内质网应激头颈部鳞状细胞癌细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路促进巨噬细胞PD⁃L1表达

目的探讨内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的头颈部鳞状细胞癌(head and neck squa⁃mous cell carcinoma,HNSCC)细胞分泌的外泌体miRNA表达变化对巨噬细胞的影响机制。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。通过蛋白质免疫印迹(Western blot,WB)和实时荧光定量PCR实验(RT⁃qPCR)检测HNSCC肿瘤组织及癌旁组织ERS相关蛋白,包括蛋白激酶R样内质网激酶(protein kinase R⁃like endoplas⁃mic reticulum kinase,PERK)和葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)的表达水平;以500 U/mL干扰素⁃γ(interferon⁃γ,IFN⁃γ)处理人喉鳞癌细胞系HN4细胞48 h,诱发HN4细胞产生内质网应激反应,收集HN4细胞分泌的外泌体,通过生物信息学分析鉴定外泌体的miRNA种类,预测miRNA的靶基因,将巨噬细胞转染miRNA、与收集的外泌体共培养、并敲低巨噬细胞PTEN表达,以WB和RT⁃qPCR检测外泌体miRNA调控的下游信号通路蛋白酪氨酸磷酸酶(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)及程序性死亡受体⁃1配体(programmed death receptor ligand 1,PD⁃L1)表达变化。结果HNSCC肿瘤组织相比癌旁组织ERS相关蛋白表达水平升高(P<0.05);RNA测序及实验验证表明ERS的HN4细胞分泌的外泌体miR⁃26a⁃5p表达上调(P<0.05);PTEN是miR⁃26a⁃5p的靶基因,miR⁃26a⁃5p升高巨噬细胞PD⁃L1表达水平,并下调PTEN表达(P<0.05);巨噬细胞与ERS外泌体共培养,miR⁃26a⁃5p和PD⁃L1表达上升,PTEN表达下降,p⁃AKT表达升高(P<0.05);敲低巨噬细胞PTEN表达,PD⁃L1表达上升(P<0.01)。结论ERS的HNSCC细胞通过外泌体miR⁃26a⁃5p调控PTEN/AKT通路及PD⁃L1的表达。

左西孟旦对缺氧复氧诱导的H9c2细胞凋亡、PTEN和PI3K/Akt信号通路的影响

[目的]研究左西孟旦对缺氧复氧(H/R)条件下H9c2细胞凋亡的影响及相关机制。[方法]体外培养H9c2细胞,将细胞分为空白对照组、H/R组、左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组。采用四甲基偶氮噻唑蓝法检测H9c2细胞增殖;流式细胞仪检测H9c2细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒分别检测SOD活性及MDA含量;荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤2蛋白(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路蛋白表达。[结果]与空白对照组比较,H/R组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、ROS水平、PTEN蛋白表达均显著升高(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著降低,Bax显著升高(P<0.05)。与H/R组比较,左西孟旦低剂量组、左西孟旦中剂量组、左西孟旦高剂量组H9c2细胞增殖抑制率、凋亡率、MDA含量、ROS水平、PTEN蛋白表达均显著降低(P<0.05),PCNA、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著升高,Bax显著降低(P<0.05);且左西孟旦剂量越高,上述指标的相应变化越明显。[结论]左西孟旦可能通过抑制PTEN并激活PI3K/Akt信号通路,促进H/R条件下H9c2细胞增殖,抑制细胞氧化应激和凋亡。

