心肌特异性新蛋白激酶p93和peroxiredoxin3的相互作用

为了明确p93在心血管系统中的生物学功能及在信号传导通路中的作用 ,采用酵母双杂交技术 ,选择 p93N端第 10 1～ 372位氨基酸构建诱饵质粒 ,筛选成人心脏cDNA文库 ,寻找与之相互作用的蛋白质 ,结果得到蛋白peroxiredoxin 3(PRX 3) .采用体外结合实验和免疫共沉淀等方法 ,证实了原核和真核表达的 p93确实可与PRX3相互作用 ,通过双重荧光共定位 ,为二者的相互作用提供了定位依据 .研究提示p93可能参与心肌细胞中与PRX3有关的各种生理病理过程 ,如生长、分化、发育、凋亡。

慢性心理应激对人卵巢癌移植瘤中Prdx1和Prdx3蛋白的影响

目的探讨慢性心理应激对肿瘤发生发展的影响及其可能机制。方法将裸鼠随机分成应激组及对照组,每组10只;两组均皮下注射SKOV3细胞建立荷人卵巢癌皮下移植瘤模型。应激组裸鼠采用束缚应激法进行应激,构建荷人卵巢癌裸鼠慢性心理应激模型;而对照组整个实验中不接受应激。观察两组移植瘤的生长状况;采用蛋白组学方法筛选、鉴定、验证应激组与对照组移植瘤之间的差异蛋白;分析典型差异表达蛋白与肿瘤生长的可能联系。结果应激组裸鼠的移植瘤生长速度比对照组快,最终瘤重(1.717±0.571)g明显高于对照组的(1.083±0.286)g(P<0.05);两组移植瘤中存在数百种差异表达蛋白,有20个蛋白质斑点变化超过2倍,其中Prdx1和Prdx3蛋白在应激组中表达上调极其明显(P<0.05)。结论慢性心理应激可能是通过Prdx1激活NF-κB通路促进卵巢癌的进展,Prdx1和Prdx3可能成为治疗卵巢癌的靶点。

血清过氧化物酶3在原发性肝癌中的诊断价值及其对预后的影响研究

背景 原发性肝癌(PHC)是一种常见的消化系统恶性肿瘤,常因诊断延误而导致预后不佳,术后5年生存率为20%~40%。过氧化物酶3(PRDX3)是线粒体中的一种重要的抗氧化物酶,在多种恶性肿瘤中高表达,与肿瘤的发生、发展密切相关,但目前关于PRDX3对PHC的临床诊断及预后评估价值的研究较少。目的 探讨血清PRDX3在PHC中的诊断价值及其对PHC预后的影响。方法 选取2013年6月—2015年6月郑州人民医院收治的PHC患者86例纳入PHC组,选取同期在本院检查并确诊为肝硬化(LC)患者78例纳入LC组,再选取同期进行体检的健康者66例纳入对照组。收集受试者的一般临床资料,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、甲胎蛋白(AFP)和血清PRDX3水平;收集PHC患者的Child-Pugh分级、TNM分期、最大肿瘤直径、肝内肿瘤数量、血管浸润比例;收集PHC患者的术后短期恢复情况,包括是否肝区疼痛、发热、发生术后并发症、复发/转移以及术后住院时间;统计PHC患者的术后生存期,随访截至2018年6月。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析PRDX3对PHC的诊断效能;采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,比较采用Log-rank检验;采用单因素和多因素Cox比例风险回归分析探讨PHC患者预后的影响因素。结果 PHC组患者ALT、AST、AFP、PRDX3均高于对照组和LC组,LC组患者ALT、AST、PRDX3均高于对照组(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,以对照组为参照,血清PRDX3诊断LC和PHC的ROC曲线下面积(AUC)分别为0.690、0.886,灵敏度分别为52.56%、75.58%,特异度分别为84.85%、100.00%;以LC组为参照,血清PRDX3诊断PHC的AUC为0.780,灵敏度为67.44%,特异度为87.18%。以PRDX3为检验变量,以随访终止时PHC患者的生存状态为分类变量绘制ROC曲线,结果显示,PRDX3预测PHC患者预后的AUC为0.649,最佳临界值为243 mg/L,Youden指数为0.254,灵敏度为63.83%,特异度为61.54%。根据该最佳临界值将PHC患者分为低PRDX3组(n=41)和高PRDX3组(n=45)。高PRDX3组患者TNM分期Ⅲ期+Ⅳ期所占比例、最大肿瘤直径、血管浸润比例大于低PRDX3组(P<0.05)。随访终止时,86例PHC患者术后生存期为9~60个月,中位生存期为33个月。Log-rank检验结果显示,不同TNM分期、最大肿瘤直径、血管浸润比例、PRDX3水平患者生存率比较,差异均有统计学意义(P<0.05);单因素及多因素Cox比例风险回归分析结果显示,TNM分期、最大肿瘤直径、血管浸润比例和PRDX3水平是PHC患者术后生存期的独立影响因素(P<0.05)。结论 术前血清PRDX3水平可作为PHC的早期诊断指标,并且TNM分期、最大肿瘤直径、血管浸润比例和PRDX3水平是PHC患者术后生存期的独立影响因素。

