21种化学药剂对猕猴桃黑点病菌(Diaporthe phaseolorum)的室内毒力及田间防效

旨在筛选猕猴桃黑点病防治药剂并明确其防治效果。采用菌丝生长速率法,测定21种不同化学药剂对猕猴桃黑点病菌的毒力,并选择其中16种药剂进行田间药效试验。结果显示,烯肟·戊唑醇w=20%悬浮剂(SC)等9种药剂对黑点病菌具有极强的抑菌效果,其EC_(50)值均达0.05~1.12μg/mL,表现为极度敏感;其次为抑霉唑w=20%水乳剂EW、辛菌胺醋酸盐w=1.8%水剂(AS)及腐霉利w=50%可湿性粉剂(WP),其EC_(50)值为14.02~37.37μg/mL,表现为高度敏感;氨基寡糖素w=5%(AS)、嘧环·咯菌腈w=62%水分散粒剂(WG)和吡唑醚菌酯w=25%乳油(EC)的EC_(50)值分别为118.49μg/mL、195.32μg/mL和255.18μg/mL,表现为中度敏感或低度敏感;而苯醚甲环唑w=10%(WG)等6种药剂其EC_(50)值分别远大于350μg/mL,为不敏感;供试的16种药剂在田间均表现出极显著防治效果,其中:苯甲·丙环唑w=30%(EC)450 g/hm^(2)、氟唑菌酰羟胺·苯醚甲环唑w=20%(SC)600 g/hm^(2)、嘧环·咯菌腈w=62%(WG)600 g/hm^(2)、腈苯唑w=24%(SC)900 g/hm^(2)、丙环唑·嘧菌脂w=18.7%(SC)600 g/hm^(2)、啶酰·咯菌腈w=30%(SC)900 g/hm^(2)及戊唑醇w=43%(SC)450 g/hm^(2)7种药剂处理平均防效达到84.32%~90.36%;其次为烯肟·戊唑醇w=20%(SC)900 g/hm^(2)、抑霉唑w=20%(EW)900 g/hm^(2)、吡唑醚菌酯w=25%(EC)720 g/hm^(2)、腐霉利w=50%(WP)750 g/hm^(2)、寡糖·吡唑酯w=27%(EW)900 g/hm^(2)及硝酸氨钙可溶性粒剂(SG)1500 kg/hm^(2)6种药剂处理,平均防效达到64.92%~81.78%;而其他3种药剂处理防效略差。结果表明,30%苯甲·丙环唑EC、20%氟唑菌酰羟胺·苯醚甲环唑SC、62%嘧环·咯菌腈WG、24%腈苯唑SC、18.7%丙环唑·嘧菌脂SC、30%啶酰·咯菌腈SC、43%戊唑醇SC、20%烯肟·戊唑醇SC、20%抑霉唑EW、25%吡唑醚菌酯EC、50%腐霉利WP、27%寡糖·吡唑嘧菌酯EW 12种药剂及土施农用硝酸氨钙SG对猕猴桃黑点病均具有良好的防治效果,可作为今后防治猕猴桃黑点病的优选药剂。

深海真菌Diaporthe phaseolorum FS431次级代谢产物的分离鉴定

目的研究深海真菌Diaporthe phaseolorum FS431的次级代谢产物。方法采用正、反相硅胶柱层析色谱法、Sephadex LH-20凝胶柱色谱法和高效液相色谱法等多种色谱方法对菌株FS431的液体发酵产物进行分离纯化,并通过NMR、MS等波谱技术鉴定化合物结构。结果从发酵物中分离得到9个化合物,分别鉴定为:nectriapyrone(1)、pestalotiopyrone B(2)、nectriapyrone B(3)、(R)-甲羟戊酸内酯(4)、3,5-dihydroxy-γ-caprolactone(5)、cytochalasin H(6)、cytochalasin J(7)、脱落酸(8)和(1R,2R,4R)-trihydroxy-p-menthane(9)。结论化合物2、4、5和8首次从Diaporthe属真菌中分离得到。

First Report of a Postharvest Fruit Rot on Apple Caused by <i>Diaporthe phaseolorum</i>var. <i>caulivora</i>in China: A Note

Brown rots of Red Fuji apples were observed in Hangzhou city (Zhengjiang Province, China). The causal agent was isolated and identified in both morphological and molecular genetic levels. The phenotype and phylogenetic analysis revealed that the isolate was Diaporthe phaseolorum var. caulivora, and its pathogenicity on apple fruit was confirmed by re-inoculation experiment. To our knowledge, this is the first report of D. phaseolorum var. caulivora causing postharvest fruit rot on apple in China.

