电针对自由运行状态小鼠SCN内Per1基因表达的影响

目的:研究电针对自由运行状态下小鼠SCN内核心钟基因周期基因(Per1基因)表达的作用,为不同时辰针灸效应规律研究提供分子生物学依据。方法:以小鼠每h转轮活动量筛选符合试验要求的健康昆明种小白鼠24只,按体重随机分为空白组、捆绑组、电针组,每组8只动物。电针组用自制固定器固定动物后,选"百会"、"长强"针刺,电压1～3V,疏密波,频率2/20Hz,时间15min。捆绑组用自制固定器固定15min,不予其它特殊处理。空白组不予任何特殊处理。在小鼠进入自由运行状态第3天于CT6应用实时荧光定量RT-PCR方法观测电针对SCN内per1mRNA表达情况的影响。结果:在CT6针刺,可以下调SCN内per1mRNA表达情况,与空白对照组、捆绑组比较差异有统计学意义。结论:针刺导引节律相位其作用机制可能是:在主观白天中午给予针刺能使SCN内per1基因的表达下调,降低其对正性分子成分的负反馈抑制,从而激活体内的唤醒机制,使活动增加,产生相位超前。

Exendin-4通过拮抗钙超载改善Aβ_(31-35)诱导的HT22海马神经细胞per1基因异常表达

目的:探讨Exendin-4对Aβ_(31-35)所致的HT22神经细胞per1基因异常表达的影响及可能作用机制。方法:本研究采用海马神经细胞HT22作为实验对象。以1%血清饥饿1 h来诱导细胞同步化(CT0)。MTT实验检测细胞存活率;倒置显微镜下观察细胞形态变化;Real-time PCR检测各CT时间per1基因的表达变化;选择per1表达差异最显著的CT时间点,采用流式细胞术检测细胞内钙离子浓度的变化情况。结果:(1)Exendin-4可以明显提高Aβ_(31-35)所致的HT22细胞存活率的下降;(2)镜下观察可见,经Exendin-4预处理后部分改善了Aβ_(31-35)对细胞的损伤作用,细胞形态有所恢复;(3)Aβ_(31-35)使per1基因在CT16时各处理组的相对表达量明显不同;与对照组相比,Aβ_(31-35)使per1基因表达量明显升高;经Exendin-4预处理后,per1基因的表达得到一定程度的恢复,差异具有统计学意义;(4)在CT16时各处理组细胞荧光强度值明显不同,与对照组相比,Aβ_(31-35)使细胞荧光强度明显增强;经Exendin-4预处理后,细胞荧光强度值明显降低,差异具有统计学意义,此结果与加入尼莫地平的结果类似。加入尼莫地平预处理后,检测各个CT时间per1基因表达变化,与Exendin-4预处理组得到的结果类似。结论:Exendin-4通过拮抗钙超载改善Aβ_(31-35)诱导的HT22海马神经细胞per1基因的异常表达。

生物钟PER1基因在口腔鳞癌中的昼夜节律变化及与体内肿瘤生长的关系

目的探讨生物钟PER1基因在口腔鳞癌中的昼夜节律变化情况和与肿瘤体内生长的关系。方法 60只裸鼠置于12 h光照和12 h黑暗交替环境中饲养3周后,将人颊鳞癌BcaCD885细胞接种于裸鼠颊部,建立口腔颊鳞癌模型。3周成瘤后,在24 h内按灯亮后4、10、16、22 h(4 HALO、10 HALO、16 HALO、22 HALO)的4个时间点分别处死15只裸鼠,取出肿瘤,称量,常规切片在HE染色下计算各时间点肿瘤的有丝分裂指数(MI);分别用S-P免疫组化、Western blot和Real-time RT-PCR检测各时间点癌细胞中PER1蛋白和mRNA的表达;分别用方差分析和余弦分析检验各指标在4个时间点的差异性和是否具有昼夜节律性。结果颊鳞癌细胞PER1蛋白、PER1 mRNA、肿瘤MI和肿瘤质量在昼夜不同时间点具有显著性差异(P<0.01),其变化波动具有昼夜节律性特征(P<0.05);肿瘤MI和肿瘤质量与PER1的表达水平呈反比关系,PER1 mRNA表达的峰值与肿瘤MI和质量的谷值均位于活动相的中期,而PER1 mRNA表达的谷值与肿瘤MI和质量的峰值均位于休息相中期。结论口腔鳞癌中PER1的表达、肿瘤MI和质量在昼夜不同时间点的波动具有24 h昼夜节律性规律,PER1在口腔鳞癌中为抑癌基因。