食管鳞状细胞癌中PRDX_3的表达及与其临床意义

目的探讨过氧化还原蛋白3(PRDX_3)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达,分析其与食管鳞状细胞癌临床病理特征、免疫组织化学表达及预后的关系。方法收集河北医科大学第四医院病理科2012-2015年间手术切除食管癌肿瘤169例,经复查存档切片及病理诊断无误后,再选取相应的存档蜡块,每例均通过免疫组织化学S-P三步法染色确诊为113例食管鳞状细胞癌,采用应用免疫组织化学Envision TM二步法检测了PRDX_3蛋白的表达情况,统计学分析其临床意义。结果 113例食管鳞状细胞癌中PRDX_3蛋白的阳性表达率为64.60%(73/113),其中,PRXD3阳性表达与患者年龄、性别,肿瘤大小、浸润深度无显著关联性(P>0.05),而与肿瘤的分期分级、淋巴结转移呈正相关,其PRXD3表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论食管鳞状细胞癌中PRDX_3的检测,特别存在淋巴结转移患者的诊断、判断预后,以及为食管鳞状细胞癌临床治疗的新靶点提供必要的实验和理论依据。

硫氧环蛋白过氧化物酶3对血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大的影响

目的观察硫氧环蛋白过氧化物酶3(Prdx-3)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的作用,并探讨其作用机制。方法体外培养心肌细胞(H9C2)随机分为对照组、AngⅡ组、AngⅡ+转染对照组和AngⅡ+Prdx-3转染组。脂质体转染法将Prdx-3表达质粒转染心肌细胞,Western blot法检测Prdx-3蛋白表达,Real-time PCR法检测脑钠素(BNP)m RNA表达,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prdx-3表达质粒转染心肌细胞后,Prdx-3蛋白表达值为(0.88±0.12),高于转染对照组(0.38±0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,AngⅡ组BNP m RNA[(1.00±0.00)比(1.72±0.29)]、ROS[(3473±81)比(4439±111)]及Prdx-3蛋白表达水平[(0.33±0.05)比(0.72±0.14)]均明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。AngⅡ+转染对照组和AngⅡ组的BNP m RNA[(1.72±0.29)比(1.94±0.34)]、ROS[(4439±111)比(4285±167)]及Prdx-3蛋白水平[(0.72±0.14)比(0.75±0.11)]比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与AngⅡ组比较,AngⅡ+Prdx-3转染组BNP m RNA[(1.72±0.29)比(1.29±0.15)]和ROS水平[(4439±111)比(3648±254)]明显下降,但Prdx-3蛋白水平[(0.72±0.14)比(1.89±0.37)]显著增高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 AngⅡ可通过ROS诱导心肌细胞肥大,而Prdx-3通过降低ROS抑制AngⅡ的作用。

