肺挫伤后肺部细菌感染者血清炎症因子与外周血T细胞亚群的变化

目的探索肺挫伤后肺部细菌感染者血清炎症因子与外周血T细胞亚群的变化。方法选取2015年7月—2018年7月于我中心接受治疗的104例肺挫伤患者为研究对象,根据治疗中是否出现细菌感染性肺炎分为感染组(n=42)和非感染组(n=62)。检测并比较2组患者治疗前后的血清炎症因子和外周血T细胞亚群水平。结果与非感染组相比,感染组治疗前的血清降钙素原、C反应蛋白和IL-6水平均升高,CD3+、CD4+T细胞百分比以及CD4+/CD8+T细胞比值均降低(P均<0.05)。与治疗前相比,2组治疗后的血清降钙素原、C反应蛋白和IL-6水平均降低,感染组治疗后各指标下降幅度均大于非感染组(P均<0.05)。与治疗前相比,感染组治疗后的CD3+、CD4+T细胞百分比以及CD4+/CD8+T细胞比值均升高,非感染组治疗后的CD3+T细胞百分比、CD4+/CD8+T细胞比值均升高,CD8+T细胞百分比降低(P均<0.05),感染组治疗后CD3+、CD4+T细胞百分比以及CD4+/CD8+T细胞比值上升幅度均大于非感染组(P均<0.05)。结论肺挫伤合并肺部细菌感染者的炎症因子水平较高,炎症反应较为强烈,外周血T细胞亚群水平显著降低,患者的免疫力受到了严重损害,临床诊疗应予以高度关注。

腹部推拿对运动性疲劳大鼠外周血单个核细胞能量代谢及炎性反应相关因子的影响

目的观察腹部推拿对运动性疲劳(exercise-induced fatigue,EF)大鼠外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)能量代谢及炎性反应相关因子的影响,探讨腹部推拿改善运动性免疫炎性抑制的分子机制。方法Wistar大鼠30只,适应性跑台训练后随机取出8只作为空白组,剩余大鼠运用改进的递增跑台有氧力竭运动法进行造模。最终造模成功16只大鼠,将其随机分为模型组及推拿组,每组8只。空白对照组常规喂养,不做任何处理;模型组常规喂养,每日力竭运动后于笼中休息;推拿组常规喂养,每日力竭运动后予推拿干预1次,连续21天。末次干预后,取大鼠外周血检测EF相关指标:血乳酸(lactate acid,Lac)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)及肌酸激酶(creatine kinase,CK)。同时运用蛋白免疫印迹法测定大鼠腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activited protein kinase,AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(pAMPK)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)、半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的表达水平。结果(1)与空白组比较,模型组EF相关代谢产物Lac、BUN及CK水平均显著升高(P<0.01);与模型组比较,推拿组Lac、BUN及CK水平均显著下降(P<0.05,P<0.01)。(2)与空白组比较,模型组pAMPK/AMPK比值及PGC-1α蛋白表达水平显著降低(P<0.01),caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01),炎性因子TNF-α及IL-1β蛋白表达水平显著上调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,推拿组pAMPK/AMPK比值及PGC-1α蛋白表达水平显著升高(P<0.05,P<0.01),caspase-3蛋白表达水平出现下降趋势,TNF-α及IL-1β蛋白表达水平显著下调(P<0.05,P<0.01)。结论腹部推拿可显著降低EF大鼠外周血疲劳相关代谢产物Lac、BUN、CK水平,并通过调节能量代谢及线粒体功能关键信号链AMPK/PGC-1α,同时降低PBMCs内炎性因子TNF-α及IL-1β水平,部分揭示了推拿可减轻EF大鼠PBMCs凋亡,恢复运动性免疫抑制,改善EF的分子机制。

外周血免疫炎症细胞与肝细胞癌预后的关系

目的探讨肝细胞癌患者术前外周血免疫炎症细胞和临床病理特征及预后的关系。方法回顾性分析2010年1月~2013年12月在安徽医科大学第一附属医院普外科接受根治性切除手术的113例患者的临床病理资料,根据患者术前外周血中性粒细胞、淋巴细胞及血小板,计算中性粒细胞与淋巴细胞比值(Neutrophil-to-lymphocyte ratio, NLR)、血小板与淋巴细胞比值(platelet-to-lymphocyte ratio, PLR),采用Kaplan-Meier生存曲线和Cox比例风险模型探索术前外周血炎症免疫细胞对肝细胞癌患者预后的影响。结果外周血淋巴细胞数与患者AFP相关(P=0.022),与余临床病理因素之间差异均无统计学意义(P>0.05)。血中性粒细胞、血小板、NLR及PLR亦与各个临床病理因素之间均无明显相关(P>0.05)。生存分析发现,淋巴细胞高值组和低值组之间总体生存期差异有统计学意义(P=0.005)。其中单因素生存分析显示:患者AFP值、血管侵犯、肿瘤最大直径、肿瘤数目及巴塞罗那分期是影响患者预后的危险因素。将各临床病理因素纳入多因素COX风险比例函数模型分析,结果显示:淋巴细胞(HR=0.576, 95%CI:0.343~0.967)是肝细胞癌患者预后的独立危险因素(P=0.037)。结论术前外周血淋巴细胞数值高值组肝细胞癌患者术后总体生存率较低值组高,预后较好。

