PGRN基因沉默对人非小细胞肺癌A549细胞增殖及迁移的影响

目的:探讨小干扰RNA(small interference RNA,si RNA)介导的颗粒蛋白前体(progranulin,PGRN)基因沉默对非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法:分别用q PCR和Western blot法检测A549细胞和正常人支气管上皮(HBE)细胞中PGRN的m RNA和蛋白表达水平。采用脂质体转染法将PGRNsi RNA转染A549细胞,采用q PCR和Western blot法验证PGRN表达的变化;应用MTT实验检测细胞活力;活细胞计数法和结晶紫染色实验检测细胞增殖能力;划痕愈合实验和Transwell实验检测细胞迁移能力;并用Western blot法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、Bcl-2和Bax的蛋白表达水平以及PGRN下游信号通路中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平。结果:PGRN在A549细胞中的m RNA和蛋白水平均明显高于HBE细胞(P<0.05);转染PGRN-si RNA后A549细胞中PGRN的m RNA和蛋白水平均明显下调,细胞活力、增殖能力以及迁移能力均明显降低(P<0.05)。沉默PGRN基因的表达,可下调PCNA、cyclin D1和Bcl-2的蛋白表达,而上调Bax的蛋白表达,且磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化的Akt(p-Akt)的蛋白水平明显降低(P<0.05)。结论:PGRN基因沉默能明显抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖和迁移能力,PI3K/Akt和MAPK/ERK信号通路可能在该过程中发挥重要作用。

额颞叶变性的遗传学研究进展

额颞叶变性(FTLD)是一种遗传上呈高度多样性的疾病。近期的研究发现MAPT、PGRN基因突变占家族性FTLD病例中的相当一大部分,此外,CHM2B、VCP、TARDBP基因以及FUS基因的突变在FTLD患者中也逐渐被发现。本文即对FTLD涉及的基因突变及其可能作用途径做一系统阐述。

Atsttrin在大肠杆菌中的表达和条件优化研究

Atsttrin是颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)的截断突变体,具有比PGRN更强的TNFα受体拮抗能力,从而可产生更显著的抗炎治疗效果。为了筛选出高表达Atsttrin原核表达系统,致力于为抗炎新药的开发奠定工作基础,故开展该研究。研究以人血管内皮细胞(HUVEC)的c DNA文库为模板,PCR克隆得到pgrn基因,进而通过重叠PCR成功扩增获得atsttrin目的基因。分别将atsttrin插入到p ET-22b(+)、p GEX-6p-3和p ET-40b(+) 3个不同的表达载体上,并转化大肠杆菌BL21(DE3)、Rosetta(DE3)得到6株表达菌株。通过测定各菌株蛋白表达量,E. coli BL21(DE3)/p GEX-Atsttrin菌株中目的蛋白的表达水平最高。为进一步提高表达量,对诱导温度、诱导时期、诱导剂浓度和诱导时间进行了优化。实验结果表明诱导表达最佳条件为37℃培养到A600为1. 0时加入终浓度为3 mmol/L的乳糖,30℃诱导培养12 h,在此条件下进行5 L发酵罐诱导10 h后重组蛋白产量为550 mg/L。作者成功建立了Atsttrin的大肠杆菌表达系统,并对其表达条件进行了优化,从而为相关药物的开发奠定了工作基础。