衣原体噬菌体phiCPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构分析及分段克隆表达

目的预测衣原体噬菌体phi CPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构,并将Vp1表达为更小的蛋白片段,为后续实验奠定基础。方法通过蛋白空间结构分析网站I-TASSER和Predict Protein对phi CPG1衣壳蛋白Vp1的空间结构进行预测,应用TA克隆的方法将Vp1分为不同的部分进行克隆表达,最后通过Western blot技术分别对目的蛋白进行鉴定。结果根据空间结构预测结果以及相关背景资料将衣原体噬菌体phi CPG1衣壳蛋白Vp1分为Vp11-189和Vp1190-502两部分进行克隆表达,目的蛋白Vp11-189和Vp1190-502的基因序列长度分别为567bp和939bp,经检索确定两蛋白碱基序列与Genebank结果相同。而且,Western blot结果显示两目的蛋白的相对分子质量分别为20k Da和35k Da。结论成功将衣原体噬菌体phi CPG1衣壳蛋白Vp1分为Vp11-189和Vp1190-502两部分进行表达,这为后期的深入研究提供了一定的实验基础。

VP1Cm—一种对沙眼衣原体高效抑制蛋白的构建

目的设计构建针对沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)具有高效抑制作用的重组蛋白,为衣原体治疗抵抗探索新的解决方法。方法通过生物信息学方法设计VP1Cm蛋白的基因序列。应用基因合成的方法构建重组质粒VP1Cm-pET28a(+)并转化至大肠杆菌中。用带Ni^+的亲和树脂纯化蛋白,梯度透析复性蛋白。CCK8法测定重组蛋白对Hela细胞的毒性作用。将豚鼠嗜衣原体噬菌体PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C、蛋白VP1Cm、杆菌肽和磷酸盐缓冲溶液(PBS)分别与E型Ct标准株于室温下预孵育3 h后接种至Hela细胞,同时设置Ct感染对照组。48 h后免疫荧光染色计数包涵体。多组样本均数间比较用单因素ANOVA分析,两样本均数间比较用Bonferroni检验。结果成功表达并纯化出蛋白VP1Cm。在相同浓度时,PhiCPG1衣壳蛋白VP1、截短蛋白VP1C和蛋白VP1Cm对Ct的抑制率分别为76.20%、85.13%和90.01%。结论经设计过的蛋白VP1Cm对Ct的抑制效果优于PhiCPG1衣壳蛋白VP1及其功能结构域截短蛋白VP1C。