基于Percoll密度梯度法的轻老龄红细胞膜表面电荷的研究

红细胞衰老过程中膜表面电荷的变化情况与其结构功能密切相关。针对以往研究对轻老龄红细胞膜表面电荷的差异性不确定的问题,本文从不同的细胞分离方法分离轻老龄红细胞的效果不同的角度,通过比较分离出的轻老龄红细胞表面唾液酸的含量和细胞膜的弯曲弹性模量Kc值,提出高速离心法和Percoll密度梯度离心法分离出的轻老龄红细胞间的细胞年龄差距不同,Percoll法分离出的细胞年龄差距更大。利用Percoll密度梯度离心法,进一步分离出四种不同细胞年龄的红细胞,由红细胞表面唾液酸的含量和表面Zeta电位值检验轻老龄红细胞膜表面带电状态的差异性,结果显示,轻老龄红细胞的膜表面电荷存在明显差别,且随着细胞年龄的增长,红细胞的膜表面负电荷逐渐减少。研究结果对红细胞的衰老机制及体内清除老化红细胞的途径等研究具有重要意义。

Percoll密度梯度离心法分离中枢神经系统组织中的单个核细胞

目的建立快速分离小鼠中枢神经系统(CNS)组织中单个核细胞的方法。方法以正常C57BL/6小鼠、实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)和阿尔茨海默病(AD)模型小鼠为研究对象,通过70%~30%Percoll密度梯度离心法,获取小鼠脑组织和脊髓中单个核细胞,利用台盼蓝染色检测细胞存活率后,通过流式细胞术进一步分析细胞的表型特点。结果分离得到的单个核细胞存活率在90%以上;流式细胞术分析结果表明,EAE和AD小鼠中浸润到CNS的淋巴细胞群比例明显升高,且介导炎症反应的Th1和Th17细胞亚群比例明显升高,而具有免疫调节作用的Treg细胞亚群比例明显下降。结论采用70%~30%Percoll密度梯度离心法从小鼠CNS中分离的单个核细胞存活率高,细胞活性不受分离过程的影响,可进一步利用流式细胞术分析细胞的表型特征。此方法操作简单快速,适用于对CNS淋巴细胞等单个核细胞的分析。

不同条件下Percoll密度梯度离心分离组织细胞浮游生物的比较

目的实验评估不同条件下Percoll密度梯度离心分离组织中浮游生物的效果。方法大白兔肝组织匀浆后与3种藻类混合物混匀,分为混匀高速分离组、混匀低速分离组、叠加高速分离组、叠加低速分离组和未分离组(对照组)进行Percoll密度梯度离心分离浮游生物,镜检并提取其DNA,用PCR技术分别检测浮游生物16S rDNA和叶绿素基因特异性片段。结果混匀高速分离组有较多浮游生物呈分层条纹状分布于离心管中部,叠加高速分离组浮游生物紧邻组织细胞层下,低速分离组见较少浮游生物紧邻于组织细胞层之下,未分离组见浮游生物和组织细胞混杂沉于管底;经DNA检测,各分离组组织细胞层下液体均可检出浮游生物的1条447bp 16S rDNA片段及1条194bp叶绿体/叶绿素脱辅基蛋白基因片段,未分离组均未检出扩增产物且背景较深。结论混匀加样方式进行高速Percoll密度梯度离心,合并收集组织细胞层下所有液体,是分离浮游生物的最有效方法。

Percoll密度梯度离心分离牛精子初探

用2.9％柠檬酸钠将奶牛原精密度调到5×10~8/ml,取其3ml经26％Percoll洗涤(1700转,25分钟),置于pH7.0、渗透压300mmol/kg的9级Percoll梯度溶液上分离(1000转,15分钟)从第9层取得精子作去Percoll处理(2500转,20分钟),再用含甘油和卵黄的牛冷冻稀释液平衡滴冻,解冻后活力可达0.4左右。分离后精子的受胎率为52.2％(47/90),母犊率为44.2％(19/43),对照组母犊率为36.8％(21/57)。说明分离后精子可正常受胎,并有提高母犊率的趋势。

采用Percoll密度梯度及免疫磁珠法分离人骨髓巨核细胞

目的 探讨一简单、快速的获得高纯度骨髓巨核细胞的方法。方法 采用Percoll密度梯度法获取富集巨核细胞 ,采用抗血小板球蛋白Ⅱb Ⅲa单克隆抗体和免疫磁珠法获得进一步纯化的巨核细胞 ;用台盼蓝活性测定及Wright Giema染色及抗GpⅡb/Ⅲa组织化学染色确定。 结果 此法可获得的巨核细胞纯度达 90 %以上 ,结构完整 ,大约 5 0 %巨核细胞具有生物活性 ,可作短期培养。

