生物钟基因Bmal1、Per2在血液肿瘤细胞株Raji、Hut-78、OCI-LY8及HL-60中的昼夜表达规律

目的通过检测生物钟基因Bmal1、Per2在血液肿瘤细胞株Raji、Hut-78、OCI-LY8及HL-60细胞中不同时间点的mRNA表达情况,探讨其与血液肿瘤发生发展的可能关系。方法血液肿瘤细胞株Raji、Hut-78、LY-8、HL-60经血清休克法诱导节律后,RT-PCR法检测生物钟基因Bmal1及Per2在不同时间点的mRNA转录水平,以时间为变量分别对其转录量进行余弦函数拟合,通过余弦函数预测基因转录高峰及低谷时段。结果Bmal1和Per2基因表达在OCI-LY8、Hut-78、HL-60细胞中呈现昼夜节律(P<0.05);Raji细胞内Bmal1基因无节律性表达(P>0.05),而Per2基因呈昼夜节律表达(P<0.05)。结论生物钟基因Per2和(或)Bmal1在多种血液肿瘤细胞株内呈昼夜节律性表达,其可能参与血液肿瘤的发生发展。

热应激对大鼠肝脏节律性基因Per2mRNA表达水平的影响

目的探讨急性热应激对大鼠节律基因Per2mRNA昼夜表达水平的影响。方法选用雄性Wistar大鼠,随机分为对照组和热暴露组。对照组:置于室温24℃环境中;热暴露组:环境温度为32℃,经7 d热暴露后,采用体温遥感技术监测大鼠体温变化,测定大鼠脑垂体与肾上腺的相对质量及肝脏Per2 mRNA昼夜的表达水平。结果急性热应激对大鼠体温和体质量无影响,但可增加大鼠脑垂体和肾上腺的相对质量,并可显著抑制节律基因Per2 mRNA在夜间的表达水平。结论急性热应激可干扰Per2 mRAN的昼夜节律性表达。

钟基因Per2和肿瘤相关钟控基因在金黄地鼠口腔颊黏膜癌变不同阶段的昼夜节律改变

目的探讨钟基因Per2和钟控基因血管内皮生长因子(VEGF)、Ki67、c-Myc和P53在颊黏膜癌变不同阶段的昼夜节律变化规律以及与癌变发生发展的关系。方法 90只叙利亚金黄地鼠置于12 h光照和12 h黑暗交替环境中饲养,用二甲基苯并蒽(DMBA)涂抹颊黏膜建立金黄地鼠颊癌模型,分别在DMBA涂抹前,涂抹6周和14周后的24 h内的6个不同时间点处死动物,获取正常颊黏膜、癌前病变和癌症3个不同阶段昼夜6个不同时间的组织。经病理学检查确认后,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测各时间点Per2、VEGF、Ki67、c-Myc和P53 m RNA的相对表达量,并行余弦分析,以中值、振幅和峰值位相时为指标反映各基因表达的昼夜节律特征。结果 Per2、VEGF、P53和c-Myc m RNA在癌变3个阶段的表达均具有昼夜节律性(P<0.05),而Ki67 m RNA仅在正常黏膜和癌前病变阶段的表达具有昼夜节律性(P<0.05)。Per2和P53 m RNA表达的中值随着癌症的发展而降低(P<0.05),VEGF、c-Myc和Ki67 m RNA表达的中值随着癌症的发展而上升(P<0.05);P53 m RNA的振幅随着癌症的发展而降低(P<0.05),Per2、VEGF、Ki67和c-Myc m RNA的振幅在癌前病变和癌症阶段均高于正常组(P<0.05);在癌前病变阶段,Per2、VEGF和c-Myc m RNA的峰值位相时较正常组提前,而Ki67和P53 m RNA的峰值位相时较正常组滞后。结论随着癌症的发生和发展,钟基因Per2和肿瘤相关钟控基因VEGF、Ki67、c-Myc、P53表达的昼夜节律特征发生明显改变。

