鹅Perilipin基因部分片段的克隆、不同品种及填饲对组织mRNA表达水平的影响

本研究旨在克隆鹅围脂滴蛋白(Perilipin)基因,并探讨填饲对其在四川白鹅和朗德鹅肝脏中表达的影响,为从脂滴角度研究鹅肥肝分子机理提供依据。试验选取12只朗德鹅和12只四川白鹅为研究对象,通过RT-PCR方法扩增鹅Perilipin基因部分序列,采用实时定量技术研究了该基因在皮脂、腹脂、肝脏等10个组织中的表达情况,最后检测填饲后两品种鹅肝脏总脂质含量、甘油三酯(TG)水平、肝质量以及Perilipin基因表达变化。结果表明:获得的鹅Perilipin基因序列与原鸡的同源性最高,与哺乳动物的同源性也达到70%以上;从组织表达上看,该基因主要表达于腹脂和皮脂,而在其他组织几乎不表达;填饲引起鹅肝脏Perilipin mRNA表达丰度的极显著增加(P<0.01),且与肝质量、肝内TG和总脂质呈显著正相关;此外,填饲导致其在朗德鹅肝脏中的表达丰度显著高于四川白鹅(P<0.05)。结果提示:填饲会引起Perilipin mRNA在鹅肝脏中表达丰度的极显著增加(P<0.01),且其增加幅度存在着品种间差异(P<0.05)。

鸡前脂肪细胞中A-FABP基因表达的变化对PPARγ、perilipin和E-FABP表达的影响

本研究以鸡原代前脂肪细胞为实验材料,探讨A-FABP基因在鸡脂类代谢过程中的功能以及该基因与脂类代谢相关7个基因间的调控关系。利用A-FABP基因的shRNA干扰载体和真核表达载体对该基因进行干扰和过表达,分别在干扰和过表达后24、36、48、60和72h时检测脂类代谢相关基因的表达情况。结果表明,干扰A-FABP后,鸡前脂肪细胞中PPARγ和perilipin基因的表达量在24和36h时显著低于对照组,在48h时显著高于对照组,在48和72h时,E-FABP基因表达量显著低于对照组;过表达A-FABP后,鸡前脂肪细胞中PPARγ和perilipin基因的表达量在24和36h时显著高于对照组,在48h时显著低于对照组,在所有检测的时间点E-FABP基因表达均显著下调。结果显示,在前脂肪细胞中,鸡A-FABP表达量的变化影响PPARγ、perilipin和E-FABP的表达。

不同氟烷基因型猪脂肪组织中perilipin基因及糖皮质激素作用相关基因的表达

为研究脂滴包被蛋白(Perilipin)在猪脂肪组织中的表达分布情况及其与糖皮质激素作用的关系,选取氟烷基因隐性纯合子猪(Halnn)和氟烷基因显性纯合子猪(HalNN)为动物模型,采用半定量实时荧光PCR(rqRT-PCR)技术分析其背脂和肾周脂中perilipin基因及脂肪代谢和糖皮质激素作用相关基因的表达。结果显示:两种氟烷基因型猪的体重、背膘厚和背膘指数无显著差异,但Halnn肾周脂重(P=0.09)和肾周脂指数(P=0.10)有低于HalNN猪的趋势。双因子方差分析结果表明Halnn猪脂肪组织中perilipin mRNA水平显著高于HalNN猪(P<0.05),而糖皮质激素受体基因(GR)表达水平显著低于HalNN猪(P<0.05),11β-羟基类固醇脱氢酶1基因(11β-HSD1)、脂肪酸合成酶基因(FAS)和激素敏感酯酶基因(HSL)表达水平在两种基因型之间无显著差异。背脂中perilipin和GR的表达水平与肾周脂中的无显著差异,背脂中11β-HSD1和FAS表达水平显著高于肾周脂(P<0.05),而HSL在背脂中的表达情况正好相反(P<0.05)。以上结果提示:HalNN与Halnn猪脂肪组织中perilipin基因表达存在显著差异,且这种差异可能与GR有关;背脂和肾周脂的脂肪代谢模式可能存在差异。

