编码耐热邻苯二酚2,3-双加氧酶的pheB基因在大肠杆菌中的亚克隆与高表达

目的：构建ｐｈｅＢ基因高表达菌株，研究酶的耐热机制。方法与结果：通过ＰＣＲ扩增方法，对位于质粒ｐＦＤＡ１３上的ｐｈｅＢ基因进行扩增，克隆于ｐＵＣ１１８Ｎ和ｐＵＣ１１９Ｎ上，经双向测序，证明ＰＣＲ过程中并未发生突变，然后亚克隆于高表达载体ｐＪＬＡ５０３，转化Ｅ．ｃｏｌｉＴＧ１，经４２℃诱导，获得了高表达的基因产物，表达量占细菌总蛋白的３４．６％。并与ｘｙｌＥ基因编码的邻苯二酚２，３双加氧酶作了耐热性比较。结论：ｐｈｅＢ基因在大肠杆菌中获得了高表达，高表达后重组酶的耐热性未发生改变。