刺梨不同提取物的非靶向代谢组学比较与分析

该文采用超高效液相色谱-高分辨质谱技术(ultra high performance liquid chromatography high resolution mass spectrometry,UPLC-HRMS)对刺梨不同提取物进行非靶向定性解析,通过数据库确认注释并鉴定代谢物,在二级质谱信息下共鉴定出316种代谢物。运用多元统计方法进行刺梨不同提取物数据分析并筛选出差异代谢物。主成分分析结果表明,刺梨不同提取物存在代谢物差异。依据正交偏最小二乘法判别分析模型的变量重要性投影(variable importance projection value,VIP,VIP>1.3)值、P<0.01和差异倍数(fold change,FC,FC≥3和FC≤0.1)可筛选出49种显著差异代谢物。通过MBRole 2.0通路分析功能,发现有11条代谢途径。其中类黄酮生物合成途径最为显著,共计4个代谢物参与类黄酮生物合成代谢通路。该文基于非靶向代谢组学分析表明,刺梨不同提取物之间的代谢物有一定差异,为进一步研究其功能提供了数据支持。

不同药用植物乙醇提取物对刺梨白粉病菌的抑制效果

【目的】探明10种常见药用植物(丁香、蒲公英、银杏、枇杷、甘草、花椒、鱼腥草、肉桂、生姜和月季)提取物对刺梨白粉病菌的抑制效果,为刺梨白粉病植物源杀菌剂的开发应用奠定基础。【方法】采用孢子萌发法测定6 mg/mL的10种药用植物乙醇提取物对刺梨白粉菌的抑制作用,并测定抑菌效果较好的3种植物提取物的室内毒力。【结果】6 mg/mL的10种植物提取物对刺梨白粉菌孢子萌发均有抑制作用,抑制率为8.58%~86.00%,其中以丁香提取物的抑菌效果最好,抑制率达86.00%。抑菌效果较好的丁香、蒲公英和枇杷提取物不同浓度处理刺梨白粉菌的萌发率分别为8.04%~23.27%、9.50%~20.23%和9.21%~18.33%;抑制率分别为9.38%~68.69%、29.73%~66.93%和24.07%~62.77%,且抑制率均随提取物浓度增大而提高;EC50分别为0.077 mg/mL、0.445 mg/mL和0.617 mg/mL;对刺梨白粉菌孢子萌发的抑制效果依次为丁香>蒲公英>枇杷。【结论】10种药用植物乙醇提取物对刺梨白粉菌均有抑制作用,以丁香的抑菌效果最好,可用于刺梨白粉病植物源杀菌剂的开发与应用。

刺梨多酚提取物对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的改善作用

目的:为了研究刺梨多酚提取物对高脂饮食诱导的肥胖小鼠的改善作用。方法:分别以多酚含量400 mg/kg BW/d的剂量对高脂饮食小鼠进行干预。连续灌胃4周,测定小鼠体重、肝脏指数、白色脂肪及肝脏组织形态学变化、血清生化指标、脏器抗氧化能力和肠道屏障。结果:与CON组相比,MODEL组胰岛素水平(Insulln,INS)和炎症因子水平均显著(P<0.05,P<0.01)提高,血脂四项中高密度脂肪(High-density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)水平显著降低(P<0.01),总胆固醇(Total cholesterol,TC)、甘油三酯(Triglyceride,TG)和低密度脂肪(Low-density lipoprolesterol,LDL-C)水平显著升高(P<0.01);抗氧化物中超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GPx)活力显著下降(P<0.01),肠道屏障蛋白表达水平及短链脂肪酸(Short-chain fatty acids,SCFAs)水平均显著降低(P<0.01);与MODEL相比,多酚干预组(RF、RP组)炎症因子和氧化应激水平显著降低(P<0.05,P<0.01),RF组抗氧化物SOD、GPx活力显著提升(P<0.01),RF组和RP组肠道内ZO-1、Claduin-1和SCFAs水平均发生显著逆转(P<0.01)。结论:刺梨多酚提取物能有效缓解高脂饮食诱导的肥胖小鼠体内代谢紊乱,减缓体重增长,保护脂肪和肝脏组织细胞形态变化,缓解肥胖小鼠体内炎症和氧化应激水平,增强肠道屏障功能,且RF效果优于RP。