生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭迁移及与JAK2-STAT3通路相关蛋白表达的影响

目的:探讨生物钟基因Per1对鼻咽癌细胞CNE2侵袭转移及上皮-间质转化(EMT)的影响,并阐述其与JAK2-STAT3信号通路相关蛋白的关系。方法:实时荧光定量PCR法(qPCR)以及蛋白质印迹法(WB)检测CNE2细胞中Per1基因及蛋白水平;构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体并转染CNE2细胞;实验分为过表达组(Per1-OE)、过表达对照组(Per1-OENC)、干扰组(Per1-sh)、干扰对照组(Per1-shNC);利用划痕愈合、Transwell实验检测Per1基因对各组细胞侵袭、迁移能力;WB检测Per1基因对EMT相关蛋白:E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达的影响;WB检测Per1基因对JAK2-STAT3信号通路相关蛋白表达的影响。结果:WB和PCR结果显示:与人永生化鼻咽上皮细胞NP69相比,Per1在鼻咽癌细胞CNE2中表达降低。通过构建Per1基因过表达及干扰慢病毒载体,有效地上调和下调了CNE2中Per1在转录及蛋白水平的表达,并分别成功筛选出稳转细胞株。划痕实验结果显示:Per1-OE组较Per1-OENC组24 h、48 h细胞迁移率均明显下降(P=0.04,P=0.01),Per1-sh组较Per1-shNC组24 h、48 h细胞迁移率均明显升高(P=0.01,P=0.005)。Transwell实验结果显示:Per1-sh组较Per1-shNC组穿过Transwell小室细胞数明显增加(P=0.02),Per1-OE组较Per1-OENC组穿过Transwell小室细胞数明显减少(P=0.001)。WB结果显示:JAK2、p-JAK2、STAT3蛋白在各组细胞中表达无统计学差异(P>0.05)。Per1-sh组较Per1-shNC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达下降,E-cadherin表达升高(P<0.05),Per1-OE组较Per1-OENC组p-STAT3、N-cadherin、Vimentin的蛋白表达均升高,E-cadherin表达下降(P<0.05)。结论:过表达Per1基因后可抑制鼻咽癌细胞CNE2侵袭、迁移,使N-cadherin、Vimentin、p-STAT3蛋白表达下降,E-cadherin表达增加;干扰Per1基因后则相反,进而表明Per1基因在鼻咽癌细胞CNE2中可能扮演着抑癌基因的角色;同时我们推测Per1基因与p-STAT3的表达有一定的相关性,但其具体作用机制有待进一步研究。

per1,per2 3′UTR双荧光素酶报告基因重组质粒的构建

构建了包含目的片段小鼠节律基因per1,per2 3′UTR全长的重组质粒,为初步分析转录后可能调控per1,per2基因的miRNAs提供了有效手段。用反转录试剂盒将从小鼠肝脏组织提取的RNA反转录得到cDNA,以获得的cDNA为模板PCR扩增per1,per2 3′UTR全长,经回收纯化、酶切后将目的片段定向克隆到PGL3-promoter质粒上,再经转化扩增挑取克隆进行菌落PCR,对获得的阳性克隆进行酶切鉴定并测序。PCR产物鉴定结果表明,目的片段per1,per2 3′UTR序列扩增成功;菌落PCR及单酶切鉴定结果表明,per1,per2 3′UTR已插入PGL3-promoter载体中;测序结果表明,per1,per2 3′UTR插入序列,插入方向正确。per1,per2 3′UTR双荧光素酶报告基因重组质粒的成功构建为进一步研究节律基因转录后的调控机制奠定了基础。