补肾通络方对腰椎间盘突出症患者疗效及外周血免疫细胞平衡的影响

【目的】探究补肾通络方对腰椎间盘突出症(LDH)肾虚血瘀证患者的疗效及外周血免疫细胞平衡的影响。【方法】将72例LDH肾虚血瘀证患者随机分为观察组和对照组,每组各36例。对照组给予腰椎牵引治疗,观察组在对照组的基础上加用补肾通络方治疗,疗程为4周。观察2组患者治疗前后疼痛视觉模拟量表(VAS)评分、日本骨科协会(JOA)腰椎功能评分、外周血炎症相关因子及T淋巴细胞亚群的变化情况,并评价2组患者的临床疗效。【结果】(1)治疗4周后,观察组的总有效率为88.89%(32/36),对照组为66.67%(24/36),组间比较,观察组的疗效明显优于对照组(P<0.05)。(2)治疗后,2组患者的JOA评分均较治疗前明显升高(P<0.05),VAS评分均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对JOA评分的升高作用和对VAS评分的降低作用均明显优于对照组(P<0.05)。(3)治疗后,2组患者外周血肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)水平均较治疗前明显降低(P<0.05),白细胞介素10(IL-10)水平均较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组对TNF-α、IL-6水平的降低作用和对IL-10水平的升高作用均明显优于对照组(P<0.05)。(4)治疗后,2组患者外周血T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平均较治疗前明显下降(P<0.05),CD8^(+)水平均较治疗前略有升高,但差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后组间比较,观察组对外周血T淋巴细胞亚群CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平的下降作用均明显优于对照组(P<0.05)。【结论】补肾通络方对LDH肾虚血瘀证患者疗效显著,可有效促进机体免疫平衡,降低患者机体炎症反应,提高患者机体免疫力。

基于吉西他滨联合顺铂化疗方案分析参一胶囊对晚期非小细胞肺癌患者的疗效

目的:探究参一胶囊联合吉西他滨联合顺铂(gemcitabine plus cisplatin,GP)化疗方案对晚期非小细胞肺癌(non-small-cell lung carcinoma,NSCLC)患者免疫功能、炎症状态、外周血象的影响,以期为其临床应用提供研究依据。方法:选择2016年10月至2018年10月在我院就诊的80例晚期NSCLC患者为研究对象,采用随机数字表法将其分为观察组和对照组各40例,对照组采用吉西他滨联合顺铂(gemcitabine combined with cisplatin,GP方案)进行化疗,观察组在对照组基础上联合参一胶囊口服治疗,比较2组的临床疗效、免疫功能指标(T淋巴细胞亚群CD3^+、CD4^+、CD8^+及CD4^+/CD8^+值)、炎症因子[肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α、白细胞介素(interleukin,IL)-6及IL-10]水平及外周血象异常发生率。结果:观察组有效率、疾病控制率均明显高于对照组,治疗后2组患者CD3^+、CD4^+、CD8^+水平及CD4^+/CD8^+值均明显低于治疗前,但观察组CD3^+、CD4^+、CD8^+水平及CD4^+/CD8^+值明显高于对照组,治疗后对照组TNF-α、IL-6水平明显高于观察组,IL-10水平明显低于观察组,2组患者白细胞、血小板、血红蛋白下降发生率比较差异有统计学意义。结论:参一胶囊联合GP化疗对晚期NSCLC患者具有较好的疗效,该联合疗法不仅可以提高患者免疫功能,改善机体炎症状态,还可缓解外周血象异常,具有较好的安全性。