超声辅助提取刺梨果渣多糖及其抗氧化活性的研究

目的采用超声辅助提取刺梨果渣多糖(Rosa roxburghii tratt pomace polysaccharide,RRTP),探究不同超声时间(30、45、90 min)对RRTP化学组成、官能团、分子量及抗氧化活性的影响。方法通过高效凝胶排阻色谱、高效液相色谱、傅里叶红外光谱等方法探究超声对RRTP结构的影响。以还原力及自由基清除率为指标,对RRTP的抗氧化活性进行研究。结果RRTP是由葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖、核糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、岩藻糖组成的酸性多糖。相比传统热水提取,超声对多糖的单糖组成及官能团的特征吸收无明显影响,但可有效降解多糖高分子量的组分。短时间超声辅助提取(30 min、45 min)可提高RRTP对DPPH(2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl,2,2-联苯基-1-苦基肼基)自由基、ABTS^(+)[2,2’-Azino-bis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐]自由基的清除能力以及对Fe3+的还原能力,这是由于分子量降低,多糖分子中的游离羟基及还原端含量增加,使得多糖抗氧化活性增强。但随着超声时间的增长(90 min),多糖抗氧化活性不再上升,可能是由于多糖的有序螺旋结构发生改变,供氢能力减弱。结论超声辅助提取工艺可有效提高多糖提取率,短时间的超声辅助提取可通过降低多糖分子量从而提高其抗氧化活性。本研究可为超声辅助提取技术在刺梨果渣高值化利用中的应用提供理论参考。

刺梨水提物对牦牛肉糜贮藏过程蛋白质和脂质氧化影响的研究

本研究旨在探讨刺梨水提物(Rosa roxburghii Tratt Aqueous Extract,RRTAE)对牦牛肉糜在贮藏过程蛋白质和脂质氧化的影响规律。与空白对照、0.02%二丁基羟基甲苯(Butylated Hydroxy Toluene,BHT)进行比较,添加0.02%、0.10%、0.20%RRTAE到牦牛肉糜中,测定贮藏1、3、6、9 d各组牦牛肉糜的色泽、pH、硫代巴比妥酸(Thiobarbituric Acid Reactive Substances,TBARS)值、荧光化合物(有机相δFor、水相δFaq)、共轭二烯(Conjugated Diolefins,CD)值、羰基含量、表面疏水性、色氨酸含量、二聚酪氨酸含量、感官品质。结果表明,与空白对照、阳性对照(0.02%BHT)相比,0.10%、0.20%RRTAE可显著降低牦牛肉糜的pH(P<0.05),0.02%RRTAE与阳性对照组效果接近,且RRTAE可改善其感官品质,显著抑制a^(*)、b^(*)值的降低(P<0.05),但对L^(*)值有一定的负面作用;0.02%RRTAE可显著降低其TBARS值、二聚酪氨酸含量(P<0.05),且抑制效果随RRTAE添加量的增加而提高;添加0.20%RRTAE可显著降低其δFaq、羰基含量、表面疏水性、色氨酸荧光值(P<0.05)。本研究认为,RRTAE具有改善牦牛肉糜贮藏过程理化特性的作用,可以作为肉糜保鲜中有潜力的抗氧化剂。

刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌的体外抑菌效果及作用机制

【目的】探讨刺梨渣提取物对水产养殖业中主要病原菌嗜水气单胞菌的抑菌作用和机制。【方法】通过微量稀释法和平板计数法测定刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌的最低抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC),通过集群运动实验检测刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌集群运动的影响,通过脂肪酶和蛋白酶活性实验检测刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌脂肪酶活性和蛋白酶活性的影响,通过溶血实验测定刺梨渣提取物对嗜水气单胞菌溶血性的影响,此外通过结晶紫法检测生物膜的形成,以及荧光定量RT-PCR检测毒力和调控系统的相关基因表达情况。【结果】刺梨渣提取物对3株嗜水气单胞菌的MIC为128 mg/mL;其中嗜水气单胞菌ATCC7966的MBC为256 mg/mL,其余两株嗜水气单胞菌的MBC均>512 mg/mL。刺梨渣提取物浓度低于8 mg/mL时,不影响菌株生长;刺梨渣提取物≥4 mg/mL时,对生物膜形成、蛋白酶活性和溶血活性都具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖抑制,但对脂肪酶的活性影响较小。荧光定量RT-PCR结果发现刺梨渣提取物能引起嗜水气单胞菌群体感应(QS)系统中luxS和ahyr基因表达显著下调;同时气溶素aerA表达量也显著下降。【结论】刺梨渣提取物能抑制嗜水气单胞菌生长及运动能力、酶活性、溶血活性、生物膜的形成以及相关毒力基因的表达,表明刺梨渣提取物是一种潜在的嗜水气单胞菌替抗物。