生物钟基因PER1调控口腔鳞癌细胞中BAX、BCL2和PCNA表达的昼夜节律

目的探讨生物钟基因PER1对口腔鳞癌细胞(oral squamous cell carcinoma,OSCC)的增殖和凋亡及细胞内BAX、BCL2和PCNA表达昼夜节律的调控作用。方法建立稳转过表达PER1的口腔鳞癌SCC15细胞(OE-PER1-SCC15)和不含PER1基因序列慢病毒感染的阴性对照SCC15细胞(NC-SCC15);建立稳转沉默PER1的口腔鳞癌TSCCA细胞(RNAi-PER1-TSCCA)和不含PER1片段的scramble质粒慢病毒感染的阴性对照TSCCA细胞(Scramble-TSCCA)。通过流式细胞术、RT-qPCR和Western blot检测各组细胞中细胞增殖指数、凋亡指数及细胞内PER1、BAX、BCL2和PCNA在24 h内6个不同时间点的表达。对数据进行方差分析和余弦分析,以中值、振幅和峰值相位为指标分析各基因表达的昼夜节律特征。结果在OE-PER1-SCC15和NC-SCC15中,细胞增殖指数和凋亡指数及细胞内PER1、BAX、BCL2和PCNA mRNA和蛋白的表达具有昼夜节律性(P<0.05)。与NC-SCC15细胞相比,OE-PER1-SCC15细胞凋亡指数、PER1和BAX mRNA和蛋白表达的中值显著升高,而细胞增殖指数、BCL2和PCNA mRNA和蛋白表达的中值显著降低(P<0.05);细胞凋亡指数和BAX mRNA表达的振幅显著升高,而BCL2和PCNA mRNA表达的振幅显著降低(P<0.05);细胞凋亡指数、PER1和BAX mRNA和蛋白表达的峰值相位前移,而细胞增殖指数、BCL2和PCNA mRNA和蛋白表达的峰值相位后移。与Scramble-TSCCA细胞相比,RNAi-PER1-TSCCA细胞中BAX蛋白的表达发生昼夜节律紊乱,但细胞增殖指数、凋亡指数及细胞内PER1、BCL2和PCNA mRNA和蛋白以及BAX mRNA的表达具有昼夜节律(P<0.05),其昼夜节律特征与OE-PER1-SCC15细胞相反。结论PER1表达改变后导致其自身的昼夜节律特征发生改变,同时调控口腔鳞癌细胞增殖和凋亡及BAX、BCL2和PCNA表达的昼夜节律特征发生改变。

左旋精氨酸对AR42J细胞节律基因Per1表达的影响

目的:研究左旋精氨酸对大鼠胰腺腺泡细胞(AR42J)节律基因Per1表达的影响。方法:采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐诱导AR42J细胞节律基因表达。在Per1 RNA表达出现稳定近日节律后,设置实验组与对照组,实验组中加入含L-Arg培养液,对照组加入等量不含L-Arg培养液,采用RT-PCR法检测不同时间点AR42J细胞中Per1 RNA的表达水平。结果:RT-PCR结果显示加入L-Arg实验组的Per1 RNA表达量比对照组明显降低(P<0.05)。结论:L-Arg可引起胰腺腺泡细胞中的Per1 RNA表达降低,提示氨基酸可影响节律基因的表达。

过表达Gnb2l1基因对体外节律基因mPer1表达的影响

目的:评价过表达Gnb2l1基因对节律基因mPer1表达的影响。方法:用PMA刺激NIH3T3细胞,使节律基因稳定表达后,用脂质体介导方法将质粒pcDNA3.1/Gnb2l1转染至NIH3T3细胞,并以空载体质粒pcDNA3.1/vector为对照。利用RT-PCR技术检测不同时间点Gnb2l1 mPer1在NIH3T3细胞中的表达水平,研究过表达Gnb2l1基因对mPer1基因表达的影响。结果:采用RT-PCR技术显示成功转染,实验组比对照组Gnb2l1表达量明显增高(p<0.05)。并且发现实验组的mPer1表达量比对照组明显增高,但是经过余弦分析发现两组相比mPer1的表达周期无明显改变。结论:成功过表达Gnb2l1基因使节律基因mPer1表达量增加,中值增高(p=0.038)。

近日节律基因Per1对恶性肿瘤的侵袭、转移及凋亡影响的研究进展

近日节律基因是细胞中的一组能够通过自身表达和调控形成自激震荡产生近日节律变化的基因。这些基因能够维持和调控生物的许多生理生化活动,使其按照一定的周期性规律、有序地运行,从而更好地适应周围环境。Period1(Per1)基因是一种重要的近日节律基因,在近日节律系统中处于核心地位。研究表明,Per1的异常表达和节律改变与多种恶性肿瘤的发生发展高度相关,但机制尚未完全明确。本文将就Per1对恶性肿瘤的侵袭、转移、凋亡的影响及相关机制作一综述。

