大鼠黄体细胞培养不同时间孕酮及酪氨酸浓度变化

本文测定了培养1～4小时的大鼠黄体细胞培养液中孕酮及酪氨酸含量。结果表明:hCG处理组。孕酮含量随培养时间延长而增加,第3小时含量最高,后基本稳定;酪氨酸含量也随培养时间延长而增加,第2小时含量最高,后趋于下降。对照组则无此变化。讨论了可能的变化关系。

表面培灌大鼠大小黄体细胞的研究

将制成的黄体细胞悬浮液,经蔗糖密度梯度离心分离大、小黄体细胞。分离后的大、小黄体细胞按4×10~6细胞/管的数目与预膨胀的Bio—Gel混合,分别装入培灌管内。结果表明,在表面培灌系统中,细胞存活情况良好,细胞内环境稳定,并具有稳定的分泌孕酮功能,因此认为,大、小黄体细胞表面培灌系统为研究黄体细胞的机能提供了一种有用的实验模型。

酪氨酸对表面灌流系统中大鼠离体大、小黄体细胞孕酮生成的影响

参照我室ＷａｎｇＸｉａｏ－Ｎｉｎｇ的黄体细胞制备方法，制成大鼠黄体细胞悬浮液，经蔗糖密度梯度离心分离大、小黄体细胞。经６０ｍｉｎ预培灌后，每１０ｍｉｎ收集一次培灌液，用ＲＩＡ测定其中孕酮含量。实验结果表明，在培灌系统中，大黄体细胞的基础孕酮分泌量明显高于小黄体细胞，但小黄体细胞对ｈＣＧ的敏感性强于大黄体细胞。不同剂量的酪氨酸对ｈＣＧ致大、小黄体细胞孕酮生成有不同程度的抑制，对小黄体细胞的抑制作用较为明显，大、小黄体细胞与３Ｈ－酪氨酸的结合能力也不同，小黄体细胞的结合能力明显高于大黄体细胞。

O-甲基酪氨酸对酪氨酸抑制hCG致大鼠离体黄体细胞孕酮生成的拮抗作用

用孕马血清促性腺激素和hCG处理未成年雌性大鼠,在hCG注射后7天取出黄体制成黄体细胞悬浮液,孵育后用放射免疫法测定孕酮含量。实验发现,酪氨酸结合的竞争性抑制剂O—甲基酪氨酸能够翻转酪氨酸抑制hCG的致孕酮生成作用,并与所用剂量有关,如果加大酪氨酸的剂量,则可克服O-甲基酪氨酸的翻转作用。由此提示,O-甲基酪氨酸是一种酪氨酸结合位点的拮抗剂,它通过阻断酪氨酸的结合来抑制酪氨酸的作用。

大鼠黄体细胞酪氨酸含量及hCG,cAMP和孕酮对含量的影响

经PMSG-hCG处理的未成年雌性大鼠卵巢,用胶原酶-DNA酶溶液消化,制成黄体细胞悬浮液。预培育1h后,加入不同浓度的hCG、cAMP及孕酮;并在加入hCG(10mIU/ml)、cAMP(2.5mmol/L)或孕酮(1nmol/L)的同时分别加入苯丙氨酸或放线菌酮,再培育1.5h,取细胞悬浮液400μl,用薄层层析扫描技术测其酪氨酸含量。结果:黄体细胞内有一定量内源酪氨酸,hCG,cAMP和孕酮均可明显促进酪氨酸的释放(P<0.05).苯丙氨酸对酪氨酸的含量无影响。酪氨酸释放也不依赖蛋白质合成过程。

酪氨酸对HCGC_a^(2+)致孕酮分泌影响的研究

通过表面灌流黄体细胞研究了酪氨酸对HCG、Ca^(2+)所致孕酮分泌的影响。结果表明,酪氨酸对HCG诱导的黄体细胞孕酮分泌有显著抑制效应,而对Ca^(2+)所致的孕酮分泌未能显示抑制作用。提示,酪氨酸主要通过CAMP系统而发挥作用。