Exendin-4改善Aβ31-35所致小鼠海马HT22神经细胞Per2节律基因/蛋白异常表达

目的探讨Exendin-4对β淀粉样蛋白31-35(Aβ31-35)所致HT22细胞Per2节律基因/蛋白表达的影响及机制。方法 HT22细胞分为Aβ31-35处理组(0,2.5,5.0,10.0μmol/L),Exendin-4单独处理组,Exendin-4预处理组,Exendin-4+Exendin(9-39)预处理组,Exendin-4+Exendin(9-39)处理组,Exendin(9-39)单独处理组,以完全培养基培养的细胞为对照组。光镜下观察HT22细胞形态,MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测Per2基因的表达,免疫荧光染色观察GLP-1R及PER2蛋白表达。结果 5,10μmol/L Aβ31-35处理后,细胞存活率较对照组显著降低(P<0.05)。Exendin-4预处理后,5μmol/L Aβ31-35引起的细胞形态结构的改变明显改善,细胞存活率显著提高(P<0.05)。Exendin-4预处理后,Per2基因/蛋白表达在CT(circadian time)16时较Aβ31-35处理显著提高(P<0.05);Exendin-4+Exendin(9-39)处理后,GLP-1R表达在CT16时较Exendin-4处理显著降低(P<0.05)。Exendin-4+Exendin(9-39)预处理后,CT16时PER2蛋白荧光强度较Exendin-4预处理显著降低(P<0.05)。结论Exendin-4可能通过上调GLP-1R,改善Aβ31-35所致HT22细胞Per2节律基因/蛋白异常表达。

Aβ25-35通过钙超载导致HT22神经细胞Per2异常表达

目的探讨钙超载在Aβ25-35引起HT22细胞Per2表达变化中的作用。方法体内研究将C57BL/6小鼠双侧海马注射Aβ25-35(300μmol/kg)和无菌水后,利用跑轮行为学实验评估小鼠的昼夜节律。体外研究将HT22细胞分为对照组、Aβ25-35处理组、Nim+Aβ25-35处理组。以MTT法检测细胞存活率,实时荧光定量PCR检测per2 mRNA表达水平,Western Blotting检测PER2蛋白相对表达量,免疫荧光染色观察PER2蛋白原位表达情况,流式细胞术检测胞内钙离子浓度。结果体内研究表明Aβ25-35导致C57BL/6小鼠在跑轮行为学实验中表现出明显的昼夜节律紊乱。离体研究发现,5、10、15、20、25、30μmol/L Aβ25-35剂量组细胞存活率较对照组显著降低(P<0.05)。经20μmol/L Aβ25-35处理后,per2 mRNA及PER2蛋白水平在CT16较对照组显著降低(P<0.05)。经钙离子拮抗剂尼莫地平预处理后,由Aβ25-35在CT16所致per2 mRNA及PER2蛋白水平的降低均显著升高(P<0.05)。结论钙超载在Aβ25-35引起HT22细胞Per2异常表达中发挥重要作用。

钟控基因PER1、PER2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:研究钟控基因PER1、PER2在乳腺癌中的表达,明确时钟基因表达在乳腺癌中的作用。方法:取60例乳腺癌患者癌组织和癌旁组织,分别用免疫组化办法检测PER1、PER2基因蛋白表达,与病理和临床结果进行统计学分析。结果:PER1、PER2基因在乳腺癌细胞和癌旁组织中阳性表达率有显著差异(P<0.01)。乳腺癌PER1蛋白表达和ER、PR、c-erb B2表达、组织分级有显著相关性,和年龄、肿瘤大小和分期无相关性。PER2表达和c-erb B2、组织分级有显著相关性,和年龄、ER、PR、肿瘤大小和分期无相关性。结论:钟控基因PER1、PER2表达缺失和乳腺癌发生有关,在乳腺癌发生过程中具有重要作用。