miR-489-3p靶向PTEN/PI3K/Akt信号通路对膀胱癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的探讨微小RNA(miR)-489-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)/磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对膀胱癌(BC)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法2021年1-7月于河北北方学院附属第一医院进行细胞实验,利用火山图从癌症基因组图谱(TCGA-BLCA)数据库筛选BC差异表达miRNA。以110例BC患者的癌组织及其癌旁组织和购买的人膀胱上皮永生化细胞SV-HUC-1及人BC细胞系5637、J82、T24为研究对象,采用实时荧光定量PCR测定miR-489-3p和PTEN mRNA的表达。根据miR-489-3p的相对表达量均值将BC患者分为低表达组(≤0.36)70例和高表达组(>0.36)40例,并分析miR-489-3p表达在BC患者不同临床病理特征中的变化。双荧光素酶实验验证miR-489-3p和PTEN的靶向关系。选择miR-489-3p表达最低的T24细胞进行转染实验,T24细胞随机分组为对照组、miR-NC(阴性对照)组、miR-489-3p mimics(模拟物)组、miR-489-3p mimics+pcDNA组、miR-489-3p mimics+pc-PTEN组。MTT和克隆形成实验、Transwell实验、流式细胞术分别检测细胞增殖、侵袭和凋亡;Western-blot检测PTEN、PI3K、Akt蛋白表达。结果通过火山图筛选出BC组织中显著下调的miR-489-3p。BC癌组织中miR-489-3p表达低于癌旁组织,PTEN mRNA表达高于癌旁组织(t=186.168,510.107,P均<0.001);BC细胞系miR-489-3p表达低于SV-HUC-1细胞,PTEN mRNA表达高于SV-HUC-1细胞(F=883.826,807.220,P均<0.001)。miR-489-3p低表达组患者TNM分期T_(3~4)、有淋巴结转移、肿瘤低分化比例高于高表达组(P<0.05)。双荧光素酶实验显示,miR-489-3p靶向负调控PTEN表达。miR-489-3p mimics组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平高于miR-NC组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数低于miR-NC组(P均<0.01);miR-489-3p mimics+pc-PTEN组凋亡率及PI3K、Akt蛋白表达水平低于miR-489-3p mimics组,PTEN蛋白表达水平、OD值(24 h、48 h、72 h)、克隆数目和细胞侵袭数高于miR-489-3p mimics组(P<0.01)。结论miR-489-3p可能通过靶向下调PTEN表达,激活PI3K/Akt信号通路,进而抑制BC细胞增殖、侵袭,促进凋亡。

PTEN和p53在肝细胞癌中的表达及其相关性

目的:探讨肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)和p53蛋白的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学EliVision方法测定70例HCC组织和40例相应的癌旁组织中PTEN和p53蛋白的表达,分析两个指标与临床病理特征之间的关系以及它们之间的相关性。结果:PTEN在HCC组织中的阳性率为57.1%,显著低于癌旁组织的95.0%(P<0.01)。在肿瘤分期晚和有淋巴结转移的患者中,PTEN表达均降低(P<0.01)。p53蛋白在HCC组织中表达率为60.0%,显著高于癌旁组织的15.0%(P<0.01)。在肿瘤大小、病理分级、TNM分期和淋巴结转移等临床病理指标上,p53蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。PTEN与p53蛋白表达在HCC组织中呈负相关关系(P<0.05)。结论:PTEN低表达与HCC进展有关,有可能作为评价肝癌预后的指标。

乳腺癌组织中血管内皮生长因子-D和PTEN的表达及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子-D(VEGF-D)和10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)蛋白异常表达的作用及其临床意义。方法:应用免疫组织化学S-P法检测90例乳腺浸润性导管癌和20例乳腺良性增生性病变组织中VEGF-D蛋白和PTEN蛋白的表达;结合临床病理指标进行分析。结果:乳腺癌组织中VEGF-D蛋白和PTEN蛋白表达与良性增生性病变组织中表达差异均有统计学意义(P<0.01)。VEGF-D蛋白阳性表达在淋巴结有无转移、雌激素受体阳性与阴性表达间差异均有统计学意义(P=0.03和P<0.05)。PTEN蛋白的阴性表达在淋巴结有无转移、雌激素受体阳性及阴性表达间差异均有统计学意义(P<0.01)。乳腺癌组织中VEGF-D蛋白与PTEN蛋白表达呈显著负相关关系(P<0.01)。结论:VEGF-D和PTEN蛋白异常表达参与了乳腺癌的浸润和转移;VEGF-D和PTEN表达存在相关性。