Per1与Per2基因在胆管癌中的表达

目的分析人类生物钟基因Per1与Per2在人类胆管癌中的表达,研究其表达与人类胆管癌的关系。方法获取人原发胆管癌标本58份,另取距离肿瘤边缘2 cm外组织作为正常对照。采用免疫组织化学方法检测人原发胆管癌标本与正常对照组织中Per1与Per2基因蛋白产物(Per1、Per2蛋白)的表达。结果 58份人原发胆管癌标本与正常对照组织中均见Per1与Per2蛋白表达,但胆管癌标本中Per1与Per2蛋白的表达较正常对照组织明显下降(P<0.05)。结论生物钟基因Per1与Per2蛋白可能与人类胆管癌的发生及发展有关。

毛尖紫萼藓1-半胱氨酸过氧化物酶基因GpPER1的克隆、表达载体构建及序列分析

从本实验室已成功构建的毛尖紫萼藓干旱cDNA文库中获得一条与抗旱相关的基因,即1-半胱氨酸过氧化物酶(1-Cys peroxiredoxins)基因,简称GpPER1,GenBank登录号为GU989314,该基因全长1040bp,开放阅读框(ORF)为666 bp,编码221个氨基酸。根据GpPER1基因的开放阅读框设计特异性引物,通过RT-PCR技术扩增得到GpPER1基因片段,并成功构建了表达载体pRI 101-GpPER1,为进一步在分子水平上研究毛尖紫萼藓的耐旱机制,发现并利用植物的抗逆基因奠定了基础。

hPer1相互作用蛋白的筛选

目的应用酵母双杂交系统筛选血液中与人体生物钟蛋白Per1相互作用的新蛋白。方法以人Per1的basicHLH-PAS结构域为诱饵,在人血液cDNA文库中筛选与之相互作用的新蛋白。阳性克隆送测序后用生物信息学分析。结果酵母双杂交文库营养缺陷筛选得到114个阳性克隆,β-半乳糖苷酶检测报告基因获得46个蓝色克隆。通过测序和生物信息学分析,其中之一能与Per1相互作用的蛋白为LSMD1。结论通过酵母双杂交系统证明Per1能够与LSMD1发生相互作用。

基于生物钟基因的胃癌预后风险评估模型的建立

目的分析影响胃癌患者预后的生物钟基因,建立基于生物钟基因的胃癌预后风险评估模型。方法下载NCBI中GSE62254数据集,筛选出298例胃癌患者样本。分析不同生物钟基因表达水平的胃癌患者总生存期(OS)的差异,筛选影响胃癌患者OS的关键生物钟基因,分析关键生物钟基因表达水平与胃癌临床病理参数的关系。在关键生物钟基因及性别、年龄、浸润深度、淋巴结转移、远处转移、腹膜转移等临床病理参数中筛选胃癌预后的独立影响因素,在此基础上构建胃癌预后风险(RS)评估模型,绘制RS评分预测胃癌预后的ROC曲线,计算曲线下面积和约登指数最大时的敏感度和特异度。结果生物种基因CLOCK、PER1、PER3、CRY2、NPAS2、RORA高表达的胃癌患者较低表达者OS更短,TIMELESS高表达的胃癌患者较低表达者OS更长(P均<0.05)。在生物钟基因中,PER1、CRY2和RORA是胃癌患者OS的独立危险因素;PER1高表达与低龄、浸润深度较深、TNM分期较晚、腹膜转移有关,CRY2高表达与浸润深度较深、TNM分期较晚、淋巴结转移、腹膜转移有关,RORA高表达与低龄、浸润深度较深、TNM分期较晚、淋巴结转移、远处转移、腹膜转移有关(P均<0.05)。多因素分析结果显示,淋巴结转移、远处转移、腹膜转移和PER1高表达是影响胃癌预后的独立危险因素(P均<0.05)。根据公式RS=0.692×淋巴结转移+0.747×远端转移+1.013×腹膜转移+0.638×PER1表达建立胃癌预后风险评估模型。RS评分预测胃癌预后的ROC曲线下面积为0.817,敏感度为0.642、特异度为0.899。结论生物钟基因PER1、CRY2、RORA与胃癌预后密切相关,基于PER1联合淋巴结转移、远端转移、腹膜转移等临床病理参数建立的胃癌预后风险评估模型具有较好的应用效能。

