牡丹病毒病研究进展

笔者纠正了“3种牡丹(芍药)病毒”的过时观点,统计、分析了国际上共计17种病毒侵染牡丹、芍药的情况,回顾了国内学者对牡丹、芍药病毒病的研究成果,包括对烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)侵染、为害牡丹、芍药的调查,近年来新发现的牡丹卷叶相关病毒(peony leafroll-associated virus,PLRaV)等多种侵染牡丹、芍药的新病毒,苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV)等已知病毒侵染牡丹、芍药的寄主新纪录,利用VIGS(virus induced gene silencing)技术研究牡丹、芍药基因功能等一系列研究。目前国内牡丹病毒病基础研究仍然存在多方面不足,如国家级课题专项资助机会少,对传统牡丹、芍药栽培中心病毒病发生本底情况不明,对病毒侵染、传播机制研究不深入等;在病毒病检测与诊断技术应用方面与西方国家相比存在明显的劣势,如基层的技术人员对病害诊断知识更新不及时,对病毒病的分子检测技术的最新发展了解不全面。由此提出应用分子检测技术开展全国范围的牡丹病毒病普查、开始牡丹病毒病的危险性分析和风险管理等有益建议。

牡丹授粉受精基因PoMYBs的VIGS体系的建立

授粉受精成败是影响牡丹结实和远缘杂交的关键生殖过程,但缺乏稳定的遗传转化体系严重影响了其基因功能验证。针对牡丹授粉受精基因功能鉴定,采用注射法分析了不同注射部位(雌蕊和花柄)和菌液浓度(1.0、1.5和2.0)对目的基因沉默效率的影响。结果表明,注射雌蕊、花柄PoMYB2基因沉默效率分别为62.5%、66.7%,注射法尤其是注射花柄的方法适用于牡丹植株病毒诱导的基因沉默(Virus induced gene silencing,VIGS)体系的构建;当菌液浓度OD600分别为1.0、1.5、2.0时,PoMYB2基因的沉默效率分别为100%、77.8%和0%,菌液OD600为1.0时沉默效率最高;注射花柄上部,菌液OD600为1.0时,PoMYB1和PoMYB2基因的表达量显著降低。由此获得了沉默PsMYBs的适宜体系:以PoMYBs基因的非保守区域为靶片段,以带花柄的紧实花蕾为材料,注射花柄上部,菌液OD600为1.0,置于去离子水中,暗培养1 d,转移至正常光照培养环境后可进行检测。本研究建立的VIGS沉默体系可有效沉默雌蕊中的内源基因,为进行牡丹雌雄蕊发育、授粉受精和结实方面的基因功能验证奠定了基础。

侵染牡丹的苹果茎沟病毒分离物基因组测序及分析

前期在北京地区种植的牡丹中检测到了苹果茎沟病毒(apple stem grooving virus,ASGV),并获得了1个ASGV牡丹分离物的基因组全序列。为分析侵染牡丹的ASGV的遗传多样性,根据已报道的118个ASGV基因组全序列的保守区设计特异性引物,用重叠(overlapping)RT-PCR和cDNA末端序列快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术获得9个ASGV牡丹分离物的基因组全序列。共计10个ASGV牡丹分离物,基因组全序列成对比对的核苷酸一致性为81.9%~97.6%,与其他物种ASGV分离物基因组全序列的核苷酸一致性为80.8%~91.2%。序列分析表明ASGV牡丹分离物的分子多样性主要位于多聚蛋白的保守结构域Mtr和P-Pro之间以及RdRp与CP之间。用127个ASGV基因组全序列进行重组分析,5个牡丹分离物被鉴定为重组体,其中1个重组体的重组亲本来源于不同国家的不同寄主植物。用79个非重组的ASGV基因组全序列构建系统发育树,表明ASGV牡丹分离物与ASGV苹果、梨和柑橘等分离物共同聚类到第Ⅰ组,且ASGV牡丹分离物聚到不同的分支。研究结果表明侵染牡丹的ASGV具有遗传多样性,重组可能是导致其遗传多样性的一个因素。

侵染牡丹的烟草脆裂病毒的检测鉴定及序列分析

为明确江苏省牡丹上烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)的发生情况,利用ELISA和RT-PCR方法对采集自扬州市的40份牡丹叶片样品进行了检测鉴定,测定了其中一个分离物Peony-11中TRV RNA1分子的部分蛋白编码区序列,并结合Gen Bank中已报道的相关序列对其进行了多样性和系统发生分析。结果显示,江苏省扬州市牡丹上TRV的检出率高达62.5%;序列分析表明本研究获得的TRV牡丹分离物Peony-11与Gen Bank中其它63个分离物的核苷酸序列一致率为90.5%~99.7%;系统发生和遗传距离分析表明TRV可以分成2个组10个亚组,组间、亚组间具有较为清晰的地理和寄主特异性,其中Peony-11分离物位于亚组I-1。

利妥昔单抗联合赤芍治疗乙型病毒性肝炎病毒阳性非霍奇金淋巴瘤的临床研究

目的观察利妥昔单抗联合赤芍治疗乙型病毒性肝炎(乙肝)病毒阳性非霍奇金淋巴瘤的临床疗效及安全性。方法将31例乙肝病毒阳性非霍奇金淋巴瘤患者随机分为对照组16例和试验组15例。对照组予以375 mg·m-2利妥昔单抗,静脉滴注,第1天;试验组在对照组治疗的基础上,予以赤芍每次150m L,bid,口服,连续14 d。2组患者1个疗程均为21 d,均治疗2个疗程以上。比较2组患者的临床疗效、生活质量评分,以及药物不良反应的发生情况。结果治疗后,试验组和对照组的总有效率分别为86.67%(13例/15例)和43.75%(7例/16例),生活质量评分分别为(84.24±3.15)和(72.06±5.14)分,差异均有统计学意义(均P<0.05)。试验组发生的药物不良反应有消化不良、头晕和关节痛,对照组发生的药物不良反应有心动过缓、腹胀、腹泻和消化不良。试验组和对照组的总药物不良反应发生率分别为26.67%和37.50%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论利妥昔单抗联合赤芍治疗乙肝病毒阳性非霍奇金淋巴瘤的临床疗效确切,其能显著改善患者的生活质量,且不增加药物不良反应发生率。