VEGF/PTEN及下游信号通路在侵袭性垂体瘤中的表达及其临床意义

目的探讨侵袭性垂体瘤中血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)与人第10号染色体缺失的磷酸酶(gene of phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)表达水平及其下游信号通路的变化的临床意义。方法收集医院神经外科手术后垂体瘤标本62例(侵袭组32例,非侵袭组30例)和60例正常垂体组织标本(对照组)。通过实时定量PCR和蛋白质印迹法检测比较VEGF、PTEN、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phosphate-Serine/threonine Kinase,p-Akt)、磷酸化丝裂原活化蛋白激酶(phosphate-mitogen-activated protein kinase,p-MAPK)在垂体瘤和正常垂体组织之间的表达差异。结果垂体瘤标本中VEGF的表达水平显著高于对照组(P<0.05),在侵袭组(3.61±0.16)中的表达高于非侵袭组(2.06±0.13),差异有统计学意义(t=10.60,P<0.05),而PTEN在垂体瘤标本中的表达显著低于对照组(P<0.05),尤其在侵袭组(0.42±0.10)中的表达显著降低(t=6.31,P<0.05)。垂体瘤标本中p-Akt和p-MAPK水平显著高于对照组(P<0.05),且侵袭组(p-Akt 3.90±0.14;p-MAPK 2.52±0.11)明显高于非侵袭组(p-Akt 2.27±0.11;p-MAPK 1.89±0.05)(p-Akt,t=12.95,P<0.05;p-MAPK t=7.29,P<0.05)。结论侵袭性垂体瘤中VEGF、p-Akt及p-MAPK水平明显增高,而PTEN表达水平显著降低,提示上述变化可能与垂体瘤的侵袭性相关,其可能为诊断并治疗侵袭性垂体瘤靶点的选择提供新方向。

MMP-9、ERK与PTEN在舌癌组织中的表达及临床意义

目的观察基质金属蛋白酶9(MMP-9)、细胞外信号调节激酶(ERK)与张力蛋白同源基(PTEN)在舌癌组织中的表达,探讨其临床意义。方法选择2012年5月—2018年6月秦皇岛市海港医院及秦皇岛市第四医院收治65例舌癌患者的术后病理组织为舌癌组,同时选取癌旁正常组织25例作为癌旁组织组。观察不同组织中MMP-9、ERK与PTEN表达情况,及其与临床病理学参数的关系。结果舌癌组ERK、MMP-9阳性表达率均高于癌旁组织组,PTEN低于癌旁组织组(P <0. 05)。临床分期越高、有淋巴结转移者的PTEN阳性表达越低、ERK阳性率越高(P <0. 05),临床分期越高、分化程度越低、有淋巴结转移者的MMP-9的阳性表达率越高(P <0. 05)。结论 MMP-9、ERK与PTEN可能参与舌癌发生与发展过程。

PTEN基因与肿瘤耐药

肿瘤对抗肿瘤药物产生耐受性是肿瘤内科治疗失败的主要原因。PTEN是一种具有双特异性磷酸酶活性的抑瘤基因,其失活与多种肿瘤的发生发展密切相关。近年来的研究表明,PTEN在肿瘤耐药中发挥着重要作用。PTEN失活可介导肿瘤对表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂、抗Her-2/ErbB2人源化单克隆抗体曲妥珠单抗(trastuzumab)、抗EGFR人/鼠嵌合型单克隆抗体西妥昔单抗(cetuximab)、NOTCH1抑制剂、顺铂、阿霉素和紫杉醇等的耐受性,其机制与PTEN对PI3K-AKT信号途径的抑制有关。现综述PTEN基因的生物学特性及其在近年研究较多的几种肿瘤靶向药物耐药中的作用特征。

