栀子苷调节PI3K/AKT/mTOR信号通路在动脉粥样硬化形成过程中对Th17/Treg功能的影响

目的:观察栀子苷对载脂蛋白E缺乏(ApoE^(-/-))小鼠Th17/调节性T(Treg)细胞失衡的影响及其作用机制。方法:将50只纯合子ApoE^(-/-)雌性小鼠随机分为对照组、模型组和栀子苷低剂量组、栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组。对照组小鼠喂养普通饲料,模型组和栀子苷组小鼠喂养高脂饲料。从第8周开始,栀子苷各剂量组每日灌胃栀子苷(25、50、100 mg/kg),连续8周。试验结束时,采用油红O染色评估主动脉及其根部动脉粥样硬化(AS)病变面积比。采用定量逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)分析主动脉组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-17A和IL-10 mRNA表达;采用流式细胞仪分析脾脏中Th17和Treg细胞百分比;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测主动脉组织磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:油红O染色病变显示,栀子苷中剂量组、栀子苷高剂量组病变百分比低于模型组(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平升高(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉TNF-α、IL-6和IL-17A mRNA表达水平降低(P<0.05)。与对照组比较,模型组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平降低(P<0.05);栀子苷各剂量组主动脉抗炎细胞因子IL-10 mRNA表达水平升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组小鼠脾脏中Th17细胞百分比升高,Treg细胞百分比降低(P<0.05)。栀子苷处理恢复了AS小鼠Th17和Treg细胞的平衡。栀子苷抑制PI3K的表达及AKT和mTOR的磷酸化,MHY1485(mTOR活化剂)减弱了栀子苷对T细胞分化的影响。结论:栀子苷抗AS作用机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号引起的Treg细胞增多和Th17细胞减少有关。

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨和枢消积丸对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤生成的影响及作用机制

目的:通过体内实验研究和枢消积丸(Heshu Xiaoji prescription,HXP)对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤生成的影响以及对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的影响,探究其抑制肿瘤生长的作用机制。方法:制备H22肝癌荷瘤小鼠模型,随机分为空白对照组、模型组,和枢消积丸低、中、高剂量组(1.37、2.73、5.46g/kg),索拉非尼组(0.03g/kg),联合组(5.46g/kg和枢消积丸和0.03g/kg索拉非尼),每组5只,接种第6天开始给药,连续14d,记录小鼠体质量并观察一般情况;末次给药后次日处死小鼠,剥取肿瘤称质量,计算抑瘤率。苏木素-伊红(HE)染色检测观察肿瘤组织形态变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测肿瘤组织匀浆液IL-1β,TNF-α含量,免疫组化法以及Western-bloting法测定PI3K/AKT/mTOR信号通路中相关蛋白表达。结果:和枢消积丸能明显改善H22肝癌荷瘤小鼠的精神、活动状态,和枢消积丸低、中、高剂量组,索拉菲尼组,联合组的抑瘤率分别为23.9%、38.6%、64.5%、53.1%、76.6%(P<0.05);与模型组相比,各治疗组能明显降低肿瘤细胞密度,引起肿瘤细胞坏死;与模型组比较,各给药组肿瘤组织中IL-1β含量不同程度升高(P<0.05),与模型组比较,和枢消积丸高剂量组、索拉菲尼组以及联合组肿瘤组织中TNF-α含量不同程度升高(P<0.05);免疫组化结果显示,与模型组比较,联合组、和枢消积丸高剂量组PI3K,AKT,mTOR蛋白表达均明显下降;Western-bloting结果提示,与模型对照组相比较,各治疗组的P-PI3K、P-AKT、P-mTOR蛋白表达明显减少,和枢消积丸中、高剂量组、索拉菲尼组、联合组肿瘤组织的PPI3K/PI3K、P-AKT/AKT、P-mTOR/mTOR蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:和枢消积丸对H22肝癌荷瘤小鼠的肿瘤生成具有较为显著的抑制作用,其作用机制可能与下调PI3K/AKT/mTOR信号通路中关键蛋白表达有关。

木犀草苷由PI3K/Akt/mTOR信号通路所介导自噬对宫颈癌细胞生物学活性的调节作用

目的 探讨木犀草苷通过PI3K/Akt/mTOR信号通路介导的自噬调节宫颈癌细胞的生物学活性。方法 体外培养宫颈癌细胞,将宫颈癌Hela细胞分为对照组、木犀草苷低剂量组、木犀草苷高剂量组、木犀草苷高剂量+LY294002组和木犀草苷高剂量+3-MA组。CCK-8检测细胞活力;流式细胞术和Hoechst33342染色分别检测宫颈癌细胞凋亡率和细胞凋亡形态;透射电镜观察宫颈癌细胞中自噬小体;Western blot检测Hela细胞中自噬、凋亡和PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果 对照组Hela细胞间排列整齐规则,胞核大小均一,细胞中可见少量的自噬小体。与对照组相比,木犀草苷低、高剂量组Hela细胞活力、Bcl-2、p62、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、胞核固缩的Hela细胞数量,自噬小体数量、Bax和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显著升高(P<0.05);与木犀草苷高剂量组相比,木犀草苷高剂量+LY294002组Hela细胞活力、Bcl-2、p62蛋白表达、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低,细胞凋亡率、胞核固缩的Hela细胞数量、自噬小体数量,Bax和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达显著升高(P<0.05);木犀草苷高剂量+3-MA组细胞活力、凋亡率、固缩的Hela细胞数量、自噬小体数量、Bax、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、PI3K、p-Akt/Akt和p-mTOR/mTOR蛋白表达显著降低,Bcl-2、p62蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论 木犀草苷可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路来诱导宫颈癌细胞自噬和凋亡。