Perilipin基因在羊不同肌肉组织中的表达研究

旨在了解脂滴包被蛋白基因(perilipin)在羊不同肌肉组织中的表达特征,为阐明脂滴包被蛋白(perilipin)对脂肪沉积的调控作用提供科学依据。以苏尼特羊、小尾寒羊为研究对象,选取背最长肌、肋间肌、股二头肌、股四头肌为试验材料,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)研究perilipin基因的表达情况。结果表明,perilipin基因在苏尼特羊和小尾寒羊4种肌肉组织中均有表达;perilipin基因在苏尼特羊与小尾寒羊肌肉组织中的总体表达量没有显著差异;除肋间肌外,苏尼特羊的背最长肌、股二头肌perilipin基因的相对表达量均高于小尾寒羊,股四头肌二者基本一致;苏尼特羊背最长肌相对表达量最高,股四头肌次之,肋间肌相对表达量最小,背最长肌与肋间肌差异显著(P<0.05);小尾寒羊肋间肌相对表达量最高,背最长肌和股四头肌表达量基本一致,股二头肌相对表达量最小,肋间肌与股二头肌差异显著(P<0.05)。该研究为阐明perilipin基因在脂肪沉积和分解中的重要作用及羊肉肌内脂肪沉积调控机理提供了理论依据。

衰老雄性大鼠雄激素缺乏与睾丸间质细胞中Perilipin基因表达间关系的研究

目的 探讨Perilipin基因差异表达与雄激素缺乏之间的关系.方法 采用D-半乳糖注射的方法建立大鼠亚急性衰老雄激素缺乏动物模型,检测血清总睾酮（TT）、超氧化物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平判断造模成功,采用Percoll非连续密度梯度离心法分离睾丸间质细胞（Leydig）,原代培养72h后提取大鼠Leydig细胞总RNA,基因芯片筛选差异表达基因,最后半定量RT-PCR验证芯片结果.结果 与对照组比较,模型组（低剂量组和高剂量组）血清TT浓度、SOD活力下降,MDA含量升高,差异有统计学意义；基因芯片结果显示,脂类代谢途径与雄激素缺乏最为相关,差异表达基因分别为Perilipin,Fabp4,Mgll;半定量RT-PCR结果发现,Perilipin基因及其两个亚型表达显著下调.结论 在RNA水平Perilipin基因表达与雄激素缺乏可能有关.

Plin基因11482 G/A单核苷酸多态性与汉族肥胖青少年有氧锻炼前后BMI变化关系

目的:探讨Plin基因11482 G/A位点单核苷酸多态性(SNPs)与汉族肥胖青少年有氧锻炼前后体质指数(BMI)变化的关系。方法:对28名汉族肥胖青少年进行9个月运动干预。受试者在干预前和干预后分别进行体格检查和空腹血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、血糖、胰岛素等生化指标测定。通过PCR扩增及基因测序仪测定所有受试对象DNA中Plin基因11482位点基因型。结果:运动干预后,受试者BMI、总胆固醇、甘油三酯、血糖和胰岛素水平显著下降(P<0.05),胰岛素敏感指数显著提高(P<0.05)。运动干预后Plin基因11482 G/A各基因型人群BMI变化有显著性差异(P<0.01),A基因表型(包括GA基因型及AA基因型)人群的BMI下降幅度显著大于GG基因型人群(P<0.01)。结论:运动干预能够降低汉族肥胖青少年的肥胖程度,改善糖脂代谢。Plin基因11482G/A位点SNPs可能影响肥胖青少年运动减肥的效果。

脂滴包被蛋白基因反义RNA对人脂肪肉瘤细胞SW872增殖活性的影响

目的观察脂滴包被蛋白(perilipin)基因反义RNA对人脂肪肉瘤细胞SW872增殖能力的影响。方法将含perilipin基因反义cDNA序列的pcDNA3.1-perilipin(-)质粒及pcDNA3.1空载体质粒转染入人脂肪肉瘤SW872细胞,分别命名为SW872-A组和SW872-E组;未转染的瘤细胞为空白对照(SW872-wt组)。用逆转录聚合酶链反应法和链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物免疫组织化学方法检测perilipin反义基因及perilipin蛋白表达。用噻唑蓝还原法检测SW872细胞增殖活性;用流式细胞术检测细胞凋亡和增殖周期分布。将转基因SW872脂肪肉瘤细胞接种于balb/c裸鼠后肢皮下,4周后观察成瘤情况。结果 SW872-E组和SW872-wt组细胞perilipin mRNA表达明显高于SW872-A组;SW872-A组perilipin阳性细胞数较另2组明显减少。SW872-A组细胞在第1～6天增殖能力逐渐增加,与SW872-E组和SW872-wt组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。SW872-A组S期和G_2/M期细胞比例明显大于SW872-E组和SW872-wt组[(39±4)%比(19±5)%、(20±3)%,(40±4)%比(20±3)%、(21±3)%],差异均有统计学意义(均P<0.05)。SW872-A组裸鼠皮下移植瘤的成瘤时间明显短于SW872-E组和SW872-wt组[(5.3±2.6)d比(10.3±2.2)、(11.2±2.7)d];接种后28 d,SW872-A组瘤体重量明显大于SW872-E组和SW872-wt组[(3.87±0.46)g比(1.62±0.73)、(1.83±0.24)g],差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 perilipin基因反义RNA可抑制SW872脂肪肉瘤细胞中脂滴包被蛋白的表达,促进裸鼠体内肿瘤生长。