刺梨果渣膳食纤维提取改性及生物活性研究进展

刺梨主要分布于我国西南山区和丘陵地带,因刺梨富含多种氨基酸、碳水化合物、维生素、黄酮、多酚和膳食纤维,具有解毒、健胃消食和降低血糖血脂等生物活性,成为贵州省推动“精准扶贫”、实施“乡村振兴战略”的重要支柱产业之一。目前,刺梨主要以开发饮料为主。刺梨果渣是刺梨榨汁后的副产物,含有丰富的膳食纤维,是一种优质膳食纤维原料。膳食纤维素有“第七大营养素”之称,分为可溶性膳食纤维和不可溶性膳食纤维,两者均具有重要的生理功能。本文综述了国内外刺梨果渣膳食纤维的提取、改性及生物活性的研究进展,并对刺梨果渣膳食纤维提取改性研究中存在的问题及发展趋势进行总结展望,以期为刺梨果渣膳食纤维的利用提供理论依据。

不同溶剂提取对刺梨物质含量变化及抗氧化活性的影响

为探究不同极性的溶剂提取对刺梨物质含量变化及抗氧化活性的影响,分别以水、甲醇、60%乙醇、无水乙醇、正丁醇和乙酸乙酯为提取溶剂,通过测定提取物中抗坏血酸、总多酚、总黄酮、单宁和总三萜含量,采用体外抗氧化方法对刺梨不同溶剂提取物进行抗氧化活性测定,并采用抗氧化活性综合(antioxidant potency composite,APC)指数法进行比较分析。结果表明:60%乙醇提取物中总多酚、总黄酮、单宁和总三萜含量最高;水提取物中抗坏血酸含量最高;乙酸乙酯提取物中总多酚、总黄酮、抗坏血酸和总三萜含量最低;正丁醇提取物中单宁含量最低。对抗氧化活性而言,60%乙醇提取物清除DPPH自由基与ABTS+自由基能力和还原力最强;甲醇提取物的羟基自由基清除率最高;乙酸乙酯提取物清除超氧阴离子自由基的能力最强。APC指数显示,6种溶剂提取物的抗氧化能力由强到弱依次为60%乙醇提取物>甲醇提取物>水提取物>无水乙醇提取物>乙酸乙酯提取物>正丁醇提取物。由于不同活性成分之间存在协同或拮抗作用,且不同活性成分在不同溶剂中的溶解性不同,因此不同溶剂提取对刺梨活性物质含量和抗氧化活性影响较大。

正交试验优化半仿生提取刺梨果渣中黄酮的研究

目的:优选半仿生法提取刺梨果渣黄酮的工艺条件。方法:采用单因素结合正交试验,考查乙醇体积分数、料液比、提取温度、提取时间对刺梨果渣黄酮提取率的影响。结果:半仿生法提取刺梨果渣中黄酮的最佳工艺条件为:乙醇体积分数60%、料液比1∶15(g∶mL)、提取温度80℃、提取时间分别是70,35,35 min,该工艺条件下刺梨果渣黄酮提取率为0.58%。结论:所建立的提取工艺操作简单、提取率高,可用于刺梨果渣中黄酮的提取,为综合开发刺梨加工副产物刺梨果渣提供了参考依据。

刺梨中鞣花酸的分离鉴定及提取工艺的优化

目的:本研究旨在建立刺梨中鞣花酸的分离纯化方法,并对提取鞣花酸的酸水解法进行工艺优化。方法:以刺梨干果为原料,通过超声辅助提取法提取单宁酸,加酸进行水解制得粗鞣花酸,并通过甲醇重结晶进行纯化,采用高效液相色谱测定其纯度,及核磁共振波谱法(NMR)、红外光谱法(IR)、质谱法(MS)、高效液相色谱法(HPLC)、紫外光谱法(UV)对提取得到的鞣花酸进行结构确证,另外,以得率为指标,以酸浓度、提取温度、提取时间、液料比为自变量,在单因素实验的基础上,通过Box-Benhnken中心组合设计和响应面分析法确定刺梨鞣花酸的酸水解工艺条件。结果:从刺梨中提取得到了鞣花酸提取物,通过HPLC分析测定其纯度达到92%,鞣花酸提取物的最大吸收波长254 nm,分子离子峰m/z 301.00,红外吸收各波数与标准品一致,并利用^(1)H-NMR,^(13)C-NMR确定了其结构。通过响应面法得到了酸水解法制取鞣花酸的最优工艺:酸浓度5%,提取温度127℃,液料比为8:1 mL/g,提取时间9.8 h,在此条件下刺梨鞣花酸的得率为30.2%±2.3%(与预测值相比P>0.05)。结论:本研究建立了一种刺梨中鞣花酸简便高效的纯化方法并对其进行了结构确证,并获得了酸水解法制取鞣花酸的最优工艺,为刺梨资源的开发利用提供了参考。

