珍稀药用植物明党参呋喃香豆素成分累积分布研究

采用HPLC法测定明党参不同器官、不同生长期中珊瑚菜内酯、5-羟基-8-甲氧基补骨脂素的含量。结果表明,明党参根、茎叶、花葶及果实均含有2种呋喃香豆素,2种呋喃香豆素总量,根中以6月为最高,为163.8467μg/g;茎叶以1月为最高,为606.1023μg/g;花葶以6月上旬(生长发育接近成熟时)为最高,为117.1185μg/g;果实以成熟期为最高,达1070.6326μg/g。提示明党参药用器官(根)和非药用器官(茎叶、花葶、果实)为天然呋喃香豆素优质药用植物资源,具有广泛开发利用的前景。

基于网络药理学和分子对接探讨复方风湿宁片治疗类风湿关节炎的作用机制

目的采用网络药理学联合分子对接技术探讨复方风湿宁片治疗类风湿性关节炎的作用机制。方法通过TCMSP、BATMAN-TCM、Swiss TargetPrediction数据库及文献报道收集复方风湿宁片的活性化学成分靶点,并使用GeneCards数据库检索类风湿关节炎的疾病靶点,将两者取交集,并通过绘制“复方风湿宁片–活性成分–靶点–通路–类风湿关节炎”网络图。对复方风湿宁片中的活性成分与类风湿关节炎靶点进行分子对接。结果通过网络药理学分析得到复方风湿宁片中有34种活性化学成分,对应1059个靶点,与类风湿关节炎靶点交集356个。通过KEGG富集分析发现复方风湿宁片主要可能在肿瘤坏死因子(TNF)信号通路、白细胞介素-17(IL-17)信号通路、Th17细胞分化、T细胞受体信号通路、Toll样受体(TLR)信号通路、核因子κB(NF-κB)信号通路、Th1和Th2细胞分化、Janus激酶(JAK)-信号传导和转录激活蛋白3(STAT3)信号通路、B细胞受体信号通路和类风湿性关节炎等通路上发挥治疗作用。蛋白激酶B(Akt1)、前列腺素内过氧化物酶2(PTGS2)、丝裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)、TNF、丝裂原活化蛋白激酶8(MAPK8)、白细胞介素-6(IL-6)和κB抑制因子激酶β(IKBKB)关键靶点与血根碱、珊瑚菜素、氧基白屈菜季铵碱、二氢白屈菜红碱、槲皮素、木犀草素、山奈酚、香叶木素、异鼠李素的结合较好。结论复方风湿宁片治疗类风湿关节炎的作用机制可能主要在免疫调控及抑制炎症方面发挥多靶点、多通路治疗类风湿关节炎作用。

不同加工方法及干燥温度对白芷饮片品质的影响

目的比较不同加工方法及干燥温度对白芷Angelicae Dahuricae Radix饮片外观及香豆素类成分的影响,明确不同加工方法适宜的干燥温度,筛选适宜的白芷产地加工方法。方法采用烘干蒸切法、半鲜切干燥法及鲜切干燥法结合3个干燥温度(40、50、60℃)对新鲜白芷进行加工。采用色差仪量化白芷饮片颜色,HPLC法测定香柑内酯、氧化前胡素、欧前胡素、珊瑚菜素、异欧前胡素5个香豆素成分的含量。利用系统聚类法判定样品颜色和成分差异,基于灰色关联度法探索颜色与成分的关联性,采用秩和比综合评价法(rank sum ratio comprehensive evaluation method,RSR)评价样品质量,并利用环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)抑制剂筛选试剂盒测定样品体外抗炎活性。结果亮度(L^(*))值以50℃干燥样品最高,60℃干燥样品次之,40℃干燥样品最低,黄蓝(b^(*))值相反。香豆素总量及氧化前胡素含量随干燥温度上升而增加,60℃鲜切干燥样品各成分含量最高,40℃烘干蒸切样品最低。颜色、成分聚类结果均显示40℃烘干蒸切样品及60℃鲜切干燥样品与其余样品差异极明显。灰色关联度结果显示L^(*)值与氧化前胡素、欧前胡素关联性较强;b^(*)值与珊瑚菜素、欧前胡素关联性较强,红绿(a^(*))值与各指标成分关联程度均较低。质量评价结果显示排名前3的样品分别为60℃鲜切干燥样品、50℃鲜切干燥样品、60℃半鲜切干燥样品,40℃烘干蒸切饮片排名最低;体外抗炎活性测定结果与质量评价结果相近,且半数抑制浓度(50%inhibitory concentration,IC_(50))与除佛手柑内酯外的各香豆素类成分均呈显著负相关。结论加工方法及干燥温度对白芷饮片影响显著,其中60℃半鲜切干燥饮片及50℃鲜切干燥饮片颜色较白,抗炎活性较高,生产效率高,是值得推广的白芷饮片。

