Pentostatin的合成进展

Pentostatin是从链霉素菌发酵产生的发酵液中分离出来的拟嘌呤类物质。对毛细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病等具有特殊疗效。综述了Pentostatin的合成方法研究进展,分析了其合成路线,并讨论了各合成方法的优缺点。

高效液相色谱法分离和分析喷妥司汀及其异构体

利用高效液相色谱方法在普通Polar-RP柱上成功分离pentostatin的4个异构体。通过考察色谱柱、流动相、温度等对分离度的影响，得到最佳分离条件为：室温下以Phenomenex Synergi Polar-RP色谱柱，采用磷酸氢二钠水溶液（50mmol，pH8．8）．甲醇（97：3，WV）为流动相；282nm检测；流速为1．0mL／min。结果表明，4个异构体之间均达到基线分离，且保留时间和峰面积的RSD均控制在0．6％以内。pentostatin在0．1—1．0g/L、其异构体在0．5-1．5mg／L范围内的线性相关系数（R）均大于0．99。在此实验基础上，建立分离纯化Pentostatin的制备色谱条件，以制备色谱法得到的产品纯度达到99．8％，收率达到理论产率的80．2％。

抗生素链霉菌合成喷司他汀发酵工艺的关键原料研究

目的通过抗生素链霉菌对发酵培养基和发酵工艺优化,对发酵过程中所用的关键原料进行了研究,提高喷司他汀的发酵产量。方法考察和评估抗生素链霉菌发酵生产喷司他汀发酵培养基中的关键原料,研究关键材料的供应商及用量,提高喷司他汀产量,于5000L发酵罐上进行发酵工艺验证试验。结果喷司他汀摇瓶发酵单位达232mg/L,结果较原始工艺提高了28%;在5000L发酵罐发酵单位达210mg/L,较原始工艺提高了74%。结论控制发酵培养基中的植物油种类、来源和用量,能有效提高喷司他汀的生物合成。

喷司他汀发酵液HPLC含量测定条件的优化

目的对喷司他汀发酵液液相色谱测定含量的方法条件进行优化。方法在保证分离度效果的前提下,建立一种新的流动相测定喷司他汀发酵液以达到优化的目的。结果在0.050 9 mg/mL^0.302 5 mg/mL浓度范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7,n=6),新的流动相实验效果有明显的改善。结论本方法改善了原分析方法,具有快速简便,结果准确,重复性好,为优化含量测定的色谱条件提供了参考。

高效液相色谱-质谱法测定发酵液中的喷司他丁

建立了测定发酵液中喷司他丁含量的反相高效液相色谱-质谱分析方法。采用的色谱条件:色谱柱为Hyper-silODS2柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇/乙腈/10mmol/L乙酸铵(pH7.6)(2.5/2.5/95,v/v/v),流速为1.0mL/min;检测波长为280nm;柱温为40℃;进样量为10μL。喷司他丁在1.0～100mg/L范围内有良好的线性关系,相关系数为0.9999。该方法精密度好,稳定性高,能简便、快速、准确地测定发酵液中喷司他丁的含量。

低GI高虫草素和喷司他丁含量蛹虫草固体发酵条件的优化

为获得活性物质含量较高且血糖指数(glycemic index,GI)较低的蛹虫草发酵菌质,以发酵菌质的预估血糖指数(expected glycemicindex,eGI)、虫草素和喷司他丁含量为评价指标,通过单因素及正交试验对固体发酵培养基配方进行优化,并确定最佳培养时间。结果表明,蛹虫草固体发酵培养基的最优配方包括70%的主料和30%的辅料,其中主料由质量比为4:6的大米和燕麦混合组成,辅料为豆粕,二者混合后按料液比(m/V)1:0.9添加含10 g/L甘氨酸的液体完全培养基为营养液,25℃避光培养18 d。此条件下得到的发酵菌质e GI值为53.86,与初始配方相比,e GI值降低了9.39%,达到了低GI水平;虫草素含量为12204.55 mg/kg,喷司他丁含量为1021.48 mg/kg,分别比初始配方提高了348.13%和81.79%。优化所得低GI值、高虫草素和喷司他丁含量的蛹虫草发酵菌质为低GI功能食品的开发提供了原料。

