蛋白激酶C在红细胞生成素介导的早期信号转导中的作用

利用pfosluc 2质粒转染对Epo刺激有反应的ELM-I-1细胞系细胞,测定c-fos表达活性的研究方法观察蛋白激酶C在Epo介导的早期信号转导过程中的作用,c-fos表达活性以光子量表示。pfosluc 2质粒转染的细胞加PMA 50 nmol/L刺激,光子量由2 501±126/1×10~5细胞升高到4272±242/1×10~5细胞(n=3,P【0.001);PMA刺激诱导的c-fos活性表达呈剂量依赖性。以Epo 2 U/ml刺激细胞同时以 PMA 50 nmol/L刺激时,光子增加量明显比单独用Epo和PMA刺激时的光子增加量之和增多,结果提示PMA不仅本身能诱导c-fos表达活性,同时能增强Epo刺激诱导的c-fos表达活性。另一方面蛋白激酶C抑制剂H7明显抑制Epo和PMA诱导的c-fos表达活性,Epo诱导的c-fos表达活性下降57.8％。本研究结果提示蛋白激酶C在Epo介导的早期信号转导过程中具有重要的正性调节作用。

红细胞生成素介导的早期信号传递的研究

把c-fos启动子连接于Photinus Pyralis荧光素酶基因的上游,以荧光素酶基因作为报道基因,构成pfosluc2质粒,然后把此质粒导入对红细胞生成素(EPO)刺激有反应的小鼠红白血病细胞系ELM-I-1细胞内,检测EPO介导的早期信号传递过程。以Lipofectin为介质把pfosluc2质粒DNA导入ELM-I-1细胞,测定报道基因荧光素酶活性,观察转导细胞c-fos基因的表达。导入pfosluc2的细胞,可检测出光子量(3202±80/1.5×10~5细胞),光子量与检测的转导细胞数呈线性关系。经EPO刺激后,光子量明显增高(5869±321/1.5×10~5细胞)。EPO刺激后光子量的增加,存在剂量依赖性和时间相关性。本实验观察说明,EPO在刺激靶细胞时的信号传递,可能通过细胞核内c-fos基因的表达而起作用。此外,本实验介绍的方法敏感、简便,能用于快速地检测EPO或其它细胞因子的早期信号传递过程。