不同激素配比对明党参叶片愈伤组织诱导的影响及其总香豆素的含量测定

目的:考察不同激素配比对明党参叶片愈伤组织诱导的影响;建立测定明党参叶片愈伤组织中总香豆素含量的方法。方法:采用L9(34)正交试验设计不同激素对明党参叶片愈伤组织的诱导体系;以出愈率和生长状况为指标,考察不同激素配比对愈伤组织诱导的影响。以珊瑚菜内酯为指标性成分,检测波长为268nm,采用紫外-可见分光光度法测定愈伤组织中总香豆素的含量。结果:以MS培养基+2,4-二氯苯氧乙酸0.5mg/L+6-糠氨基嘌呤0.2mg/L+1-萘乙酸1.5mg/L+6-苄氨基腺嘌呤0.5mg/L的激素组合对明党参叶片愈伤组织的诱导效果较好,培养14d左右的出愈率即达到100%,且生长状况也较好。珊瑚菜内酯的质量浓度在4.06～11.60μg/L范围内与吸光度呈良好的线性关系(r=0.9948);平均加样回收率为103.15%,RSD=2.04%(n=6)。结论:该方法操作简便、快捷,结果准确,可用于明党参叶片愈伤组织中总香豆素的含量测定,也可为明党参愈伤组织诱导的激素配比选择提供依据。

HPLC法测定珊瑚菜内酯在大鼠肝微粒体生物转化的时程曲线

目的:建立高效液相色谱(HPLC)分析方法研究珊瑚菜内酯在大鼠肝微粒体生物转化的时程曲线,并对转化产物E-5-甲氧基紫罗绒苔素乙酸酯(M3)和Z-5-甲氧基紫罗绒苔素乙酸酯(M4)进行朔源。方法:应用HPLC分析法测定珊瑚菜内酯的大鼠肝微粒体生物转化中的原形及其转化产物白当归素的含量。色谱柱为DiamonsilTMODS C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速为1.0 m L·min-1;检测波长为315 nm;柱温为25.0℃。通过转化产物不同萃取方法的比较,朔源M3和M4。结果:绘制了珊瑚菜内酯在大鼠肝微粒体体外的生物转化时程曲线,在60 min内下降较快,在60~240 min内基本稳定。其转化产物白当归素在60 min时达最大值,然后开始下降,到120 min时基本稳定。在大鼠肝微粒体温孵培养物中,珊瑚菜内酯和白当归素分别在600~1 800和0.2~2.4μg·m L-1的浓度范围内线性关系良好(r2>0.999),方法的精密度和稳定性RSD均小于15%;回收率分别为88.6%~92.9%和79.0%~89.5%,RSD均小于15%。结论:本研究建立的分析方法经方法学验证,可对大鼠肝微粒体温孵培养物中珊瑚菜内酯和白当归素含量进行测定,快速、准确、灵敏;珊瑚菜内酯在大鼠肝微粒体体外的生物转化缓慢;M3和M4是"人工"转化产物。

新疆一枝蒿的化学成分研究

目的研究一枝蒿Artemisia rupestris干燥带根全草的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、SephadexLH-20凝胶柱色谱及半制备高效液相色谱法分离纯化;通过核磁共振、质谱等波谱数据分析鉴定化合物的结构。结果从一枝蒿全草70%乙醇提取物的石油醚和醋酸乙酯萃取物中共分离得到18个化合物,分别鉴定为2α-(2′,4′-hexadiynoyl)-1,6-dioxaspiro[4,5]-deca-3-ene(1)、大黄酚(2)、香草酸乙酯(3)、亚麻酸甲酯(4)、8,11-十八碳二烯酸甲酯(5)、香豆酸二十烷酯(6)、大黄素(7)、2,5-二叔丁基苯酚(8)、珊瑚菜内酯(9)、紫丁香酸(10)、7-甲氧基香豆素(11)、香草醛(12)、欧前胡素(13)、千层纸素A(14)、5-羟基-3,4′,6,7-四甲氧基黄酮(15)、芥酸酰胺(16)、octadecyl 3-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroxyphenyl) propanoate(17)和3,5,3′,4′-四羟基-6,7-二甲氧基黄酮(18)。结论除化合物1、4、11~14和18为首次从该植物中分离得到外,其余化合物均为首次从蒿属植物中分离得到。