木本曼陀罗内生真菌Diaporthe phaseolorum MBM-21的次级代谢产物研究

目的对木本曼陀罗内生真菌Diaporthe phaseolorum MBM-21的次级代谢产物进行研究。方法采用多种色谱法对Diaporthe phaseolorum MBM-21次级代谢产物进行分离,并结合理化性质及波谱解析等方法进行结构鉴定。采用MTT法测定单体化合物对非小细胞肺癌细胞A549和人宫颈癌细胞HeLa的细胞毒性。结果与结论从木本曼陀罗内生真菌Diaporthe phaseolorum MBM-21的次级代谢产物中分离得到12个化合物,分别鉴定为RKS-1778(1)、cytochalasin H(2)、cytochalasin U(3)、18-desoxycytochalasin C(4)、phomoxanthone A(5)、(22E,24R)-3β,5α,9α-trihydroxyergosta-7,22-diene-6-one(6)、stigmasta-7,22-diene-3β,5α,6α-triol(7)、cyclic(phenylpropane-pro)dipeptide(8)、brevinamide F(9)、N-acetyltryptamine(10)、3-isobutyl-pyrroline-2,5-dione cyclic(leuc-pro)dipeptide(11)和2-acetylamino-benzoic acid(12)。化合物2、4、5、7对A549细胞具有显著的细胞毒性,IC50值分别为1.16、9.86、7.12、7.23μmol·L^(-1);化合物2、4、5对HeLa细胞显示出较强的细胞毒性,IC50值分别为2.23、5.43、3.15μmol·L^(-1)。

深海真菌Diaporthe phaseolorum FS459的聚酮类化合物研究

从深海真菌Diaporthe phaseolorum FS459中分离出10个聚酮化合物,包括3个新的色酮衍生物(1、2和5),一对新的差向异构体混合物(3和4),1个新的Azaphilone类似物(6)及4个已知的化合物(7-10).它们的结构是基于综合波谱分析进行确定,同时其绝对构型通过对比实测电子圆二色谱(ECD)曲线与量子化学计算得出的理论值来确定.化合物1-4具有罕见的2',3'-二甲基二氧戊环结构单元.此外,本研究还评估了化合物1-10的体外细胞毒性、抗菌活性及NO产生的抑制效果.

基于MAXENT的大豆南北方茎溃疡病菌在中国适生区的预测

利用MAXENT生态位模型和GIS系统,对大豆南北方茎溃疡病菌在我国的适生区进行预测。模型分析结果表明,这两种病菌在我国的潜在适生区域广泛。大豆北方茎溃疡病菌除了我国的宁夏、海南省外,其它省市均有该菌的适生分布区,其中适生等级高的地区主要在江苏、安徽、浙江、上海、江西和湖北6省。大豆南方茎溃疡病菌除了宁夏、青海、西藏外,我国的其它地区均为该菌的潜在适生区域,其中适生等级高的地区主要集中在江西、上海、江苏、安徽、浙江、河南以及陕西南部、四川东部和重庆的部分地区。

CLIMEX-GIS预测大豆北方茎溃疡病菌在中国的潜在分布

大豆北方茎溃疡病菌是大豆的重要病原菌,广泛分布于世界主要大豆产区,造成严重的产量和品质损失。本文应用生物模型CLIMEX结合GIS软件预测大豆北方茎溃疡病菌在中国的适生区,并根据EI值划分相应的适生等级。结果表明,大豆北方茎溃疡病菌在我国绝大部分地区适合生长,其中东北地区、华北地区和云贵高原地区处于中适生区或高适生区。该菌在我国还未报道,通过分析其在我国潜在分布区对于防止病菌的传入、传播和蔓延有重要的检疫意义。

美国进境大豆北方茎溃疡病菌的分离与鉴定

在对美国进境大豆检疫过程中,对大豆籽粒和夹带茎秆进行病原真菌的分离培养,使用形态学和分子生物学相结合的方法对可疑菌株进行鉴定,确定该菌为Diaporthe phaseolorum(Cke.& Ell.)Sacc.var.caulivora Athow & Caldwell。该病原菌是进境植物检疫潜在危险性病原真菌,在国内属首次截获。

8种杀菌剂对大豆南北方茎溃疡病菌和拟茎点种腐病菌的室内毒力测定

试验选用8种低毒杀菌剂,采用菌丝生长抑制法对大豆北方茎溃疡病菌、大豆南方茎溃疡病菌和大豆拟茎点种腐病菌进行了室内毒力测定。结果表明,50%多菌灵SC对供试3种病菌毒力最强,EC50值分别为0.118、0.112、0.152mg/L。25%醚唑EC对南方茎溃疡病菌和拟茎点种腐病菌的毒力仅次于多菌灵,5%己唑醇EC对北方茎溃疡病菌抑菌效果也仅次于多菌灵,这3种药剂都可作为防治3种病害的有效杀菌剂。

