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phCMV1和pcDNA3表达人绒毛膜促性腺激素β-C3d3融合蛋白的表达效率比较
1
作者
王秀丽
李大金
+1 位作者
袁敏敏
朱影
《生殖医学杂志》
CAS
2004年第4期205-212,共8页
目的 比较真核表达载体 phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素 β(hCGβ) C3d3融合蛋白的表达效率 ,以获得hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达。 方法 利用高效真核表达载体 phCMV1,构建带有 6个组氨酸纯化...
目的 比较真核表达载体 phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素 β(hCGβ) C3d3融合蛋白的表达效率 ,以获得hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达。 方法 利用高效真核表达载体 phCMV1,构建带有 6个组氨酸纯化标签的融合蛋白表达质粒phCMV1 6His hCGβ C3d3;脂质体法介导phCMV1 6His hCGβ C3d3和pcDNA3 hCGβ C3d3转染CHO细胞 ,G4 18(80 0 μg/ml)筛选抗性克隆 ,G4 18(30 0 μg/ml)维持培养、扩增 ,待阳性克隆 95 % 汇片时换用无血清培养基培养。放射免疫法检测hCGβ表达量 ,Westernblot鉴定表达产物 ,Raji细胞免疫化学染色法鉴定hCGβ与C3d分子的成功融合。反复冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,比较表达效率的变化。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。 结果 酶切鉴定及测序证实 phCMV1 6His hCGβ C3d3构建正确 ,并成功地在CHO细胞中获得了 6His hCGβ C3d3融合蛋白的表达。无血清培液中 2 4、4 8、72h融合蛋白的表达量分别为 4 96、5 2 7、6 33mIU/ml/ 1× 10 6细胞 (以hCGβ含量计算 ) ,phCMV1比 pcDNA3载体的表达效率高 1.4倍。 3次冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,表达效率无明显变化。表达产物经纯化后获得了所需的hCGβ C3d3?
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关键词
phcmv1
PCDNA3
人绒毛膜促性腺激素β
C3D3
蛋白表达
下载PDF
职称材料
hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞中的分泌性表达、鉴定与纯化
被引量:
1
2
作者
王秀丽
李大金
+3 位作者
袁敏敏
王明雁
朱影
孟毅
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第11期743-747,共5页
目的 :构建带有 6个组氨酸纯化标签的hCGβ和hCGβ C3d3融合蛋白的分泌型真核表达质粒 ,在CHO细胞中获得具有生物学活性的重组蛋白的高效表达。方法 :利用高效真核表达载体phCMV1,构建phCMV1 6His hCGβ和phCMV1 6His hCGβ C3d3,脂质...
目的 :构建带有 6个组氨酸纯化标签的hCGβ和hCGβ C3d3融合蛋白的分泌型真核表达质粒 ,在CHO细胞中获得具有生物学活性的重组蛋白的高效表达。方法 :利用高效真核表达载体phCMV1,构建phCMV1 6His hCGβ和phCMV1 6His hCGβ C3d3,脂质体法转染CHO细胞 ,G4 18(80 0 μg ml)筛选抗性克隆。放射免疫法检测抗性克隆培液中hCGβ表达量 ,Westernblotting和Raji细胞免疫化学法鉴定hCGβ C3d3融合蛋白。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。 结果 :酶切及测序结果显示 ,phCMV1 6His hCGβ及phCMV1 6His hCGβ C3d3构建正确。在CHO细胞中成功地获得了hCGβ和hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达 ,phCMV1载体的表达效率是pcDNA3的 1 6倍。表达产物经纯化后得到了所需的hCGβ和hCGβ C3d3融合蛋白。 结论 :hCGβ和hCGβ C3d3融合蛋白在CHO细胞的高效表达为下一步比较hCGβ抗原及hCGβ
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关键词
HCGΒ
hCGβ-C3d3
6His
CHO
phcmv1
下载PDF
职称材料
题名
phCMV1和pcDNA3表达人绒毛膜促性腺激素β-C3d3融合蛋白的表达效率比较
1
作者
王秀丽
李大金
袁敏敏
朱影
机构