川白芷产地趁鲜切制与传统切制方法对其质量的影响

目的通过对川白芷Angelica dahurica产地趁鲜切制与传统切制方法的研究,优化和建立适宜的川白芷切制方法。方法针对川白芷产地趁鲜切制与传统切制过程中所涉及的不同含水量鲜切方法、干燥方法、软化方式等关键操作单元,采用8种不同切制方法对川白芷进行切制。用Adobe Photoshop 2020软件测定川白芷饮片切面颜色,用HPLC法同时测定川白芷饮片中5种香豆素类成分(花椒毒素、佛手柑内酯、欧前胡素、珊瑚菜素、异欧前胡素)的含量,以川白芷饮片切面颜色与5种香豆素类成分含量及其总量为考察指标,结合主成分分析(principal component analysis,PCA)、饮片切面颜色与药效成分含量之间的相关性分析对川白芷饮片的质量和切制方法进行综合评价。结果产地趁鲜切制与传统切制川白芷饮片切面颜色明显不同,以传统切制方法所得川白芷饮片更白[川白芷5~8,其颜色明度(L)值范围为61~67,普遍高于川白芷1~4,其L值范围为34~40];不同切制方法所得川白芷饮片5种香豆素类成分含量及其总量均具有显著性差异;川白芷产地趁鲜切制过程中较适宜的切制方法为川白芷含水量50%时切制,传统切制过程中以川白芷烘干(50℃),蒸透软化15 min后切制为较适宜的切制方法;川白芷饮片切面颜色与药效成分含量之间略呈正相关。结论切制方法对川白芷饮片质量的影响至关重要,产地趁鲜切制以川白芷含水量50%时切制为宜;传统切制以川白芷烘干(50℃),蒸透软化15 min后切制最佳。饮片切面颜色结合药效成分的定量测定可作为评价川白芷切制方法优选的一种快速检测方法。

基于UPLC-Q-TOF-MS指纹图谱和分子对接技术筛选藿香正气水抗新冠病毒潜在质量标志物

目的基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)指纹图谱和分子对接技术,确定藿香正气水(Huoxiang Zhengqi Shui,HZS)抗新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的潜在质量标志物(quality markers,Q-Marker)。方法对27批HZS样品建立UPLC-Q-TOF-MS指纹图谱,结合化学计量学方法,筛选出HZS的差异性成分;以瑞德西韦为阳性对照,将HZS的差异性成分与SARS-CoV-2主蛋白酶(main protease,Mpro)进行分子对接,进一步确定HZS的潜在Q-Marker。结果通过建立27批HZS样品的UPLC-Q-TOF-MS指纹图谱,标定了27种共有化合物;结合层次聚类分析(hierarchical clustering analysis,HCA)和主成分分析(principal component analysis,PCA),确定了其中14种共有化合物在27批HZS样品中具有较大的差异性,并鉴定出了橙皮苷、氧化前胡素、新比克白芷内脂、甜橙素、甘草酸、3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、桔皮素、欧前胡素、珊瑚菜素9种差异性化合物;9种差异性化合物的分子对接结果显示,橙皮苷、氧化前胡素、新比克白芷内脂、甘草酸、欧前胡素、珊瑚菜素6种化合物能与SARS-CoV-2 Mpro的活性氨基酸结合,具有抑制SARS-CoV-2 Mpro的潜能,可作为HZS的潜在Q-Marker。结论将UPLC-Q-TOF-MS指纹图谱、化学计量学分析和分子对接技术交叉使用,确定了HZS的潜在Q-Marker,该方法为药物成分鉴定、同一类药物成分差异性分析,及其功效研究方面提供一定参考。