PTZ)致惊厥作用的CD_(50)下降12～37％,具有剂量依赖性和时间效应关系.色氨酸羟化酶抑制剂对氯苯丙氨酸(250 mg·kg^1)和单胺耗竭剂利血平(2mg·kg^1)均可增强PTZ致惊厥作用,但同时减弱Bus的增强作用.而α_2受体激动剂可乐定和赛拉嗪以及DA受体激动剂阿朴吗啡,拮抗剂氟哌啶醇均不影响Bus的增强作用.结果表明,Bus的增强作用有5-HT能神经元的参与.

一种新的半数效量测定方法——简化随机逼近法

目的:本文根据序贯法原理设计了一种新的测定药物半数效量的方法:简化随机逼近法。并初步探讨了该法的可靠性和优缺点。方法:采用简化随机逼近法测定了普鲁卡因和戊四氮腹腔注射对小鼠的LD50,并与经典的Bliss法进行比较。结果:简化随机逼近法测得的普鲁卡因和戊四氮的LD50分别为207.5mg/kg、107.2mg/kg,而Bliss法测得的LD50分别为206.1mg/kg和101.2mg/kg。两法测定结果相近,但简化随机逼近法更为省时、省动物且计算简便。结论:简化随机逼近法适用于药效反应快、终点判定所需时间短的药物LD50或ED50的测定。

乙酰谷酰胺对戊四氮致痫大鼠大脑病理改变的影响

目的研究乙酰谷酰胺对戊四氮致痫大鼠大脑病理改变的影响。方法戊四氮腹腔注射建立癫痫模型,每组分别给予不同剂量乙酰谷酰胺治疗,经主动脉灌注取脑组织,HE染色观察大脑病理改变情况。结果治疗组神经元平均坏死率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)结论乙酰谷酰胺对癫痫导致的脑损伤有治疗作用,并且其疗效呈现一定的剂量和治疗时间依赖性。