PTEN/ILK信号通路对子宫内膜癌细胞增殖作用及机制

目的探讨PTEN/ILK信号通路对子宫内膜癌细胞增殖作用及其可能的机制。方法子宫内膜癌患者肿瘤组织检测PTEN和ILK表达;分析PTEN和ILK与子宫内膜癌患者病理特征间的关系;查询随访分析子宫内膜癌患者3年预后生存期;分别在子宫内膜癌细胞系RL95-2、Ishikawa和HEC-1B中过表达PTEN表达,敲减ILK;CCK-8检测RL95-2、Ishikawa和HEC-1B增殖能力变化;western blotting过表达PTEN细胞中检测ILK变化,敲减ILK细胞中检测PTEN变化。结果免疫组化染色PTEN在子宫内膜癌肿瘤组织中阳性面积显著低于正常组织;ILK在子宫内膜癌肿瘤组织中阳性面积显著高于正常组织;PTEN缺失和ILK高表达与患者肿瘤分期、病理分级、是否淋巴结转移密切相关;PTEN缺失和ILK高表达导致患者预后较差;过表达PTEN后RL95-2、Ishikawa和HEC-1B增殖能力明显降低,敲减ILK后RL95-2、Ishikawa和HEC-1B增殖能力均明显降低;ILK表达随着PTEN过表达而减少;而敲减ILK对PTEN表达无明显影响。结论PTEN通过调控ILK表达抑制子宫内膜癌细胞增殖和迁移作用。

膀胱尿路上皮癌中PTEN表达与其基因甲基化的关系

目的探讨膀胱尿路上皮癌(BUCC)中第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因(PTEN)表达与其基因启动子甲基化的关系。方法应用Western blot、甲基化特异性聚合酶链反应(MSP),检测41例BUCC和18例正常膀胱组织中PTEN蛋白的表达水平及其基因启动子甲基化状态,并分析两者的相关性。结果BUCC中PTEN蛋白表达低于正常膀胱组织(P<0.05),而BUCC中PTEN基因启动子甲基化率为53.66%(22/41),高于正常膀胱组织的0.00%(0/18)(P<0.05);与甲基化阴性组的BUCC组织相比,22例甲基化阳性组的PTEN表达水平降低(P<0.05)。结论 BUCC中PTEN蛋白的表达水平下调,这与其基因启动子高甲基化密切相关。

PTEN和Notch1在非小细胞肺癌组织中表达及临床意义

目的:探讨第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因(PTEN)和Notch受体1(Notch1)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达以及临床意义。方法:收集本院2016年1月至2017年12月收治的67例NSCLC患者癌组织标本,同期选取25例经组织病理学证实为正常肺组织标本为对照组。免疫组化法检测NSCLC组织中蛋白PTEN、Notch1的表达,分析二者与NSCLC患者临床资料间的关系。对NSCLC患者进行随访,随访时间36个月。Kendall's tau-b法分析NSCLC组织中PTEN、Notch1的相关性;Kaplan-Meier生存曲线分析PTEN、Notch1与NSCLC患者预后之间的关系;COX回归分析影响NSCLC患者预后的因素。结果:与正常肺组织比较,NSCLC组织中蛋白PTEN阳性表达显著降低,蛋白Notch1阳性表达率显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与未发生淋巴结转移和TNM I+II期的NSCLC患者比较,发生淋巴结转移和TNM III期的NSCLC患者PTEN阳性表达率显著降低,Notch1阳性表达率显著升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。NSCLC组织中蛋白PTEN、Notch1表达呈负相关(r=-0.356,P<0.05)。PTEN阳性表达组患者累积生存率(63.0%)高于阴性表达组(44.6%);Notch1阳性表达组患者累积生存率(43.1%)低于阴性表达组(63.0%)。多因素COX分析表明,TNM分期、Notch1阳性表达、PTEN阴性表达是影响NSCLC患者预后的危险因素(P<0.05)。结论:PTEN、Notch1在NSCLC组织和正常肺组织中的表达比较具有显著差异性,且与NSCLC患者淋巴结转移和TNM分期有关,可能是NSCLC发生发展中的重要因素。