用Percoll密度梯度离心一步法分离间日疟原虫

由于间日疟原虫至今尚不能作体外连续培养,实验材料只能取自患者的血液。一般间日疟患者的原虫血症较低,很难除去血液中大量的白细胞,从而给间日疟原虫的免疫学和分子生物学研究带来极大困难,我们以Percoll (Polyvinylpyrrolidone coatcd colloidal silica)为分离介质。

Percoll密度梯度离心法分离大鼠肺Ⅱ型上皮细胞

目的建立大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)的改良体外原代培养法。方法采用循环冲洗、支气管灌洗、胰蛋白酶消化、滤网过滤并用轻比重及重比重Percoll密度梯度离心,分离AT-Ⅱ。原代培养后通过碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)法和电镜鉴定AT-Ⅱ。结果经AKP染色和电镜鉴定所得的AT-Ⅱ纯度为(80.2±6.3)%,每只大鼠可分离出1×107AT-Ⅱ。结论采用Percoll密度梯度离心法能分离出较高纯度的AT-Ⅱ。

Percoll密度梯度离心处理对精子功能的影响

Ｐｅｒｃｏｌ密度梯度离心处理对精子功能的影响夏长所高家长张希香朱桂金为了进一步观察经Ｐｅｒｃｏｌ密度梯度离心（ＰｅｒｃｏｌｇｒａｄｉｅｎｔｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎＰ－Ｇ）处理对精子功能的影响，对处理后的精子不同时间的存活率，顶体完整率和体外受精能...

应用percoll密度梯度离心分离百合花粉的研究

以东方百合商业品种Viviana的花粉为材料,应用percoll密度梯度离心分离百合花粉,得到了4个分层,第1、2层花粉体积较小,第3、4层花粉较大,但每一层中都观察到了直径在150μm以上的球形花粉,1、2层数量较少,3、4层数量较多。离心后的花粉分别置于培养基上培养,观察到花粉萌发率较低。

用percoll密度梯度离心法快速分离提纯大鼠再生肝细胞

报导一种分离和纯化大鼠再生肝细胞的新方法——percoll密度梯度离心法。本方法快速稳定,而且便于提纯和体外培养,细胞成活力高。

Percoll密度梯度离心法对精子分选效果观察

运用简便而有效的方法对精子进行体外优选，是开展现代辅助生殖技术的基础工作之一。通过精子的优选，去掉精浆中的去获能因子，抗精子抗体活性氧化物（ＲＯＳ）、未成熟的精子细胞、白细胞和死亡的细胞，回收高质量的精子，并使之处于获能状况，是受精的基本要求。目前为...

简化Percoll密度梯度离心法快速纯化肝实质细胞

简化Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心法快速纯化肝实质细胞临床生化教研室徐勇，涂植光，康格非中图分类号我们采用胶原酶原位灌流法分离了大鼠肝细胞，经摸索用３５％（Ｖ／Ｖ）缓冲的Ｐｅｒｃｏｌｌ液对获得的肝细胞悬液进行密度梯度离心。在低速离心的条件下（１０００－１...

应用Percoll密度梯度分离法观察悬浮红细胞的保存效果

目的:应用Percoll密度梯度分离法观察悬浮红细胞的保存效果,为临床安全用血,提高临床输血疗效提供依据。方法:应用Percoll密度梯度分离法对枸橼酸盐-磷酸盐-葡萄糖-腺嘌呤(CPDA)保存液,对保存4、7、14、21 d的悬浮红细胞进行密度(胞龄)分离并对各种胞龄的细胞计数。结果:保存4、7和14 d的悬浮红细胞在Percoll法下可以分成4种胞龄的红细胞,红细胞数目中龄1(M1)>中龄2(M2)>青龄(Y)>老龄(O)。保存21 d的红细胞只能分成3层,没有青龄红细胞。结论:悬浮红细胞在保存14 d后其青龄的红细胞逐渐减少,剩下中、老龄的红细胞。