蝙蝠核心生物钟基因Per1昼夜表达节律与适应性进化研究

长期以来,生物钟相关研究一直是生命科学领域的热点话题。以往研究表明核心生物钟基因Per1广泛参与哺乳动物昼夜节律调控。然而,Per1基因在具有不同昼夜节律活动模式的哺乳动物中是否发生了遗传位点改变,以及这些改变是否促进了哺乳动物昼夜活动模式的形成和稳定仍有待研究。本研究通过荧光定量PCR、基因克隆测序与分子进化分析方法,对核心生物钟基因Per1开展了深入的分子进化分析,明确了Per1基因在夜行性蝙蝠脑区的昼夜振荡规律,由休息状态到睡眠状态对应着Per1基因表达量的由高到低,睡眠状态的表达量最低,而由觉醒状态到活动状态对应着Per1基因表达量的持续升高,与Per1基因维持中枢生物钟调控功能高度相关;检测到Per1基因序列上的15个潜在受正选择位点与2个显著受正选择位点,其中在夜行性动物中检测到的显著受正选择的1118A氨基酸位点恰好位于该基因编码蛋白的功能域上;通过滑窗分析结果显示,Per1基因在夜行性哺乳动物中的进化速率均普遍高于其在日行性哺乳动物中的进化速率,可能促进了哺乳动物夜行性活动模式的形成和稳定。本研究为深入理解哺乳动物自身稳态维持与适应环境周期性变化的关键分子基础提供新的认知,为生物钟相关研究提供思路和参考。

β-细辛醚对抑郁模型大鼠昼夜节律周期基因Per1表达的影响

目的:探讨β-细辛醚对抑郁模型大鼠昼夜节律周期基因Per1(period1)表达的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、阿戈美拉汀组(40 mg·kg-1·d-1)、β-细辛醚低剂量组(12.5 mg·kg-1·d-1)、β-细辛醚高剂量组(25 mg·kg-1·d-1)共5组,每组20只。通过28 d慢性不可预见性应激刺激复制大鼠抑郁模型,于给药前及造模后对大鼠进行敞箱实验与糖水偏爱度行为学评估,应用实时定量PCR和Western blot检测各组大鼠脑中昼夜节律基因Per的表达。结果:行为学检测结果显示,与空白对照组相比,模型组的水平活动次数和糖水偏爱度均显著减少;与模型组相比,3个给药组的水平活动次数和糖水偏爱度均显著增加。PCR和Western blot检测检测结果显示,与空白对照组比较,模型组昼夜节律基因Per1的mRNA与蛋白表达均明显增高(P<0.05),而与模型组相比,阿戈美拉汀组和β-细辛醚高低剂量组昼夜节律基因Per1的mRNA与蛋白表达水平明显低于模型组(P<0.05)。结论:β-细辛醚可能通过影响抑郁大鼠昼夜节律基因Per1的脑表达进而改善大鼠的抑郁状态。