基于DIA LC-MS对脓毒症患者外周血差异蛋白的研究分析

目的基于数据非依赖性采集高分辨率色谱-质谱技术(DIA LC-MS)对脓毒症患者外周血差异蛋白进行研究分析,为患者临床治疗提供参考。方法选择南方医科大学南海医院以及中山大学附属第五医院2018年8月至2019年8月重症监护室收治的60例脓毒症患者作为观察组,同时选取上述两所医院同一时期重症监护室收治的非脓毒症患者作为对照组,采用DIA LC-MS对患者外周血差异蛋白进行研究,采用主成分分析法(PCA)、偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)以及正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)进行模式识别,确定差异蛋白后进行通路分析以及GO分析,利用PLS-DA模型变量的重要性投影(VIP值)筛选可能的蛋白标志物,同时对贡献最大的蛋白进行ELISA验证以及ROC曲线分析。结果两组患者共获得530391个碎片离子,63378个肽段,7104个蛋白;60个DIA标本采用Skyline共筛选鉴定得到147363个碎片离子,21840个肽段,6213个蛋白。将碎片离子加和,共得到357个差异蛋白,其中93个高表达,264个低表达。对这357个差异蛋白进行GO分析显示,富集最多的细胞组分是细胞外泌体、细胞膜以及细胞质;受体介导内吞、细胞黏附反应以及血小板脱颗粒可能与脓毒症的发展密切相关;在对这些差异蛋白进行KEGG分析后显示,细菌侵袭上皮细胞、代谢通路、碳代谢通路、血小板激活、补体以及凝血瀑布这几条通路与脓毒症的发展密切相关,并且利用VIP值共筛选出138个差异蛋白,对其中贡献最大的高迁移率蛋白(HMGB-1)、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)以及基质金属蛋白酶-8(MMP-8)进行ELISA验证后显示,观察组患者HMGB-1、NGAL以及MMP-8表达水平明显高于对照组,两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。将两组患者外周血单个核细胞进行ELISA检测后建立ROC曲线诊断模型显示,HMGB-1灵敏度为0.832,特异度为0.865;NGAL灵敏度为0.802,特异度为0.668;MMP-8灵敏度为0.833,特异度为0.866。结论基于DIA LC-MS技术对脓毒症患者外周血差异蛋白进行研究后显示,PLS-DA、OPLS-DA以及PCA模式能够分析蛋白质组学数据,初步筛选出HMGB-1、NGAL以及MMP-8是脓毒症患者外周血单个核细胞的候选生物标志物。

Th17 Treg联合SII对卵巢子宫内膜异位囊肿腹腔镜术后自然妊娠的预测效能

目的 探讨外周血辅助性17细胞(Th17)、调节性T细胞(Treg)、术前系统免疫炎症指数(SII)对卵巢子宫内膜异位囊肿(OEM)患者腹腔镜手术后自然妊娠的预测价值。方法 选取2018年9月至2021年9月在昆山市中医医院行腹腔镜手术治疗的OEM患者104例,全部患者在术后均随访两年时间,根据患者的自然妊娠结局进行分组,分为妊娠成功组(n=45)和妊娠失败组(n=59),采用多因素Logistic回归分析影响OEM患者妊娠结局的因素,并绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析术前SII、Th17、Treg、Th17/Treg及联合检测对妊娠结局的预测价值。结果 104例OEM患者中45例自然妊娠成功,59例自然妊娠失败。两组比较,年龄、囊肿类型、AMH、糖类抗原125、sp17Ab、Th17、Treg、SII、Th17/Treg等差异均有统计学意义(P <0.05)。将上述危险因素进行Logistic回归分析,结果显示AMH、sp17Ab、Treg、Th17、SII、Th17/Treg是OEM患者术后自然妊娠失败的危险因素。ROC曲线显示,Th17、Treg、Th17/Treg、SII、联合预测不良预后的曲线下面积分别为0.730、0.583、0.935、0.776、0.955。结论 OEM患者在术前的Th17、Treg、SII水平对术后自然妊娠结局有一定的预测价值。

宣肺化痰法对冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠病证结合模型的干预作用

目的:观察具有宣肺化痰作用的药物(咳速停糖浆、咳清胶囊)对首次建立的冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠病证结合模型的治疗作用。方法:通过考察咳速停糖浆(22,11 mL·kg^-1)和咳清胶囊(1.155,0.5775 g·kg^-1)对小鼠肺组织炎症变化、病毒核酸表达、炎性因子[白细胞介素(IL)-6,IL-10,肿瘤坏死因子(TNF)-α及γ-干扰素(IFN-γ)]含量、外周血中免疫细胞(CD4^+T淋巴细胞,CD8^+T淋巴细胞及B淋巴细胞)占比的影响来综合评价药物对冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠病证结合模型的治疗作用。结果:与模型组比较,咳清胶囊高、低剂量组以及咳速停糖浆高、低剂量组均可显著减轻小鼠肺组织炎症损伤;咳清胶囊可明显升高外周血CD4^+T淋巴细胞,CD8^+T淋巴细胞及B淋巴细胞的占比;咳清胶囊、咳速停糖浆均可以降低IL-6,IL-10,TNF-α及IFN-γ的表达量,抑制肺组织中病毒载量,改善肺组织肺泡间隔水肿、炎性细胞浸润等病理表现。结论:作为新型冠状病毒肺炎的一线用药,咳清胶囊、咳速停糖浆对冠状病毒肺炎寒湿疫毒袭肺小鼠病证结合模型具有显著的治疗作用,其机制可能与调节免疫功能、降低细胞因子风暴等作用有关。