大鼠PER2基因RNAi慢病毒载体的构建及干扰效率的测定

目的构建及筛选有效干扰大鼠血管平滑肌细胞PER2基因的shRNA慢病毒载体,并测定其干扰效率。方法设计大鼠PER2的siRNA靶序列,插入慢病毒载体质粒pGLV-U6-EGFP中,构建pLentivirus-per2-rat表达重组体并转染至A7r5大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞内,利用Real-time PCR方法检测PER2基因的mRNA表达水平,筛选有效沉默钟基因PER2表达的RNAi慢病毒载体。结果经电泳、基因测序证实插入的目的序列正确,有PER2表达,成功构建了pLentivirus-per2-rat表达重组体;转染慢病毒载体pLentivirus-per2-rat至A7r5大鼠胸血管平滑肌细胞,测定转染效率达70%;Real-time PCR检测PER2基因的mRNA相对表达量,筛选出有效干扰大鼠血管平滑肌细胞钟基因Per2表达的siRNA片段,使PER2mRNA表达量下调约84%。结论成功构建了大鼠PER2的RNAi慢病毒载体,为进一步研究时钟基因的功能奠定了基础。

Per2对肝癌患者预后及肝癌细胞生长和凋亡的作用

目的探讨周期昼夜节律调节因子2(Per2)在肝细胞肝癌(HCC)组织中的表达和对患者生存的影响,分析Per2对肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法应用免疫组化法检测HCC组织和癌旁肝组织中Per2的表达;对肝癌细胞系SMMC-7721转染Per2真核表达质粒后,Western blot检测Per2蛋白表达,MTS法和流式细胞计量术检测细胞增殖和凋亡。结果 117例HCC组织中,Per2阳性表达率70.94%,显著低于对应癌旁肝组织的87.18%;癌组织中Per2染色评分为2.14±1.76,显著低于癌旁肝组织的6.39±3.84(P<0.01);Per2表达与HCC患者的肿瘤直径、门脉侵袭和TNM分期相关(P<0.05);Per2低表达的患者总体生存期(OS)和无复发生存期(RFS)较Per2高表达的患者短(P<0.05)。转染Per2真核表达质粒组细胞与对照组细胞相比细胞增殖显著受抑制(P<0.05),同时细胞凋亡水平显著增加(P<0.05)。结论 HCC组织中Per2表达显著下调,Per2对肝癌的进展发挥了抑制作用,可能是通过抑制细胞增殖和促进细胞凋亡实现。

新生大鼠脑损伤后松果体Clock mRNA、Per2 mRNA表达和血浆褪黑素水平变化

目的比较缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型组与对照组的新生大鼠松果体中Clock mRNA和Per2 mNRA表达与血浆褪黑素(MLT)的变化。方法7日龄新生Sprague-Dawley大鼠,随机分为2组(每组36只)。HIBD模型组按改良Levine法建立。用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和放免技术分别测定并比较缺氧缺血后0、2、12、24、36、48h松果体中Clock mRNA和Per2 mRNA的相对表达量和血浆MLT水平。结果HIBD组和对照组Clock mRNA表达量差异均无统计学意义(P>0.05);Per2mRNA的表达在HIBD后24h开始下降,在36h和48h显著低于对照组(P<0.01);HIBD导致外周血MLT水平12h开始下降,24h降至谷底,48h恢复。结论钟基因Clock mRNA和下降的Per2mRNA表达以及血浆MLT可能在缺氧缺血性脑损伤的发生发展中起重要的作用。

节律基因per2在慢性粒细胞白血病中的表达及与bcr/abl的相关性

目的探讨节律基因per2在慢性粒细胞白血病中的表达及其与白血病融合基因bcr/abl的关系。方法收集30例慢性粒细胞白血病病人和9例健康对照的骨髓标本,RT-PCR检测per2和bcr/abl融合基因的表达,并分析两者之间表达的关系;不同浓度甲磺酸伊马替尼作用K562细胞不同时间后,通过RT-PCR检测bcr/abl和per2水平变化。结果研究发现per2在慢性粒细胞白血病中表达降低,并且与bcr/abl的表达呈负相关。用甲磺酸伊马替尼处理K562发现,随着bcr/abl的表达降低,per2的表达升高。结论 per2在慢性粒细胞白血病中表达下降,并且和bcr/abl的表达呈负相关,提示per2在慢性粒细胞白血病的发生发展中发挥作用。

