PheAB基因在棒状杆菌染色体上的整合

改造大肠杆菌质粒ｐＬＣＸ３１，切除其中的ｘｙｌＥ基因得到大肠杆菌质粒ｐＪＬ０１．将源 于大肠杆菌的分枝酸变位酶－预苯酸脱水酶基因（ｐｈｅＡＢ）２．３ ｋｂ Ｂａｍ ＨＩ片段克隆到大肠杆 菌质粒 ｐＪＬ０１中启动子Ｐ３２的下游，构建成质粒ｐＪＬ０２．再在ｐＪＬ０２的ＨｉｎｄⅢ位点接入棒状 杆菌染色体的ＨｉｎｄⅢ消化的随机片段，构建成带不同棒状杆菌染色体片段而不带棒状杆菌 自主复制顺序的棒状杆菌整合质粒ｐＪＬ０３．通过接合转移将这些质粒导入苯丙氨酸生产菌黄 色短杆菌３６２１中，获得一系列整合菌株．发酵试验筛选到几株整合菌株，它们的Ｌ－苯丙氨酸 产量较出发菌株显著提高．稳定性试验表明，各整合菌株在无选择压力的液体培养基中连续 传代１０次，整合质粒稳定性仍在９５％以上．以ｐｈｅＡＢ作探针，与整合菌株染色体ＤＮＡ的 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ分子杂交试验证实ｐｈｅＡＢ基因整合在黄色短杆菌３６２１染色体上．