硫氧环蛋白过氧化物酶3在血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大中的表达

目的观察硫氧环蛋白过氧化物酶3(Prdx-3)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导心肌细胞肥大中的表达。方法体外培养心肌细胞(H9C2)随机分为对照组和AngⅡ组(AngⅡ1×10^(-6)mol/L处理)。Real time PCR法检测脑钠素(BNP)mRNA表达,二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平,Western blot法检测Prdx-3蛋白表达。结果①与对照组比较,AngⅡ刺激6、12、24、48 h的BNP mRNA分别增长(1.10±0.08)、(1.30±0.18)、(1.80±0.25)、(2.00±0.37)倍,除刺激6 h外,其他时间点的差异均有统计学意义(P<0.05)。②AngⅡ刺激5、10、20、40 min和1 h ROS水平分别是(3740±75)、(3911±91)、(4330±143)、(4073±335),(3879±226),与对照组(3426±197)比较,刺激5、10、20 min时差异有统计学意义(P<0.05)。③AngⅡ刺激30 min、1 h、3 h和6 h时Prx-3蛋白的表达值分别为(0.72±0.11)、(0.50±0.07)、(0.42±0.08)和(0.35±0.08),与对照组(0.33±0.05)比较,AngⅡ刺激30 min和1 h时差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在AngⅡ诱导心肌细胞肥大过程中伴随着Prdx-3表达的上调,推测Prdx-3表达与降低ROS有关。

人PRX3原核表达质粒的构建及表达

目的构建人Peroxiredoxin 3(PRX3)原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达。方法采用基因工程技术将PRX3编码序列插入原核表达质粒载体pET-30(a),再将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析。结果酶切鉴定和DNA测序证实人PRX3编码序列全长正确地插入表达质粒中,序列与GenBank报道的一致;重组PRX3在大肠杆菌获得高效表达,且易形成包涵体。结论人PRX3原核表达质粒构建成功,并能在大肠杆菌中高效表达,为后续研究奠定了良好基础。

过氧化物还原酶3在子宫内膜癌组织表达及意义

目的探讨过氧化物还原酶3在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法选取2016年10月—2017年5月在我院接受治疗的子宫内膜癌病人共30例,采用免疫组化染色检测过氧化物还原酶3在子宫内膜癌组织中的表达,采用酶联免疫吸附试验法检测病人血清中过氧化物还原酶3的水平,并与同期入院的30例良性病变病人(对照组)进行比较。分析子宫内膜癌病人血清及癌组织中过氧化物还原酶3表达的相关性。结果过氧化物还原酶3在子宫内膜癌病人血清及癌组织中的表达均高于对照组,差异有统计学意义(t=2.198、2.819,P<0.05),但其在子宫内膜癌病人血清及癌组织中的表达无相关性。子宫内膜癌病人血清雌二醇和胰岛素水平显著高于对照组(t=2.211、2.905,P<0.05)。结论子宫内膜癌组织中过氧化物还原酶3的表达升高可能与其局部的氧化应激状态有关,其表达上调可能有助于促进肿瘤细胞的生长;而病人血清中过氧化物还原酶3水平升高,可能与其胰岛素水平升高有关。

硫氧还原蛋白过氧化物酶3在前列腺癌早期诊断及恶性判断中的作用

目的探讨硫氧还原蛋白过氧化物酶3(PRDX3)在前列腺癌早期诊断及恶性判断中的作用。方法通过蛋白组学对比前列腺癌组织和癌旁组织中PRDX3基因结合蛋白差异表达程度,免疫组化验证,结合PRDX3免疫组化评分和前列腺癌患者的临床病理参数进行分析。结果通过蛋白组学结果表明,与癌旁组织相比,PRDX3在肿瘤组织中表达是上调的,上调达1.68倍(P=0.015)。通过免疫组化染色,我们发现PRDX3在前列腺癌组织中的表达明显强于癌旁组织(P=0.035)。PRDX3的表达与患者年龄(P=0.028)有关;与前列腺癌患者血清PSA水平(P=0.641)和肿瘤转移(P=0.21)无明显相关;而与Gleason评分(P=0.040)、临床分期(P=0.024)和病理分期(P=0.041)有关。结论 PRDX3的表达与肿瘤的早期诊断和恶性程度相关,可结合ROS水平对前列腺癌疑似患者进行早期诊断及初步判断肿瘤恶性程度。