利用定量蛋白组学对脓毒症外周血单个核细胞差异蛋白的研究

目的 探讨基于数据非依赖性采集高分辨率色谱- 质谱技术（data independent acquisition liquid chromatography-mass spectrometry, DIA LC-MS）对于脓毒症外周血差异蛋白研究的可行性。方法 采用前瞻性研究，纳入2016 年4 月至2016 年7 月复旦大学附属上海市第五人民医院重症监护室（ICU）收治的10 例脓毒症以及10 例同时期入住ICU 年龄性别相仿的术后未并发脓毒症的患者（疾病对照组）。采用最新的数据非依赖性采集技术（data independent acquisition，DIA）联合skyline 数据提取软件对10 例脓毒症和10 例对照组的外周血单个核细胞的蛋白进行研究分析，所得的数据分别采用主成分分析法（principal component analysis，PCA）、偏最小二乘法- 判别分析（partial least squares discriminant analysis，PLS-DA）和正交偏最小二乘法判别分析（orthogonal partial least squares discriminant analysis，OPLS-DA）进行模式识别分析，确定外周血单个核细胞的差异蛋白，进行通路分析以及GO 分析。根据PLS-DA 模型变量的重要性投影（variable importance in the projection, VIP 值）初步筛选可能的蛋白标志物，并对贡献最大（VIP 〉1, P〈0.05）的3 个蛋白进行ELISA 验证和ROC 曲线的分析。结果 总共鉴定到了1 062 个碎片离子加和得到119 个差异蛋白，其中31 个蛋白上调，88 个蛋白下调。通过通路分析发现与碳代谢，血小板激活，细菌侵袭上皮，补体凝血瀑布激活有关。其中高迁移率蛋白1（HMGB-1），中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL），基质金属蛋白酶8（MMP-8）用ELISA 验证在脓毒症与疾病对照组的外周血单个核细胞表达中差异有统计学意义（P〈0.01）。ROC 曲线下面积均大于0.85，有较好的敏感度和特异度。结论 利用DIA-MS 技术对脓毒症外周血单个核细胞进行研究检测，PLS-DA、OPLS-DA、PCA 模式识别均能用于蛋白组学数据的分析，初步筛选HMGB-1、NGAL、MMP-8 是值得进一步研究的脓毒症外周血单个核细胞候选生物标志物。

不同结核病类型合并糖尿病患者治疗前后外周血免疫细胞亚群的动态变化

为研究不同结核病类型合并DM患者治疗前后外周血免疫细胞亚群的动态变化对治疗结局的影响,选择2017年3至10月的活动性肺结核合并DM患者36例(A组),潜伏结核感染合并DM患者36例(B组)。两组患者均进行降糖和抗结核治疗,对比两组患者DM和结核的治疗效果及治疗前后外周血免疫细胞亚群和炎性因子的变化情况。结果显示,两组患者在降糖治疗后空腹血糖和糖化血红蛋白水平较治疗前均有显著下降(P<0.05),两组患者治疗后空腹血糖和糖化血红蛋白水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A组治疗后,痰菌转阴率为97.2%,治疗有效率为88.9%。A组和B组患者治疗后,结核T检验(detection of tuberculosis T cell,TB-IGRA)阳性率分别降至5.6%和2.8%。治疗前A组患者Th1和Th17水平显著高于B组(P<0.05),Th2和Treg水平显著低于B组(P<0.05);治疗后两组患者Th1和Th17水平较治疗前均显著降低,Th2和Treg水平显著升高(P<0.05);两组患者间治疗后Th1、Th2、Th17和Treg水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗前A组患者TNF-α和IFN-γ水平显著高于B组(P<0.05),IL-10和IL-4水平显著低于B组(P<0.05);治疗后两组患者TNF-α和IFN-γ水平较治疗前均显著降低,IL-10和IL-4水平显著升高(P<0.05);两组患者间治疗后TNF-α、IFN-γ、IL-10和IL-4水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。提示外周血免疫细胞亚群的动态变化对结核病合并DM患者治疗结局的评价具有一定的参考价值。