耐力训练对大鼠骨骼肌比较基因组学鉴定蛋白-58,脂滴包被蛋白基因表达的影响

目的:研究不同强度耐力训练对大鼠骨骼肌比较基因组学鉴定蛋白-58(CGI-58)基因和脂滴包被蛋白(perilipin)基因的表达,分析其变化规律,为运动时维持机体能量的动态平衡和代谢健康提供理论依据。方法:选用SD雄性大鼠48只,随机分为4组,每组12只,即安静对照组(N组);低强度耐力组(L组);中等强度耐力组(M组);大强度耐力组(H组)。运动负荷采用Bedford设定的大鼠运动强度等级,大鼠在跑台上进行不同坡度的递增负荷耐力训练;5周耐力训练结束后,宰杀大鼠。通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)测定腓肠肌、比目鱼肌CGI-58基因和perilipin基因表达。结果:在腓肠肌组织中,CGI-58基因的表达随着运动强度的增加出现上升的趋势,其中在H组CGI-58表达达到最大并且高于U组(P<0.01),其次是M组和L组。在比目鱼肌组织中,各组大鼠CGI-58基因的表达为:L组、M组和H组的表达都高于N组,其中在M组时表达最强并且高于U组和H组(P<0.05)。在相同训练方式下,H组腓肠肌CGI-58 mRNA表达高于比目鱼肌(P<0.01)。在腓肠肌组织中,perilipin基因的表达随着运动强度的增加出现上升的趋势,在H组表达达到最大并且高于U组和L组(P<0.01),其次是M组。在比目鱼肌组织中,L组、M组和H组的perilipin基因表达都高于N组,在M组和H组均高于N组(P<0.05)。腓肠肌和比目鱼肌在相同训练方式下,两种肌肉perilipin mRNA表达差异也不明显(P>0.05)。结论:5周不同强度的耐力训练可以诱发大鼠骨骼肌CGI-58基因和perilipin基因发生差异表达,表明CGI-58基因和perilipin基因在不同强度的耐力训练下参与了不同程度的脂肪水解调控。

鸡肝细胞中L-BABP基因表达对脂类代谢基因及甘油三酯和总胆固醇的影响

本研究以鸡原代肝细胞为试验材料,探讨鸡L-BABP基因对脂类代谢相关基因及生化指标(总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白和高密脂蛋白)的影响。利用RNAi和过表达技术下调和上调该基因的表达,分别在干扰和过表达24、36、48、60和72h时检测鸡肝细胞中脂类代谢相关基因的表达量变化及细胞培养基中脂类代谢相关生化指标的变化。结果显示,鸡L-BABP基因表达量的变化显著或极显著影响APOB、APOAΙ和PERILIPIN基因表达,且显著地改变细胞培养基中的甘油三酯和总胆固醇的含量。基于以上结果,本研究推测鸡肝细胞中LBABP基因可能参与禽类脂肪沉积、总胆固醇代谢和脂解过程。

脂滴包被蛋白基因对猪肌肉发育的影响

PLIN(perilipin,脂滴包被蛋白)是脂滴表面含量最多的一种蛋白,被认为是影响猪生长、胴体及肉质性状的重要候选基因。PLIN基因几乎在所有组织中均有广泛表达,对脂肪组织中甘油三酯的分解和储存具有重要的双重调控作用,主要调控类固醇激素合成前体、胆固醇酯的分解;通过调节脂肪酶的功能和脂肪沉积来影响肌肉的生长发育并能影响高氧化能力组织内的线粒体功能。本文综述了猪PLIN基因背景、基因结构及组织分布情况,并对近年来PLIN基因对猪肌肉发育影响的研究进行了总结,解析其在骨骼肌发育差异调控网络中的地位和作用,为家猪生产性状改良提供理论依据。