刺梨SOD活力测定研究

本文建立了邻苯三酚自氧化对刺梨SOD测活方法的改进条件;并对不同方法提取的刺梨SOD样液进行测活。结果表明:刺梨果中含有丰富的SOD,但加工过程中温度对SOD活力影晌很大。测得的SOD活力数据低的约100U/g,高的则约5000U/g,数值相差几十倍。为刺梨加工方法的选择提供参考。

响应面优化超声辅助提取刺梨多糖工艺研究

探讨超声波作用下刺梨多糖提取的最佳工艺条件。在单因素试验基础上,采用响应面法对刺梨多糖提取工艺参数进行优化研究。响应面试验表明提取温度、超声功率、超声时间、液料比对响应值刺梨多糖提取率均有显著影响,优化得到超声辅助提取刺梨多糖最佳工艺条件为:超声时间30 min,超声功率120 W,液料比40m L/g,提取温度80℃,提取3次。在此条件下的刺梨多糖提取率可达2.18%,与模型预测值非常接近。

刺梨中黄酮的超声提取及HPLC测定

采用超声波辅助提取刺梨(Rose roxburghii Tratt.)中总黄酮,利用正交试验进行工艺优化,初步建立了刺梨中黄酮的HPLC测定方法。结果表明,超声功率、提取时间和温度均对刺梨中黄酮提取结果影响显著,确定超声辅助提取刺梨黄酮的最佳工艺条件为超声功率300 W,50%乙醇,温度40℃,提取时间为40 min。在此条件下,刺梨黄酮的得率为1.862%。与常规回流提取方法相比,黄酮得率有所增加,同时缩短了提取时间。HPLC法测定结果表明,刺梨中含有芦丁和槲皮素。HPLC法简便、快捷、灵敏、结果准确,可用于刺梨中黄酮成分含量的检测。

刺梨蜂胶饮料配方及其稳定性研究

以刺梨汁和蜂胶提取液为主要原料,通过感官评定和正交试验等方法对刺梨蜂胶饮料加工工艺进行优化研究。结果表明,刺梨蜂胶饮料最佳配方为刺梨汁15%,蜂胶提取液6%,柠檬酸0.1%,蔗糖9%;复合稳定剂最佳组合为羧甲基纤维素(CMC)0.15%,黄原胶0.03%,果胶0.07%。该配方研制出的饮料产品具有较好的风味,颜色呈浅黄色,酸甜适口,组织状态较好,无分层及沉淀现象。

刺梨籽油中脂肪酸成分的GC-MS分析

用超临界CO2流体提取刺梨籽油,经甲酯化处理,用气相色谱-质谱(GC/MS)联用技术对其脂肪酸的组成进行了分析和鉴定,并用面积归一化法测定了各种成分的质量分数。共分离鉴定了10种脂肪酸:含有4种饱和脂肪酸,占脂肪酸总量的14.91%,其中以棕榈酸(8.54%)、硬脂酸(4.42%)为主;含有6种不饱和脂肪酸,占总脂肪酸总量的83.64%,其中亚油酸(41.68%)、亚麻酸(25.44%)、油酸(12.74%)为主。刺梨籽油可作为一种富含不饱和脂肪酸的功能性油脂,该分析结果可为刺梨籽油的开发利用提供理论依据。

夏季高温条件下饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅生长性能、脂质代谢及肝脏中热休克蛋白70基因表达的影响