HER2、STRT1及PTEN在膀胱尿路上皮细胞癌中的表达及对预后的影响

目的观察人表皮生长因子受体2(HER2)、沉默信息调节因子1(SIRT1)及人第10号染色体缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物基因(PTEN)在膀胱尿路上皮细胞癌中的表达及对预后的影响。方法选择2018年2月—2019年3月收治的124例膀胱尿路上皮细胞癌的癌组织标本设为研究组,并选取距癌组织3 cm处的正常组织作为对照组。比较两组HER2、SIRT1及PTEN表达情况,同时根据预后情况分组,分析影响膀胱尿路上皮细胞癌患者预后的危险因素。结果研究组HER2、SIRT1的阳性表达率高于对照组,PTEN阳性表达率低于对照组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,有家族史、WHO病理分级Ⅱ~Ⅲ级、UICC-TNM临床分期T_(2)~T_(4)期、HER2表达阳性、SIRT1表达阳性及PTEN表达阴性均为影响膀胱尿路上皮细胞癌患者预后的独立危险因素(P<0.05,P<0.01)。结论HER2、SIRT1在膀胱尿路上皮细胞癌组织中呈高表达,PTEN呈低表达,均为影响膀胱尿路上皮细胞癌患者预后的独立危险因素。

miR-383-3p靶向PTEN/PI3K/Akt/mTOR信号通路对冠心病大鼠内皮细胞凋亡的影响

目的:探究微小RNA-383-3p(miR-383-3p)靶向调节人第10号染色体缺失的磷酸酶/磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(PTEN/PI3K/AKT/mTOR)信号通路对冠心病(CHD)大鼠内皮细胞凋亡的影响。方法:将SD大鼠分为control组、CHD组、mimic NC组、miR-383-3p mimic组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1组、miR-383-3p mimic+pcDNA3.1-PTEN组,每组15只;除control组外其余组大鼠通过高脂饲料喂养及垂体后叶素注射构建CHD模型,造模前24h,将慢病毒液或质粒载体注射到相应组大鼠中;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测冠状动脉miR-383-3p表达;全自动生化分析仪测定大鼠血脂水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清内皮素-1(ET-1)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管内皮生长因子(VEGF)、一氧化氮(NO)水平;HE染色及TUNEL法观察冠状动脉组织病理变化及内皮细胞凋亡情况;双荧光素酶报告基因实验验证miR-383-3p与PTEN靶向关系;Western blot检测冠状动脉组织Bcl-2、Bax及PTEN/PI3K/Akt/mTOR通路蛋白表达。结果:与control组相比,CHD组大鼠miR-383-3p、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著减少,三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、总胆固醇(TC)、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞凋亡指数(AI)、Bax、PTEN表达显著升高(P<0.05);与CHD组相比,miR-383-3p mimic组miR-383-3p、HDL-C、VEGF、NO、Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR水平显著增加,TG、LDL-C、TC、ET-1、AngⅡ水平、冠状动脉组织病理损伤程度、内皮细胞AI、Bax、PTEN表达显著减少(P<0.05);过表达PTEN可逆转miR-383-3p高表达对CHD大鼠内皮细胞凋亡及功能损伤的改善作用;PTEN是miR-383-3p的靶向基因。结论:miR-383-3p可通过靶向抑制PTEN表达来激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,与抑制CHD大鼠内皮细胞凋亡密切相关。