生物钟基因Per2与肿瘤

生物钟基因普遍存在于生物界,其作用在于产生和控制昼夜生物节律的运转。最新研究发现,生物钟系统不仅在昼夜生物节律方面起重要作用,而且参与机体其他功能的调节。该系统一旦失调可能引起一系列严重疾病发生,如淋巴瘤、白血病、乳腺癌和抑郁症等。就重要的生物钟基因Per2与肿瘤增殖凋亡的关系、Per2的抗肿瘤机制、及Per2在妇科肿瘤方面的研究近况做综述。

脑胶质瘤组织中Per1和Per2的表达及临床意义

目的探讨生物钟基因Per1和Per2在人脑胶质瘤细胞和周围正常脑组织中的表达特征。方法采用免疫组化方法检测33例在不同级别的脑胶质瘤和周围正常组织中,生物钟基因Per1和Per2蛋白的表达。结果Per1和Per2在正常脑组织中阳性表达率均为100%;Per1在胶质瘤组织中阳性表达率为84.85%(28/33),Per2在胶质瘤组织中阳性表达率为69.70%(23/33);Per1在胶质瘤Ⅰ-Ⅱ级表达强度高于Ⅲ-Ⅳ级,Per2在胶质瘤Ⅰ-Ⅱ级与Ⅲ-Ⅳ级的表达强度无明显差异。结论生物钟基因Per1和Per2在胶质瘤与正常脑组织存在着阳性表达,Per1表达强度与胶质瘤的恶性程度呈负相关系。

非小细胞肺癌中Per2的表达及其与预后的关系

目的:研究生物钟基因Per2在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与预后的关系。方法:采用免疫组织化学染色法检测60例NSCLC组织和20例正常肺组织中Per2的表达,结合临床病理和随访资料进行分析。结果:在NSCLC组织和正常肺组织中Per2的阳性表达率分别为71.7%(43/60)和95.0%(19/20),差异有统计学意义(P<0.05)。NSCLC中Per2的表达缺失与分化程度及TMN分期相关(P<0.05),单因素分析结果表明Per2的表达状态与NSCLC的预后相关(P<0.05),多因素分析结果显示分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况及Per2的表达状态均非影响NSCLC预后的独立危险因素(P>0.05)。结论:Per2在NSCLC中表达降低,其阴性表达在NSCLC的发生和发展中起重要作用,影响NSCLC的预后。

Per2和cyclin D1在非小细胞肺癌中的表达

目的研究生物钟基因Per2和细胞周期蛋白D1(cyclin D1)在非小细胞肺癌中的表达,探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学染色法检测60例非小细胞肺癌组织和20例正常肺组织中Per2和cyclin D1的表达并分析其表达与临床病理特征的关系。结果在非小细胞肺癌和正常肺组织中Per2的阳性表达率分别为71.7%和95.0%(P<0.05),而cyclin D1的阳性表达率分别为63.3%和15.0%(P<0.01)。非小细胞肺癌中Per2的表达缺失与分化程度及TMN分期相关(P<0.05),而cy-clin D1的阳性表达和TNM分期及淋巴结转移相关(P<0.05)。结论 Per2在非小细胞肺癌中表达降低,而cyclin D1则呈高表达,两者可以作为判断非小细胞肺癌发生、发展和预后的指标。

生物钟基因Per2在急性早幼粒细胞白血病中的表达

目的研究生物钟基因Per2在急性早幼粒细胞白血病(APL)中是否存在表达异常。方法实时定量PCR方法检测Per2在正常健康人,初发、复发以及长期存活APL患者的外周血单个核细胞中的表达水平。结果相对于正常健康人,初发及复发APL患者的Per2表达水平明显降低(P<0.05);相对于长期存活组APL患者,复发组APL患者的Per2表达水平明显降低(P<0.05)。结论生物钟基因Per2在APL患者中呈低表达,Per2在APL的发生、发展中可能起到重要作用。

