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鼠肺炎沙眼衣原体质粒蛋白pgp5的克隆表达鉴定及免疫原性分析
1
作者
张颖
孙毅娜
+5 位作者
孔杰
陈曼
胡春敏
齐蔓莉
刘全忠
刘原君
《中国皮肤性病学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期518-523,共6页
目的获取鼠肺炎沙眼衣原体(Chlamydia muridarum)质粒蛋白pgp5的基因及纯化的蛋白并鉴定其免疫原性。方法设计引物,PCR扩增目的基因,将其定向插入到原核表达载体pET28a中,然后将重组质粒转化入大肠杆菌E.coli DH5α中,并用PCR扩增及序...
目的获取鼠肺炎沙眼衣原体(Chlamydia muridarum)质粒蛋白pgp5的基因及纯化的蛋白并鉴定其免疫原性。方法设计引物,PCR扩增目的基因,将其定向插入到原核表达载体pET28a中,然后将重组质粒转化入大肠杆菌E.coli DH5α中,并用PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定。再将重组质粒转化入感受肽Rosetta(DE3)并诱导表达,用镍柱纯化pgp5-his融合蛋白。用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价,Western blot、细胞免疫荧光方法检测抗体与pgp5蛋白的结合。结果所获得的pgp5基因片段经测序长度为795 bp,检索确认其序列与GeneBank一致。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹实验均显示获得相对分子质量约29 000的纯化蛋白。ELISA检测多克隆抗体效价达1∶100 000。细胞免疫荧光检测结果显示抗体可与体外培养的鼠肺炎沙眼衣原体特异性结合。结论成功表达pgp5-his融合蛋白,并制备了高效价、高特异性的抗pgp5抗体,为进一步研究奠定了基础。
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关键词
鼠肺炎沙眼衣原体
pgp5蛋白
质粒
基因表达
免疫原性
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职称材料
题名
鼠肺炎沙眼衣原体质粒蛋白pgp5的克隆表达鉴定及免疫原性分析
1
作者
张颖
孙毅娜
孔杰
陈曼
胡春敏
齐蔓莉
刘全忠
刘原君
机构
天津医科大学总医院皮肤性病科
天津医科大学代谢病医院内分泌研究所
出处
《中国皮肤性病学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期518-523,共6页
基金
国家自然科学基金资助项目(31570178
31100138)
+1 种基金
天津市自然科学基金资助项目(16JCQNJC11100)
天津市留学回国人员科研启动项目(2016007)
文摘
目的获取鼠肺炎沙眼衣原体(Chlamydia muridarum)质粒蛋白pgp5的基因及纯化的蛋白并鉴定其免疫原性。方法设计引物,PCR扩增目的基因,将其定向插入到原核表达载体pET28a中,然后将重组质粒转化入大肠杆菌E.coli DH5α中,并用PCR扩增及序列测定等方法对重组质粒进行鉴定。再将重组质粒转化入感受肽Rosetta(DE3)并诱导表达,用镍柱纯化pgp5-his融合蛋白。用纯化后的目的蛋白免疫新西兰家兔,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定抗体效价,Western blot、细胞免疫荧光方法检测抗体与pgp5蛋白的结合。结果所获得的pgp5基因片段经测序长度为795 bp,检索确认其序列与GeneBank一致。十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹实验均显示获得相对分子质量约29 000的纯化蛋白。ELISA检测多克隆抗体效价达1∶100 000。细胞免疫荧光检测结果显示抗体可与体外培养的鼠肺炎沙眼衣原体特异性结合。结论成功表达pgp5-his融合蛋白,并制备了高效价、高特异性的抗pgp5抗体,为进一步研究奠定了基础。
关键词
鼠肺炎沙眼衣原体
pgp5蛋白
质粒
基因表达
免疫原性
Keywords
Chlamydia muridarum
Protein
pgp
5
Plasmid
Gene expression
Immunogenicity
分类号
R751 [医药卫生—皮肤病学与性病学]
R374 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鼠肺炎沙眼衣原体质粒蛋白pgp5的克隆表达鉴定及免疫原性分析
张颖
孙毅娜
孔杰
陈曼
胡春敏
齐蔓莉
刘全忠
刘原君
《中国皮肤性病学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2019
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