环孢素A对兔晶状体上皮细胞增殖过程中磷酸肌醇-3激酶途径的影响

目的:研究环孢素A对白内障术后晶状体上皮细胞增殖过程中磷酸肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3 kinase,PI-3 k)途径的影响,为后发性白内障的治疗提供实验依据。方法:将健康白色家兔30只60眼,行双眼透明晶状体皮质吸除术,右眼为治疗组,左眼为对照组。术后第1d起,对照组眼用生理盐水点眼6次,而治疗组眼应用1%环孢素A(cyclosporine A,Cs A)眼药水点眼6次。分别在术后第1d未点药前、术后1wk,2wk,1mo和2mo各处死随机选择的6只兔,摘取双眼球。应用免疫组织化学、原位杂交方法检测赤道部晶状体上皮细胞中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及张力蛋白同源的28号染色体缺失磷酸酯酶mRNA(PTEN mRNA)和Ser473-R的表达。结果:术后两组PCNA和Ser473-R的表达均逐渐降低,其中1wk(0.690±0.035 vs 0.785±0.015,t=6.099,P<0.01)和2wk(0.571±0.038 vs 0.670±0.037,t=4.585,P<0.01)时治疗组PCNA表达均显著低于对照组。另外,1wk(0.374±0.031 vs 0.435±0.030,t=3.486,P=0.006)和2wk(0.220±0.022 vs 0.251±0.020,t=2.516,P=0.031)时治疗组Ser473-R的表达均显著低于对照组。术后1wk^1mo时,两组PTEN mRNA均逐渐回升。术后1wk,治疗组A值显著高于对照组(0.302±0.027 vs 0.255±0.038,t=2.474,P=0.033)。结论:环孢素A对兔眼白内障术后晶状体上皮细胞增殖过程中PI-3k途径有显著抑制作用,为研究CsA抑制后发性白内障提供实验依据。

强化阿托伐他汀对经皮冠状动脉介入治疗围术期淋巴细胞的磷酸酶基因表达的影响

目的：探讨强化剂量阿托伐他汀对不稳定性心绞痛患者经皮冠状动脉介入治疗（PCI）围术期CD4＋T淋巴细胞张力蛋白同源第10染色体丢失的磷酸酶基因（PTEN）表达的影响。方法：选取入住我院并行择期PCI的不稳定性心绞痛患者60例，根据给药时间和剂量，将患者随机分为强化阿托伐他汀组（强化组，n=30）：术前2天给药80mg／d的为术前强化者，术后给药40mg／d的为术后强化者，／1均=30；常规阿托伐他汀组（常规组，n=30）：术前、术后均给药20mg／d确定为术前常规者和术后常规者，／1均=30。分别于PCI术前、术后16～24小时抽取新鲜外周血，免疫磁珠法分选出CD4＋T淋巴细胞，实时荧光定量逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）检测PTEN信使核糖核酸（mRNA）表达，蛋白免疫印迹法检测PTEN蛋白表达，酶联免疫法检测肿瘤坏死因子-αTNF—α汲白细胞介素-10炎症相关因子的表达。结果：PCI术后强化者比术前强化者PTENmRNA、PTEN蛋白表达明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。术后常规者比术前常规者PTENmRNA、PTEN蛋白表达升高，但差异无统计学意义（P〉0．05）。强化组PCI术后比术前TNF—α浓度降低，白介素-10浓度升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）；而常规组PCI术后比术前TNF-α、白介素-10浓度差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论：强化剂量的阿托伐他汀可以通过上调CD4＋T淋巴细胞PTEN的表达，从而减少PCI术后心肌的炎症反应。

达格列净干预改善糖尿病肾病模型大鼠的肾脏损伤

背景:达格列净在糖尿病肾病引起的肾功能损伤中具有明显的肾脏保护作用。目的:探索达格列净是否可通过MicroRNA-126改善糖尿病肾病大鼠肾脏损伤的可能机制。方法:建立SD大鼠糖尿病肾病模型,将造模成功的糖尿病肾病大鼠随机分为模型组、二甲双胍组、达格列净组,每组6只,分别给予同等剂量生理盐水、二甲双胍500 mg/(kg·d)、达格列净10 mg/(kg·d)灌胃,1次/d;另取6只正常饮食大鼠作为正常组,12周后各组大鼠均麻醉处死。检测空腹血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿微量白蛋白水平,以实时荧光定量PCR检测大鼠肾脏MicroRNA-126水平,通过实时荧光定量PCR、Western blot及免疫组化检测大鼠肾脏转化生长因子β1、血管内皮生长因子受体2及磷酸酶和张力蛋白同系物水平;采用电镜、苏木精-伊红及Masson染色观察大鼠肾脏超微结构及形态病理学变化。结果与结论:①模型组空腹血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿微量白蛋白及转化生长因子β1、血管内皮生长因子受体2水平较正常组明显升高(P<0.05),MicroRNA-126及磷酸酶和张力蛋白同系物水平明显下降;二甲双胍组和达格列净组空腹血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿微量白蛋白及转化生长因子β1、血管内皮生长因子受体2水平较模型组明显降低(P<0.05),MicroRNA-126及磷酸酶和张力蛋白同系物水平明显升高;其中达格列净组的上述作用更加明显(P<0.05);②肾脏组织病理学显示,二甲双胍组和达格列净组大鼠肾脏病变程度较模型组减轻;与二甲双胍组相比,达格列净组大鼠肾脏足突排列良好,肾脏形态相对正常;③结果说明,达格列净可能通过上调糖尿病肾病大鼠肾脏MicroRNA-126水平,抑制转化生长因子β1及血管内皮生长因子受体2的表达,促进磷酸酶和张力蛋白同系物的表达,延缓糖尿病肾病大鼠的肾脏损伤过程。

