胡椒瘟病菌(Phytophthora capsici)孢子囊诱导及发育过程观察

孢子囊的产生和发育过程是研究胡椒瘟病菌(Phytophthora capsici)及其病害防控的重要基础。本研究分析不同诱导条件下胡椒瘟病菌孢子囊的产生情况,并通过光学显微镜和共聚焦显微镜观察孢子囊及其内部游动孢子的发育过程。结果发现:(1)3种诱导方法均能诱导出大量孢子囊,其中在V8-A平板上光照和抹伤双重诱导法获得的孢子囊数量最多,其次是在V8-A平板上光照诱导法,获得孢子囊数量最少的是V8液体光照诱导法,但仅差异最大的2个处理间达到显著水平;(2)显微镜观察发现,孢子囊由气生菌丝顶端逐步膨大形成,初始为近球形逐渐发育成倒洋梨形,孢子囊成熟后从顶端排出大量游动孢子,偶尔可见孢子囊顶端直接发育出芽管;(3)共聚焦显微镜观察发现,首先孢子囊内部原生质体被膜结构隔裂成大约数十个独立小格,然后在每个格子中积累数倍于细胞核的DNA,最后每份细胞核DNA发育成一个游动孢子。本研究从微观角度揭示P.capsici孢子囊发育外观及内部的形态特征,为胡椒瘟病菌后续致病机制研究和胡椒瘟病田间防控提供技术基础。

海南省胡椒瘟病病原鉴定及发生规律

采用形态特征观察、致病性测定及rDNA-ITS序列分析等方法,对海南省主产区胡椒瘟病病原进行鉴定,通过田间实地调查对胡椒瘟病的发生规律进行了研究。结果表明,该病病原为辣椒疫霉(Phytophthora capsici),月平均降雨量对该病的发生有着显著的影响。降雨量越大,持续降雨天数越多,发病率越高。

一株拮抗胡椒瘟病菌的生防菌S的鉴定及其生物学特性研究

为明确生防菌S对胡椒瘟病菌的抑制作用及其分类地位,通过平板对峙培养和防效盆栽试验研究了生防菌S对胡椒瘟病菌的抑制作用,测定了菌株S的生物学特性,并采用形态特征观察、生理生化测定法和16S r DNA序列分析法对菌株S进行了鉴定。结果表明,生防菌S对胡椒瘟病菌的抑制率为60%;菌株S的最适生长温度为30℃,最适p H为8.0;根据16S r DNA序列分析比对结果,生防菌S与类芽胞杆菌属Paenibacillus sp.基因序列的同源性最高,结合形态和生理生化特征鉴定结果,确定该菌株为多黏类芽胞杆菌Paenibacillus polymyxa。

胡椒瘟病田间发生规律观察

研究胡椒瘟病的发生与气象因子、土壤pH、土壤质地、地形地势、种植年限等之间的关系。结果表明:气象因子是胡椒瘟病发生流行的主要因素;土壤pH和种植年限与病害的发生没有显著的相关性,但是土壤质地、地形地势、农业措施对病害的发生有着显著的影响。

环境因素对胡椒瘟病菌游动孢子产量的影响

游动孢子是胡椒瘟病最主要的侵染源,其产量受环境条件影响,但是具体影响关系尚不明确。本研究利用胡椒瘟病菌孢子囊诱导技术,逐个分析光照、温度、湿度、pH等单一环境因素变化对胡椒瘟病菌游动孢子产量的影响。结果表明:光照强度在200~20000 lx时胡椒瘟病菌均可产孢,在5000 lx时产孢量最高(1.28×106个/mL),分别是2000和10000 lx的6.89倍和12.40倍;温度在20~30℃时,产孢量均能达到5.82×105个/mL以上,在25℃时产孢量最高;相对湿度在50%~99%时,产孢量均能达到2.27×105个/mL以上,其中相对湿度较低的条件下(50%和65%)游动孢子产量显著高于其他湿度条件;环境pH在6.0~8.0时,产孢量较高,pH 7.0时最高。综上所述,4种环境因素均对胡椒瘟病菌游动孢子产量具有显著影响,最适宜产孢的环境条件为光照强度5000 lx、温度25℃、相对湿度65%、pH 7.0。本研究为后续致病相关研究及田间病害防控奠定基础。