本试验旨在研究夏季高温条件下饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅生长性能、脂质代谢及肝脏中热应激蛋白70(HSP70)基因表达的影响。挑选28日龄、体重相近的健康皖西白鹅150只,随机分成3组,即对照组、试验1组和试验2组,每组5个重复,每个重复10只鹅。对照组试验鹅饲喂基础饲粮,试验1组和试验2组试验鹅分别饲喂在基础饲粮中添加100和200 mL/kg刺梨提取物的试验饲粮。预试期7 d,正试期14 d,试验期间最高气温37℃,最低气温24℃,日平均气温31.6℃。饲喂2周后,每个重复挑选1只鹅屠宰,采集血样,并分离出肝脏,测定血清脂质代谢指标和肝脏中HSP70基因的相对表达量。结果表明:饲粮中添加刺梨提取物对皖西白鹅的平均日采食量和平均日增重均无显著影响(P>0.05),但添加200 mL/kg刺梨提取物可显著降低料重比(P<0.05);饲粮中添加100和200 mL/kg刺梨提取物均可显著提高血清高密度脂蛋白含量(P<0.05),但对血清总胆固醇和甘油三酯含量无显著影响(P>0.05);与对照组相比,试验1组和试验2组肝脏中HSP70基因的相对表达量均极显著提高(P<0.01),同时试验1组肝脏中HSP70基因的相对表达量还极显著高于试验2组(P<0.01)。由此得出,在夏季高温条件下,在皖西白鹅饲粮中添加刺梨提取物可提高饲料转化率、调节脂质代谢、上调肝脏中HSP70基因的表达,具有较明显的抗应激效果,且添加量为100 mL/kg时的抗应激效果优于添加量为200 mL/kg时。

刺梨挥发油香味成份毛细管气相色谱法定量分析

采用超临界流体萃取得到刺梨挥发油,平均出油率为2.46%。利用毛细管气相色谱仪对刺梨挥发油的21种化学成分进行了定量分析,其主要成分为:亚油酸(34.80%)、亚麻酸(21.25%)、棕榈酸(12.31%)、油酸(9.20%)、亚油酸甲酯(2.24%)、月桂酸(1.85%)、亚麻酸乙酯(1.62%)、丁香酚(1.22%)等。该方法的回归方程的相关系数为:0.9937～0.9998;回收率在84.02%～96.58%之间,RSD在1.82%～4.87%之间。该方法快速简便、准确,适于刺梨挥发油中主要化学成分分析。

刺梨提取物联合5-氟尿嘧啶抗人子宫内膜腺癌作用

目的探讨刺梨提取物(CL)联合5-氟尿嘧啶(5-florouracil,5-FU)的抗子宫内膜腺癌细胞株(JEC)作用。方法将体外培养的指数生长期细胞接种于培养板,实验分为对照组(RPMI1640),10-4mol/L5-FU组,0.01、0.1、1、10和100μg/mL CL组,0.01、0.1、1、10和100μg/mL CL分别联合10-4mol/L5-FU组。采用MTT法和生长曲线绘制分析CL联合5-FU对JEC细胞生长的影响;通过测定硝基四氮唑蓝(NBT)还原能力和细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量分析CL联合5-FU对JEC细胞分化的影响;采用丫啶橙(acridine orange,AO)/溴化乙锭(ethidium bromide,EB)荧光染色法和流式细胞术(FCM)检测CL联合5-FU对JEC细胞凋亡和细胞增殖周期的影响。结果 CL联合5-FU对JEC细胞增殖的抑制作用较CL和5-FU单独应用增强(P<0.05)。与CL和5-FU单独应用比,CL联合5-FU作用后,NBT阳性和凋亡JEC细胞的百分率均升高,而JEC细胞培养上清中LDH含量下降(P<0.05)。CL联合5-FU作用后,G0-G1期JEC细胞比率较CL和5-FU单独应用升高。结论 CL具有增强5-FU抗肿瘤的作用,可能与其增强5FU的细胞毒作用、诱导细胞分化与凋亡和抑制细胞增殖分裂等有关。

银杏叶提取物与不同比例刺梨配伍后对银杏黄酮含量的影响

目的观察不同比例刺梨与银杏叶提取物(GbE)配伍对银杏黄酮含量的影响。方法采用反相高效液相法测定槲皮素、山萘素、异鼠李素含量。结果测定方法精密度RSD≤2.31%,平均加样回收率分别为100.77%、101.79%、99.73%,RSD≤4.35%。银杏叶提取物与刺梨以1∶0、1∶0.5、1∶1、1∶2配伍后银杏黄酮含量分别为25.01%、25.13%、24.96%、24.45%。结论一定量刺梨与GbE配伍对银杏黄酮含量无明显影响。