复旦大学附属妇产科研究所
出处
《生殖医学杂志》
CAS
2004年第4期205-212,共8页
基金
上海市自然科学基金项目 (0 0ZB14 0 5 8)
教育部博士学科点专项科研基金 (9941)
+2 种基金
卫生部优秀青年人才专项科研基金(970 3 1)
国家自然科学基金 (3 0 2 712 3 5 )资助
计划生育药具国家重点实验室课题 (B2 0 2 1)
文摘
目的 比较真核表达载体 phCMV1和pcDNA3在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞中表达人绒毛膜促性腺激素 β(hCGβ) C3d3融合蛋白的表达效率 ,以获得hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达。 方法 利用高效真核表达载体 phCMV1,构建带有 6个组氨酸纯化标签的融合蛋白表达质粒phCMV1 6His hCGβ C3d3;脂质体法介导phCMV1 6His hCGβ C3d3和pcDNA3 hCGβ C3d3转染CHO细胞 ,G4 18(80 0 μg/ml)筛选抗性克隆 ,G4 18(30 0 μg/ml)维持培养、扩增 ,待阳性克隆 95 % 汇片时换用无血清培养基培养。放射免疫法检测hCGβ表达量 ,Westernblot鉴定表达产物 ,Raji细胞免疫化学染色法鉴定hCGβ与C3d分子的成功融合。反复冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,比较表达效率的变化。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。 结果 酶切鉴定及测序证实 phCMV1 6His hCGβ C3d3构建正确 ,并成功地在CHO细胞中获得了 6His hCGβ C3d3融合蛋白的表达。无血清培液中 2 4、4 8、72h融合蛋白的表达量分别为 4 96、5 2 7、6 33mIU/ml/ 1× 10 6细胞 (以hCGβ含量计算 ) ,phCMV1比 pcDNA3载体的表达效率高 1.4倍。 3次冻存和复苏高效表达hCGβ C3d3融合蛋白的阳性克隆 ,表达效率无明显变化。表达产物经纯化后获得了所需的hCGβ C3d3?
关键词
phcmv1
PCDNA3
人绒毛膜促性腺激素β
C3D3
蛋白表达
Keywords
phcmv1
pcDNA3
hCGβ
C3d3
Protein expression
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞中的分泌性表达、鉴定与纯化
被引量:
1
2
作者
王秀丽
李大金
袁敏敏
王明雁
朱影
孟毅
机构
复旦大学附属妇产科研究所
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004年第11期743-747,共5页
基金
上海市自然科学基金项目 (0 0ZB14 0 5 8)
教育部博士学科点专项科研基金 (9941)
+2 种基金
卫生部优秀青年人才专项科研基金 (970 3 1)
国家自然科学基金 (3 0 2 712 3 5 )
计划生育药具国家重点实验室课题(B2 -0 2 -1)资助
文摘
目的 :构建带有 6个组氨酸纯化标签的hCGβ和hCGβ C3d3融合蛋白的分泌型真核表达质粒 ,在CHO细胞中获得具有生物学活性的重组蛋白的高效表达。方法 :利用高效真核表达载体phCMV1,构建phCMV1 6His hCGβ和phCMV1 6His hCGβ C3d3,脂质体法转染CHO细胞 ,G4 18(80 0 μg ml)筛选抗性克隆。放射免疫法检测抗性克隆培液中hCGβ表达量 ,Westernblotting和Raji细胞免疫化学法鉴定hCGβ C3d3融合蛋白。用镍柱和凝胶过滤层析纯化表达产物。 结果 :酶切及测序结果显示 ,phCMV1 6His hCGβ及phCMV1 6His hCGβ C3d3构建正确。在CHO细胞中成功地获得了hCGβ和hCGβ C3d3融合蛋白的高效表达 ,phCMV1载体的表达效率是pcDNA3的 1 6倍。表达产物经纯化后得到了所需的hCGβ和hCGβ C3d3融合蛋白。 结论 :hCGβ和hCGβ C3d3融合蛋白在CHO细胞的高效表达为下一步比较hCGβ抗原及hCGβ
关键词
HCGΒ
hCGβ-C3d3
6His
CHO
phcmv1
Keywords
hCGβ
hCGβ-C3d3
6His
CHO
phcmv1
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
phCMV1和pcDNA3表达人绒毛膜促性腺激素β-C3d3融合蛋白的表达效率比较
王秀丽
李大金
袁敏敏
朱影
《生殖医学杂志》
CAS
2004
0
下载PDF
职称材料
2
hCGβ和hCGβ-C3d3融合蛋白在CHO细胞中的分泌性表达、鉴定与纯化
王秀丽
李大金
袁敏敏
王明雁
朱影
孟毅
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2004
1
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