20种卵菌杀菌剂对海南万宁胡椒瘟病菌的室内抑菌活性

胡椒Piper nigrum L.是我国重要的热带经济作物,胡椒瘟病是危害其生产的第一大病害。为了明确胡椒主产区海南万宁瘟病病原菌种类,筛选具有防控潜力的杀菌剂,本研究采用形态特征和ITS序列特异性相结合的方法,对采自海南万宁的7株胡椒瘟病样品进行病菌的分离鉴定,并采用生长速率法检测我国当前登记的20种杀卵菌剂对其菌丝生长的室内毒力。结果发现,3株从海南万宁地区分离的胡椒瘟病菌均为辣椒疫霉Phytophthora capsici;20种卵菌杀菌剂中抑制胡椒瘟病菌菌丝生长活性最高的是吡唑醚菌酯、氟啶胺、福美双、烯酰吗啉、氰霜唑、甲霜灵等药剂,EC_(50)<1μg/mL;其次是喹啉铜、百菌清、代森锰锌、代森锌、氢氧化铜等药剂,1μg/mL<EC_(50)<10μg/mL;然后是氧化亚铜、王铜、嘧菌酯、香芹酚、霜脲氰、小檗碱等药剂,10μg/mL<EC_(50)<50μg/mL;几丁聚糖和三乙膦酸铝最低,EC_(50)>300μg/mL。该结果可为热带辣椒疫霉机理研究和防控技术开发奠定基础。

利用辣椒疫霉培养滤液体外筛选胡椒抗瘟病无性系研究(英文)

在胡椒(PipernigrumLinn.)茎尖丛生增殖技术的基础上,以印尼大叶种“LampongType”无菌实生苗作外植体源,利用辣椒疫霉(Phytophthoracapsici)培养滤液对胡椒茎尖及其增殖形成的丛生芽进行体外选择。辣椒疫霉培养滤液的不同灭菌方法对辣椒疫霉培养滤液的毒性影响显著,过滤灭菌方式可以保持辣椒疫霉培养滤液的毒性,而高温高压灭菌方式则不能。随着辣椒疫霉培养滤液浓度的增加,茎尖和丛生芽的存活率和增殖率都在下降。在存活的茎尖或丛生芽培养中,一部分可正常增殖,其余的形成愈伤组织,或者保持生长停滞的休眠状态。在选择性培养基上继代培养2次后进行生根和移栽,利用离体叶片针刺接种法对温室条件下生长的移栽植株进行抗瘟病测定。以3次抗病检测均无明显症状的植株作为抗病株。随着辣椒疫霉培养滤液浓度的增加,得到的再生植株数量降低,但其中抗病株的比例提高。利用过滤灭菌方式加入选择性培养基的处理中,25%、50%和75%的辣椒疫霉培养滤液分别获得1株、4株和3株抗病株,分别占各处理再生植株总数的1.54%、20.00%和42.86%,共获得8株,占该组处理再生植株总数的8.70%。

化学诱变结合离体选择选育胡椒抗瘟病无性系

在胡椒(PipernigrumLinn.)茎尖丛生芽增殖技术的基础上,以印尼大叶种“LampongType”无菌实生苗作外植体源,采用EMS(ethylmethanesulphonate)对胡椒茎尖进行化学诱变处理,并结合辣椒疫霉(Phytophthoracapsici)培养滤液对胡椒茎尖及其增殖形成的丛生芽进行离体选择。结果表明,利用EMS在胡椒茎尖接种前进行化学诱变可提高抗瘟病变异体的产生频率。利用EMS不同浓度和不同时间对胡椒实生苗茎尖处理后接种,不经离体选择,直接在再生植株上进行抗病检测,抗性植株频率在4.3%￣26.67%之间,而不施用化学诱变的处理则未获得抗性植株。利用不同浓度EMS和不同诱变处理时间结合不同浓度的辣椒疫霉培养滤液离体选择,各种组合所获得的抗性植株比率在33.33%￣100%范围,但各种组合均较EMS和辣椒疫霉培养滤液单独处理的要高,其中以1.0%EMS处理60min结合25%辣椒疫霉培养滤液处理的最好。

胡椒对胡椒瘟的抗性测定

用胡椒瘟菌种P2 接种不同胡椒种质的叶片 ,根据胡椒瘟发生情况评价各种质叶片的抗瘟性。结果表明 ,班尼约尔 1号、兴热 1胡椒叶片表现感病 ;73-F - 5叶片表现中等感病 ;云选