66例乳腺癌的分子病理学研究

目的:研究人类乳腺癌组织中与张力蛋白同源第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)和过氧化物酶体增长因子活化受体γ(PPARγ)蛋白及其与相关分子病理学指标表达的关系和临床意义,为乳腺癌的分子病理分型提供基础研究依据。方法:随机选取我院临床证实66例乳腺癌患者的临床资料及病理切片,利用免疫组织化学链霉素抗生物素-过氧化物酶(SP)法检测乳腺癌组织中PTEN、PPARγ、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、Her-2蛋白的表达,分析乳腺癌组织中PTEN和PPARγ蛋白表达与患者淋巴结转移率及Her-2、ER、PR表达之间的关系。结果:乳腺癌组织中PTEN和PPARγ蛋白表达阳性率分别为68.2%、63.6%,PTEN阳性表达主要在细胞核内,占72.86%,胞浆占27.14%,PPARγ阳性表达在核膜占87.3%。相关分析表明PTEN与PPARγ、ER、PR、HER-2表达无显著相关(P均>0.05),PPARγ与ER、PR、HER-2表达无显著相关(P均>0.05)。PTEN阳性表达乳腺癌患者淋巴结转移率为48.97%,阴性表达淋巴结转移率为46.04%。PPARγ阳性表达乳腺癌患者淋巴结转移率为53.96%,阴性表达淋巴结转移率为43.64%。结论:PTEN、PPARγ可能作为独立的乳腺癌预后标记物,对乳腺癌生物治疗和临床预后提供依据。

circ_0003159对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及机制研究

目的探讨circ_0003159对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响及其作用机制。方法选取2015年6月至2018年12月嘉兴市第二医院肿瘤外科经手术切除的30例患者的胃癌组织和配对的癌旁组织。采用qRT-PCR法检测胃癌组织和癌旁组织中circ_0003159、miR-32-5p和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的表达水平;以及胃癌细胞株(BGC823、AGS、MKN45)和正常胃黏膜上皮细胞株GES-1中circ_0003159的表达水平。选取circ_0003159表达水平最低的胃癌BGC823细胞系,建立circ_0003159超表达模型,设立circ_0003159超表达组(转染circ_0003159模拟物)和阴性对照组(转染空载体阴性对照物)。采用CCK-8法和Transwell小室实验检测circ_0003159超表达对BGC823细胞增殖、侵袭和迁移的影响;生物信息学方法对circ_0003159或miR-32-5p进行靶基因预测,并通过双荧光素酶报告基因验证miR-32-5p与circ_0003159或PTEN的靶向关系;采用Western blot法检测过表达miR-32-5p对PTEN蛋白表达的影响。结果胃癌组织中circ_0003159和PTEN的相对表达水平均明显低于癌旁组织(均P<0.05),但胃癌组织中miR-32-5p的相对表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05)。胃癌细胞系BGC823、AGS、MKN45中circ_0003159的相对表达水平均明显低于正常胃黏膜上皮细胞GES-1(均P<0.05),且BGC823细胞中circ_0003159的相对表达水平最低。相比于阴性对照组,circ_0003159超表达组在48、72 h时OD450表达水平均明显下调(均P<0.05)。与阴性对照组比较,circ_0003159超表达组中细胞侵袭数和迁移数均明显减少(均P<0.05)。预测结果可知miR-32-5p为circ_0003159潜在的靶基因,PTEN是miR-32-5p潜在的靶基因。荧光素酶报告基因实验结果显示,与对照组比较,过表达miR-32-5p组中circ_0003159-MUT和PTEN-MUT相对活力值比较差异均无统计学意义(均P>0.05),而circ_0003159-WT和PTEN-WT相对活力值比较均明显下调(均P<0.05)。与对照组相比,过表达miR-32-5p组中PTEN蛋白相对表达水平明显下降(P<0.05)。结论circ_0003159超表达显著抑制了胃癌细胞增殖、侵袭和迁移能力,其机制可能是通过靶向下调miR-32-5p对PTEN的抑制作用。