Per2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的研究生物钟基因Per2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测60例非小细胞肺癌组织和20例正常肺组织中Per2的表达,分析Per2的表达与非小细胞肺癌临床病理特征之间的关系。结果在非小细胞肺癌和正常肺组织中,Per2蛋白的阳性表达率分别为71.7%和95.0%(P<0.05)。非小细胞肺癌中Per2的表达缺失与非小细胞肺癌分化程度及TMN分期相关(P<0.05)。结论在非小细胞肺癌中Per2蛋白表达降低,对非小细胞肺癌的发生、发展起到重要作用。

per2基因参与边缘系统昼夜节律的研究进展

各种生物体生理、生化和行为过程都呈现一定的昼夜节律变化,并受到生物钟的调控。per2基因是重要的生物钟基因之一,主要分布在下丘脑的视交叉上核以及中央杏仁核、终纹床核、海马等边缘系统结构,通过参与该系统昼夜节律的调节对情绪和内脏活动产生影响。中枢per2基因的节律性通过对光信号、类固醇激素及其他相关递质的整合调节下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴,作用于周围靶器官呈现昼夜节律性运动。本文对per2的形态学和生物学及其参与边缘系统对情绪、内脏活动昼夜节律调节机理做一概述。

节律基因Clock和Per2在高邮鸭不同组织中的表达分析

Clock和Per2为两个重要的节律基因,在调节昼夜节律中具有重要作用。为弄清节律基因Clock和Per2在鸭组织中的表达情况,本文采用荧光定量PCR的方法检测了Clock和Per2两基因在鸭下丘脑、垂体、卵巢、肾上腺、肝脏、胸肌、腿肌,以及不同大小的卵泡颗粒细胞中的表达情况。结果表明,Clock和Per2两基因在所检测的几种组织和卵泡颗粒细胞中均有表达,而且两基因在组织中表达量高低水平变化趋势一致。提示,Clock和Per2两基因可能共同调节鸭昼夜节律。本研究为鸭Clock和Per2基因研究奠定理论基础。

糖尿病对心肌时钟基因Bmal1/Per2昼夜表达影响的研究

目的探索糖尿病对心肌时钟基因Bmal1/Per2昼夜表达的影响。方法无特定病原体级健康成年雄性SD大鼠44只,依据随机数字法分为非糖尿病组和糖尿病组,其中非糖尿病组采用随机数字法分为授时时间(ZT) 23亚组11只、ZT11亚组11只,糖尿病组分为ZT23亚组11只、ZT11亚组11只。糖尿病组大鼠腹腔注射1%链脲佐菌素60 mg/kg制备大鼠糖尿病模型,待糖尿病模型成功后喂养4周;同时建立昼夜节律模型,给予大鼠12 h光照/12 h黑暗周期环境。苏木素-伊红(HE)染色观察时心肌组织形态学变化;免疫组织化学实验检测ZT23时心肌病理组织学改变及时钟蛋白Bmal1和Per2在心肌的表达情况; Western bloting法检测Bmal1和Per2在蛋白水平上的表达情况。结果与非糖尿病ZT23亚组相比,糖尿病ZT23亚组Per2表达增高,Bmal1表达下降(P <0. 05);与非糖尿病ZT11亚组相比,糖尿病ZT11亚组Per2、Bmal1表达降低(P <0. 05);与非糖尿病ZT23亚组相比,非糖尿病ZT11亚组Per2表达增高,Bmal1表达降低(P <0. 05);而与糖尿病ZT23亚组相比,糖尿病ZT11亚组Per2、Bmal1表达均降低(P <0. 05)。HE染色分析心肌组织结构发现,与非糖尿病组相比,糖尿病组心肌结构排列紊乱;免疫组织化学结果提示,糖尿病ZT23亚组心肌Bmal1、Per2呈阳性表达。结论糖尿病对心肌时钟基因Bmal1/Per2的昼夜表达产生影响,其可能是糖尿病心肌损伤的原因。