分离X精子的Percoll密度梯度离心法

Percoll密度梯度离心法 密度梯度离心法是一种分离不同密度(或不同形状、光滑度、软硬度或电荷等)颗粒的方法。它利用不与所分离颗粒起作用的介质配制成连续的或不连续的密度梯度,在分离管中自下而上由浓到稀地依次叠加,需分离的颗粒在这样的分离管中离心后,不同密度的颗粒各自停留在与其相应的密度层中,从而达到分离的目的。密度梯度离心法可用来分离不同的细胞、细胞器或病毒颗粒等,根据各自的分离目的,找出相应的密度梯度介质及其组成、离心速度、离心持续时间和作业温度等适宜参数后。

Percoll密度梯度离心法在血液组分分离及元素测定中的应用

目的探讨元素在大鼠血液经Percoll密度梯度离心法分离后的不同组分(全血、血浆、红细胞、外周血单个核细胞)中的分布特点。方法将SD大鼠随机分成对照组和不同剂量受试组,共9组。采用4种元素(Hg、I、Mn、Sr)的混合溶液气管滴注染毒,连续染毒10 d后股动脉取血。用Percoll液分离血液,分别收集血浆、红细胞、外周血单个核细胞(PBMC),并用电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS)测定全血及上述3种血液成分中4种染毒元素的含量。结果随染毒剂量增加,全血和血浆组分中的元素呈直线回归关系,红细胞与白细胞中部分元素含量与染毒剂量无线性回归关系。结论元素在血液的不同组分中的含量受呼吸道染毒的影响各不相同,利用Percoll密度梯度离心法选取合适的组分可以实现实验目的。

酵母同步细胞的Percoll连续密度梯度改良方法分离及其单细胞拉曼光谱鉴别

利用改良后的Percoll连续密度梯度分离方法,分离不同酵母菌株稳定期的同步细胞,并在单细胞水平上,应用激光光镊拉曼光谱对分离的同步细胞进行鉴别。采用高速离心机角式转头和2mL聚丙烯离心管,20℃,19 320g离心15min,将大约1.75mL Percoll溶液形成1.00～1.31g·mL^-1连续密度梯度;将样品均匀铺加在离心管连续密度梯度液顶层,20℃,400g离心60min,酵母分成明显的2层细胞带;微分干涉差显微镜（DIC）、相差显微镜以及同步生长曲线分析显示,下层酵母细胞以单个细胞为主,大小均匀、致密,折光性强,生长呈现阶梯式增长,具有同步细胞生长的特性,确定其为同步的G0细胞。利用单细胞光镊拉曼光谱系统对所分离的G0同步细胞与非G0细胞进行分析,结果显示G0同步细胞和非G0细胞的特征峰位置基本一致,但G0细胞对应的蛋白质、糖类、核酸等生物大分子特征峰强度大于非G0细胞,说明G0细胞大分子物质含量要比非G0细胞的高;对G0细胞和非G0细胞进行主成分分析,结果显示,分离的同步化G0细胞之间成分含量差异少,比较均一,而非同步细胞之间内含物质差异大,呈不均一性,说明单细胞光镊拉曼光谱系统可以鉴别同步和非同步细胞。改良后的Percoll连续密度梯度分离方法,能够分离多数酵母菌株同步化细胞,是一种易操作、成本低、效率高的细胞分离方法。

Percoll密度梯度离心技术分离纯化豚鼠表皮Langerhans细胞

表皮Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）仅占表皮细胞的２％～４％，但在免疫系统中占重要作用。为了对ＬＣ的表型、功能特点及分子生物学水平等作进一步研究，有必要获得高纯化率且具有活性的ＬＣ。我们采用连续、间断Ｐｅｒｃｏｌｌ密度梯度离心相结合的方法分离、纯化豚鼠表皮ＬＣ。结果表明ＬＣ纯化率超过６０％，产率超过８０％，细胞活性超过９０％。自体混合白细胞应答检测证实纯化的ＬＣ仍保持功能活性。该方法简单、快速、价廉，且获得非表面标记性的ＬＣ。

Percoll密度梯度离心精子优选技术在人类辅助生殖技术中的应用

运用简便而有效的方法对精子进行体外优选,是开展现代辅助生殖技术的基础工作之一。通过优选,去除死亡精子、无活力精子、白细胞及精浆成分,回收高质量的精子。迄今为止,已建立了许多精子优选技术,如精子游动法、玻璃纤维滤过法、血清蛋白滤过法等。而Percoll密度梯度离心法则是以二氧化硅胶体外表裹以聚乙烯吡咯烷酮为介质。