鹅脂滴包被蛋白PLIN基因的全长cDNA克隆及组织表达分析

脂滴包被蛋白(perilipin, PLIN)是脂滴相关蛋白家族(PAT)中的成员,定位于脂滴表面.该蛋白对脂肪细胞的脂质代谢有重要的调控作用.本研究通过RT-PCR和RACE的方法,从太湖鹅脂肪组织总RNA中扩增出PLIN基因的全长cDNA,测序得到其长度为2 267 bp,其中包括长度为1 584 bp的CDS区,共编码527个氨基酸残基.利用DNAMAN软件将该序列与其他物种的PLIN基因的同源性比较,结果发现鹅PLIN与鸭的同源性最高,达到96.42%,与人的同源性最低,为58.44%.利用MEGA 7.0软件构建基于PLIN基因cDNA序列的系统进化树,显示出PLIN基因的高度保守性.用荧光定量PCR分析其在鹅脂肪、胸肌、腺胃、脑、肾、腿肌、脾、心脏、肺、肌胃、肝实验结果为进一步分析该基因对鹅脂肪性状的作用奠定了基础.

家蚕脂围蛋白(PLIN)基因的序列分析及表达与亚细胞定位研究

脂围蛋白(perilipin)与脂肪细胞脂类代谢的调节有关。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条cDNA开放阅读框(ORF)序列长度为918 bp的基因,预测其编码305个氨基酸残基,蛋白分子质量约32.5 kD。经NCBI比对发现该蛋白具有部分脂围蛋白的保守结构域,因此将该ORF序列命名为BmPLIN基因。将该基因插入到载体pET-28a(+)的多克隆位点,构建重组表达质粒pET-28a(+)-BmPLIN,并转化大肠杆菌中进行原核表达得到带有His标签的融合蛋白,表达的融合蛋白以包涵体形式存在。用纯化后的融合蛋白为抗原免疫大白兔获得多克隆抗体,ELISA间接法测定抗体的效价达到1∶12 800以上。通过荧光定量PCR和Western blotting技术对BmPLIN基因及其编码蛋白在家蚕5龄幼虫各个组织器官中的转录、表达水平进行分析的结果是:BmPLIN基因mRNA在家蚕5龄幼虫各组织器官中的转录水平由高到低依次为生殖腺(卵巢和睾丸)、脂肪体、肠、表皮、头部、马氏管、丝腺、气门,在家蚕5龄幼虫的生殖腺(卵巢和睾丸)中有明显的BmPLIN蛋白特异条带。以家蚕Bm5细胞进行免疫细胞实验的结果显示,BmPLIN蛋白在细胞质和细胞核中均有分布。

杨梅素联合围脂滴蛋白基因沉默促进前脂肪细胞系3T3-L1的降脂

目的探讨杨梅素(Myric)与围脂滴蛋白(PLIN1)基因沉默对3T3-L1脂肪细胞脂解通路的影响。方法采用经典"鸡尾酒"方法诱导分化3T3-L1前脂肪细胞,筛选出杨梅素最佳干预浓度和时间。杨梅素联合sh-PLIN1干扰载体对成熟的脂肪细胞进行干预,实验共分为4组:对照组(control group)、转染组(sh-RNA group)、杨梅素组(Myric group)和联合干预组(Myric+sh-RNA group)。油红O染色脂滴,观察脂滴形态;Western blot检测细胞中ERK、p-ERK、MEK、p-MEK和激素敏感性脂肪酶磷酸化蛋白(p-HSL)的表达;ELISA测定细胞中环磷酸腺苷(cAMP)、蛋白激酶A(PKA)和磷酸化的蛋白激酶C(p-PKC)的含量。结果与Myric组和sh-RNA组相比,Myric+sh-RNA组脂滴形态变小,数量明显减少。与sh-RNA组和对照组相比,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内p-PKC含量、p-ERK/ERK和p-MEK/MEK的比值以及p-HSL表达显著升高(P<0.05)。同时,Myric+sh-RNA组和Myric组细胞内cAMP和PKA含量低于sh-RNA组和对照组(P<0.05)。结论杨梅素的促脂解作用可能是通过激活PKCMEK/ERK信号通路,增加该通路中p-HSL的表达量来实现的;杨梅素同时可能对cAMP/PKA信号通路中相关因子的活性有一定的抑制作用。