基于环介导等温扩增技术检测大豆北方茎溃疡病菌

[目的]传统的以ITS(内转录间隔区)为靶序列对大豆北方茎溃疡病菌(Diaporthe phaseolorum var.caulivora,DPC)的分子检测无法区分大豆南方茎溃疡病菌(D.phaseolorum var.meridionalis)和大豆拟茎点种腐病菌(Phomopsis longicolla)等近似种。笔者在大豆北方茎溃疡病菌靶标序列筛选中,发现了翻译延伸因子(translation elongation factor 1α,tef1α)序列。通过目标病原菌与其相似种比对发现,大豆北方茎溃疡病菌在tef1α序列上有很好的特异性,适合作为分子检测的靶标。[方法]基于环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),以tef1α为靶序列,设计LAMP特异性引物,建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的DPC检测方法,并进行特异性、灵敏度、植株接种试验和进口大豆夹带大豆病残体检测。[结果]该方法仅需60 min,即可通过肉眼直接目测试验结果。64℃等温条件下进行核酸扩增反应60 min,反应结束后,加入SYBR greenⅠ染料,根据染料颜色变化判定扩增结果。特异性试验中,在DPC菌株中扩增到梯形条带,同时加入SYBR greenⅠ染料后可观察到绿色荧光的阳性反应;而在其他供试菌株中均没有出现梯形条带,加入SYBR greenⅠ染料后则保持橙色的阴性反应。该技术最低检测限为1 pg·μL-1目标菌纯DNA。tef1α-LAMP技术能够检测出所有人工接种发病豆苗中的目标菌。在口岸截获的大豆病残体检测中,tef1α-LAMP技术能够在10 g进口大豆中夹带的大豆植株残体中最低检测出10个子囊孢子。[结论]该方法的建立为大豆北方茎溃疡病菌的检疫以及其所致病害的快速诊断提供了新的技术。

大豆北方茎溃疡病菌的检疫鉴定

本文从进境的美国大豆豆杆中分离到一种真菌,通过形态学特征鉴定、致病性检测和序列分析,结果为大豆北方茎溃疡病菌(Diaporthe phaseolorumvar.caulivora)。该菌子囊壳在豆杆上球形,黑色,常2～12个簇生,偶有单生,大小180～316μm×290～398μm;子囊壳具长喙,喙长251.1～1085.4μm,喙基部宽50.6-123.5μm;子囊长棍棒状,无柄,内含8个子囊孢子,大小为29.8～31μm×5～6.5μm;子囊孢子无色,长椭圆形,1隔,分隔处稍缢缩,两室两油球,10.1～11.3μm×2.43～3.24μm。菌落白色,后期变为白-黄色,菌丝紧密收缩,后逐渐变为茶色并蓬松。用ITS区通用引物对该菌DNA进行扩增和测序,获得522bp的ITS区序列。

大豆南方茎溃疡病菌的分离与鉴定

在对美国进境大豆进行检疫时,从混杂的豆秆上发现并分离到了大豆南方茎溃疡病菌,通过形态学和分子生物学鉴定,确定该菌为Diaporthephaseolorum(Cke.&Ell.)Sacc.var.meridionalisMorganJones。该病原菌是国外近年来在大豆生产中新发生的危险性病原真菌,国内未见报道。

大豆茎溃疡病菌子囊孢子收集装置与方法探讨

获得大量干净的子囊孢子是检疫处理技术以及不同寄主抗病性测定的基础,为此开发设计了一种收集大豆茎溃疡病子囊孢子的装置。结果表明:使用该装置,只需提前将子囊壳浸泡10 min,抽滤3 min即可得到大量干净的子囊孢子,收集效率可达1.01×102个/子囊壳。

大豆茎溃疡病菌TaqMan MGB探针实时荧光PCR检测

The technique of TaqMan MGB real-time fluorescent PCR was established to detect Diaporthe phaseolorum var.caulivora(DPC) and D. phaseolorum var.meridionalis (DPM). The primers and TaqMan MGB probes were designed based on the ITS of DPC, DPM, D. phaseolorum var. sojae and Phomopsis longicolla. A series of genomic DNA dilution were used to detect sensitivity of the technique, the results showed that the limits of detection for DPM and DPC were 7 fg/μL and 6 fg/μL DNA respectively.

大豆茎溃疡病菌子囊壳诱导及孢子萌发方法探索

大豆茎溃疡病是为害大豆的重要病害，世界上十大大豆生产国中已有7个国家发现大豆茎溃疡病菌的分布，对当地农业造成严重威胁。该病是我国进境植物检疫性有害生物，目前没有发生为害的报道。大豆茎溃疡病菌以菌丝和子囊壳在大豆植株及其残体上越冬，子囊壳在干燥35d后子囊孢子仍能萌发。

加拿大进境燕麦种子中大豆北方茎溃疡病病菌的检疫鉴定

从来自加拿大的燕麦种子中分离到3株可疑真菌,经形态特征鉴定、分子生物学鉴定及致病性测定,确定截获的3株真菌均为大豆北方茎溃疡病病菌(Diaporthe phaseolorum var.caulivora)。这是我国口岸首次从进境的燕麦种子中截获该病菌。

大豆北方茎溃疡病菌分离鉴定技术的改进

本文对产生大豆北方茎溃疡病菌子囊壳的豆秆分别进行冷冻和水浸处理,发现2种处理均能促进成熟的子囊壳产孢,并且同一子囊壳经冷冻和水浸处理能够多次喷出子囊,释放子囊孢子,利用此特性有利于在不损失鉴定材料的前提下,多次获得分离物以完成病菌的分离鉴定,特别利于伴生其他真菌和子囊壳数量很少情况下,分离纯化大豆北方茎溃疡病菌。