鼻咽癌CNE2细胞生物钟基因Per1表达及其对生物学行为影响的研究

目的 研究Per1对鼻咽癌CNE2细胞增殖、凋亡、侵袭及细胞周期分布的影响,初步探讨Per1在鼻咽癌中可能扮演的角色。方法 通过实时荧光定量PCR法及蛋白质印迹法检测低分化鼻咽癌细胞CNE2及正常鼻咽上皮细胞NP69中核心生物钟基因Per1 mRNA及蛋白的表达;采用基因过表达及干扰技术将实验分为过表达组(Per1-oe)、过表达对照组(Per1-oeNC)、干扰组(Per1-shRNA-646)、干扰对照组(CNE2)和空载体组(control-shRNA);采用CCK8测定Per1-shRNA、control-shRNA和CNE2组细胞增殖能力;采用流式细胞仪分析Per1对CNE2细胞周期分布的影响;采用Transwell小室及细胞划痕实验验证过表达和低表达各组细胞的迁移及侵袭能力。结果 CNE2细胞Per1 mRNA表达量为0.002±0.001,低于NP69细胞的1.000±0.001,t=4771.56,P<0.05;CNE2细胞Per1蛋白表达为0.60±0.15,低于NP69细胞的0.90±0.26,t=4.267,P<0.05。流式细胞分析显示,CNE2、control-shRNA和Per1-shRNA组S期比例分别为(36.54±0.19)%、(36.18±0.69)%和(44.31±0.36)%(F=323.423,P<0.001),G期比例分别为(52.88±1.27)%、(53.72±0.51)%和(37.68±0.62)%(F=55.356,P<0.001),G/M期比例分别为(10.58±1.21)%、(10.10±0.88)%和(18.00±0.98)%,F=296.47,P<0.001。CCK8实验检测0~5 d的光密度值,CNE2、control-shRNA和Per1-shRNA组差异有统计学意义,F=10.63,P<0.001;两两比较显示,Per1-shRNA组高于CNE2和control-shRNA组,均P<0.05。细胞划痕实验显示,CNE2、control-shRNA和Per1-shRNA组24 h迁移率分别为(15.02±0.57)%、(14.46±1.08)%和(21.55±0.52)%,F=66.241,P<0.001;干扰Per1使细胞迁移率增高,Per1-oe组24 h迁移率(7.00±1.59)%低于Per1-oeNC组(14.00±2.36)%(t=3.394,P<0.05),Per1-oe组48 h迁移率(18.00±2.01)%低于Per1-oeNC组(25.00±3.04)%,t=4.292,P<0.05。Transwell实验显示,CNE-2、control-shRNA和Per1-shRNA组穿膜细胞数分别为64.00±1.73、62.00±2.08和90.00±1.00,F=256.447,P<0.001;Per1-oe组细胞数(109.00±3.10)低于Per1-oeNC组(168.00±2.00),t=6.804,P<0.05。结论 核心生物钟基因Per1在鼻咽癌细胞CNE2中可能扮演抑癌基因的角色,对癌细胞增殖甚至迁移、侵袭能力具有一定的抑制作用。

cAMP在Liraglutide改善Aβ25-35诱导的昼夜节律紊乱中的作用研究

目的研究环腺苷酸(cAMP)在利拉鲁肽(Liraglutide)改善β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)引起的昼夜节律紊乱中的作用。方法 C57BL/6小鼠随机分为Vehicle,Aβ25-35,Liraglutide,Liraglutide+Aβ25-35四组,利用跑轮行为学实验评估小鼠昼夜节律,ELISA法检测海马CA1区cAMP的表达水平。HT22小鼠海马神经细胞随机分为Vehicle,Aβ25-35,Liraglutide,Liraglutide+Aβ25-35,SQ22536+Liraglutide+Aβ25-35,SQ22536组,利用CCK8法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测per1 mRNA表达水平。结果海马内注射Aβ25-35后小鼠出现明显昼夜节律紊乱,且cAMP节律性表达异常,Liraglutide预处理明显改善了小鼠昼夜节律紊乱现象和cAMP节律性表达异常。HT22细胞中加入Aβ25-35后,细胞存活率下降且per1基因节律性表达异常,而Liraglutide预处理提高了细胞存活率并改善了per1表达异常,但这种效应会被cAMP抑制剂SQ22536所拮抗。结论 Liraglutide可拮抗Aβ25-35所致昼夜节律紊乱及per1基因的异常表达,其机制可能是通过改变cAMP节律性表达实现的。

细菌双杂交筛选肿瘤细胞中与人生物钟蛋白PER1相互作用的蛋白

目的筛选肿瘤细胞中与生物钟分子振荡系统的重要组成部分PERl蛋白（period circadian protein homolog1）相互作用的蛋白质分子，为生物钟基因在肿瘤发生发展过程中的功能研究提供条件。方法应用细菌双杂交技术与人宫颈癌Hela细胞cDNA文库，以pBT为载体，构建pBT-PERl融合表达诱饵质粒，与pTRG连接的人宫颈癌HeIa细胞cDNA文库质粒共转化双杂交系统报告菌株，利用培养基的特殊选择性，筛选出阳性克隆并测序分析。结果筛选出14个蛋白编码基因，其中4个包含完整的蛋白编码序列，包括与线粒体动力学相关的OPA3蛋白，与铜代谢相关的CUTA蛋白，与细胞运动、定位等细胞事件相关的蛋白，与物质合成、代谢等生物化学反应相关的蛋白，还有在信号转导中发挥作用的相关蛋白。结论肿瘤细胞中与PER1蛋白存在潜在相互作用新蛋白的筛选和鉴定为研究人生物钟基因PERI在肿瘤发生发展中的功能提供了条件。