多西他赛联合顺铂对中晚期非小细胞肺癌疗效分析

分析多西他赛合并顺铂治疗中晚期非小细胞肺癌的效果及对PTEN和Survivin水平的影响。选取本院2015年6月～2017年6月期间诊治的中晚期非小细胞肺癌患者临床资料。分析顺铂(对照组,n=100)和多西他赛合并顺铂(观察组,n=100)治疗中晚期非小细胞肺癌的效果,检测治疗前后患者血清中PTEN和Survivin及MMP2和MMP9的变化。结果显示:观察组研究对象的总有效率为80.0%,明显高于对照组64.0%(P<0.05);治疗后两组患者血清中PTEN水平明显升高(P<0.05),而Survivin、MMP2和MMP9水平明显降低(P<0.05),且观察组变化更显著(P<0.05)。因此,多西他赛联合顺铂有效治疗中晚期非小细胞肺癌可能与降低血清PTEN和Survivin及MMP2和MMP9蛋白水平有关。

塞莱昔布对舌鳞癌细胞Cal-27增殖的抑制作用

目的探讨塞莱昔布(celecoxib,CELE)对舌鳞癌细胞Cal-27增殖的抑制作用及其机制。方法CCK-8检测不同浓度(10、20、40、60、80、100μmol/L)CELE作用24 h、48 h后对舌鳞癌细胞Cal-27的细胞毒性,依据CELE的浓度,分为对照组(0μmol/L)与实验组(10、20、40μmol/L)。采用Transwell检测细胞侵袭性;荧光定量PCR(qPCR)检测c-Myc、细胞周期蛋白(Cyclin D1)的mRNA的表达水平;Western blot法检测经不同剂量(10、20、40μmol/L)CELE给药作用24 h后,以及经40μmol/L的CELE给药作用6、12、24 h后Cal-27细胞的蛋白酪氨酸磷酸酶(phosphate and tension homology deleted on chromsome ten,PTEN)、磷酸化蛋白激酶B(phos-pho-protein kinase B,p-AKT)(Thr308)、原癌基因蛋白c-Myc、G1/S-特异性周期蛋白-D1(Cyclin D1)等蛋白的表达。结果不同浓度的CELE对舌鳞癌细胞Cal-27的增殖均具有抑制作用,CELE浓度越高对Cal-27增殖的抑制作用越显著,40μmol/L CELE作用24、48 h后细胞存活率分别为80%、75%。4组侵袭细胞数比较,对照组>10μmol/L CELE组>20μmol/L CELE组>40μmol/L CELE组;不同浓度的CELE给药作用后,舌鳞癌细胞Cal-27中c-Myc、Cyclin D1 mRNA的表达水平显著降低,p-AKT(Thr308)、c-Myc、Cyclin D1等蛋白表达降低,PTEN蛋白表达升高。结论CELE对舌鳞癌细胞Cal-27增殖具有抑制作用,其作用机制可能是通过激活PTEN信号通路抑制c-Myc、Cyclin D1等增殖信号因子的表达。