适合培育蚕蛹虫草的蓖麻蚕品种和蛹虫草菌株筛选试验

用4个蓖麻蚕品种的5龄4天幼虫和4株蛹虫草菌(Cordyceps militaris)菌株培育蚕蛹虫草,以蓖麻蚕感染僵化率、出草率以及蚕蛹虫草中腺苷、虫草素、喷司他丁含量为指标,筛选最佳培育蚕蛹虫草的蓖麻蚕品种和蛹虫草菌株组合。结果显示,相同品种的蓖麻蚕幼虫接种不同蛹虫草菌株后僵化率差异极显著,接种后240 h接种H71菌株的僵化率最高为94.33%;不同品种蓖麻蚕接种相同蛹虫草菌株的僵化率差异显著,接种后240 h B2品种的僵化率最高为88.00%;不同试验组均获得正常子实体,平均出草率变幅为80.75%~90.45%,其中H71菌株接种B2品种的出草率最高,为94.64%;各试验组间蚕蛹虫草的子实体和僵蚕中虫草素、喷死他丁、腺苷含量达到极显著或显著差异,其中H22菌株接种B2品种所产生的子实体中喷司他丁和虫草素含量最高,质量分数分别为8.07 mg/g和8.45 mg/g,H71菌株接种B21品种所产生的子实体中腺苷含量最高,质量分数为5.24 mg/g;不同试验组僵蚕中虫草素、喷死他丁和腺苷含量均极显著(P<0.01)低于蚕蛹虫草子实体中的含量,其中H22菌株接种B21品种试验组僵蚕中的喷司他丁、虫草素和腺苷含量最高,质量分数分别为0.39 mg/g、2.67 mg/g和1.10mg/g。综合以上试验结果,初步认为以H22菌株接种B2品种培育的蚕蛹虫草,具有较高的喷司他丁和虫草素药用生产前景。

高效液相色谱-串联质谱法同时测定发酵液中喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定发酵液中喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷含量的方法。发酵液经高速离心、水溶液稀释、微孔过滤后进行HPLC-MS/MS分析测定。选用Waters Atlantis■ T3色谱柱(100 mm×2.1 mm,5μm)及其保护柱(5 mm×2.1 mm,5μm)进行分离,选择10 mmol/L甲酸铵(含0.1%甲酸)-甲醇(含0.02%甲酸)溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL。在电喷雾电离、正离子模式下收集数据,对目标化合物进行定性定量分析。喷司他丁定量离子对为m/z 269.17>153.20,碰撞能为11 V,2′-氨基-2′-脱氧腺苷定量离子对为m/z 267.00>136.10,碰撞能为18 V。采用外标法对喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷定量分析。结果表明,喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷在1.0~250μg/L范围内呈现出良好的线性关系,相关系数(R2)为0.9969~0.9996,相对标准偏差(RSD)为6.51%~8.35%(n=8)。在发酵液样品中进行加标水平为1.0、5.0和25μg/L的添加回收试验(n=6),喷司他丁的回收率为97.94%~104.46%,RSD为3.74%~4.88%;2′-氨基-2′-脱氧腺苷回收率为89.96%~107.21%,RSD为4.81%~13.29%。喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷的检出限为0.003~0.060μg/L,定量限为0.010~0.200μg/L。该文系统性地建立了基于HPLC-MS/MS测定发酵液中喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷的方法,在实际样品检测中,操作简便,准确度高,灵敏快速,有效克服了基质效应对目标化合物的影响,改善了目标化合物的峰形和稳定性,为从微生物发酵液中检测喷司他丁和2′-氨基-2′-脱氧腺苷提供了方法学基础和借鉴。

喷司他丁发酵条件的优化

喷司他丁是一种抗肿瘤药物,主要以微生物发酵法生产。本研究对喷司他丁发酵的通气量、培养温度、接种量、种龄、发酵周期等参数进行单因素考察,并通过正交试验确定了喷司他丁最佳发酵参数为:装量60 mL,种龄42 h,按5%接种量,28℃下发酵168 h,喷司他丁发酵效价达183μg/mL,比对照提高20%以上。

变温及控制pH提高喷司他丁发酵产量

温度和pH值对喷司他丁发酵的影响显著,采用变温发酵技术,流加有机酸控制发酵过程中的pH值,使喷司他丁产量大幅度提高。发酵温度控制在0~24 h 33℃,24~312 h 32℃,312~403 h 35℃,溶氧35%,以柠檬酸溶液控制发酵pH值为7.6,喷司他丁在发酵液中的含量达到100.06 mg/L,是优化前的2.96倍,为文献报道最高水平的1.8倍。

喷司他丁的合成及其生物合成机制研究进展

喷司他丁是一种核苷类抗生素,对腺苷脱氨酶有极强的抑制效果,在临床治疗恶性肿瘤方面具有广泛应用。但其生产成本高、市售价格昂贵,难以满足需求。近10年来,关于生物合成喷司他丁的研究主要集中在菌种选育、优化培养基组分与发酵工艺等方面。目前,尽管喷司他丁的生物合成机制得到了阐明,但生物合成喷司他丁方面的综述尚无。对此,文中综述了喷司他丁的生物合成进展,为其进一步研究提供参考。首先,简介了喷司他丁的合成方法及其生产现状;其次,总结了喷司他丁在不同微生物中的生物合成机制;最后,探讨了生物合成喷司他丁所面临的问题,并提出调控微生物合成喷司他丁的策略,以期为喷司他丁的规模化生产提供指导。