木犀草素对变应性鼻炎大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的探讨木犀草素(Lut)对变应性鼻炎(AR)大鼠磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法SPF级雄性大鼠,随机取12只SD大鼠作为对照组,其余大鼠通过腹腔注射卵白蛋白抗原佐剂混悬液及卵白蛋白溶液滴鼻构建AR模型。将造模成功的大鼠随机平分为AR组、Lut组(1 mg/kg Lut)、740 Y-P组(10 mg/kg 740 Y-P)、Lut+740 Y-P组(1 mg/kg Lut+10 mg/kg 740 Y-P),每组12只。观察大鼠打喷嚏、抓鼻子以及流鼻涕情况;酶联免疫吸附(ELISA)检测炎性因子水平;流式细胞术检测Th1/Th2水平;HE染色检测鼻粘膜组织病理变化;Western blot检测T-bet、GATA-3以及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果对照组大鼠鼻粘膜组织结构正常,与对照组相比,AR组鼻黏膜组织上皮紊乱、细胞剥落、固有层嗜酸性粒细胞浸润、腺体肿胀和黏膜下血管充血,行为学评分、IL-4、IL-13和OVA-sIgE水平、Th2水平、GATA-3、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、mTOR蛋白水平显著增加(P<0.05),INF-γ水平、Th1水平、T-bet蛋白水平显著降低(P<0.05);与AR组相比,Lut组大鼠嗜酸性粒细胞浸润减少,上皮排列有序,鼻粘膜细胞剥落减少,行为学评分、IL-4、IL-13和OVA-sIgE水平、Th2水平、GATA-3、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、mTOR蛋白水平显著降低(P<0.05),INF-γ水平、Th1水平、T-bet蛋白水平显著升高(P<0.05),而740 Y-P组结果与Lut组趋势相反(P<0.05);740 Y-P减弱了Lut对AR大鼠的治疗效果。结论Lut可能通过下调PI3K/Akt/mTOR信号通路对AR大鼠起到改善作用。

Regulatory Effects of Zuogui Pill on Apoptosis of Follicles in Rats Injured by 60Co-γRays Based on PI3K/Akt/m TOR Signaling Pathway

[Objectives]To explore the protective effects of Zuogui Pill on ^(60)Co-γ-ray-induced premature aging of rats based on phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin(PI3K/Akt/mTOR)signaling pathway.[Methods]Sixty sexually mature female SD rats were irradiated with ^(60)Co-γ-ray(6.0 Gy,LD 40)for 24 h at one time.These rats were randomly divided into model group,Progynova group[0.18(g·kg)/d],Progynova[0.09(g·kg)/d]+Zuogui Pill high dose[23.625(g·kg)/d)]group,Zuogui Pill high dose[23.625(g·kg)/d)]group,Zuogui Pill medium dose[9.45(g·kg)/d)]group and Zuogui Pill low dose[4.725(g·kg)/d]group.The administration(once a day)lasted 21 d.The rat serum[follicle-stimulating hormone(FSH),luteinizing hormone(LH)and estradiol(E_(2))]were detected by Enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).The morphological changes of ovary were observed by hematoxylin-eosin(HE)staining.The apoptosis rate of granulosa cells was detected by terminal deoxynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick-end labeling(TUNEL).The protein expression of phosphorylated(p)-PI3K,p-Akt,p-mTOR,B-cell lymphoma-2(Bcl-2),and Bcl-2-associated X protein(Bax)in ovarian tissues were detected by Western blot.[Results]Compared with the normal group,the model group showed significant increase in the serum FSH(P<0.01),significant decrease in serum E_(2)(P<0.05),and decrease in the number of early follicles and luteum in the ovary(P<0.01).Besides,the apoptosis rate of granulosa cells increased significantly(P<0.01);the expression of p-PI3K,p-Akt,p-mTOR and Bcl-2 in ovarian tissue decreased significantly,while the expression of Bax increased significantly(P<0.01).Compared with the model group,the number of early follicles in the ovary increased and the apoptosis rate of granulosa cells decreased after intervention in each administration group.In addition,the protein expressions of p-PI3K,p-Akt,p-mTOR and Bcl-2 increased,while the expression of Bax decreased,especially in Progynova+Zuogui Pill high dose group,the differences were statistically significant(P<0.05,P<0.01).[Conclusions]Zuogui Pill may protect the radiation-injured ovary through activating the expression of PI3K/Akt/mTOR protein in ovarian tissue,increasing the amount of Bcl-2 protein and inhibiting the expression of Bax protein.

槲皮素通过PI3K/AKT/mTOR通路减轻脓毒症小鼠心肌损伤

目的基于磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路探究槲皮素减轻脓毒症小鼠心肌损伤的分子机制,为槲皮素治疗脓毒症提供理论依据。方法采用盲肠结扎穿孔法构建脓毒症小鼠模型,将造模成功的小鼠随机分为模型组、槲皮素组(200 mg/kg)、抑制剂组(PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235 60 mg/kg)和槲皮素+抑制剂组(槲皮素200 mg/kg+PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235 60 mg/kg),每组15只,另取15只小鼠作为假手术组。假手术组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水,其余各组灌胃相对应药物,给药体积10 m L/kg。给药24 h后,超声检测平均动脉压(MAP)、左心室收缩压(LVSP)、左心室等容舒张期压力下降最大速率(-dp/dtmax)和左心室等容舒张期压力上升最大速率(+dp/dtmax);全自动生化分析仪检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)和心肌肌钙蛋白I(cTnI)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察心肌组织病理学变化;酶联免疫吸附(ELISA)法检测心肌组织白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测心肌组织PI3K、AKT和mTOR蛋白磷酸化水平。结果心肌组织病理损伤:模型组小鼠心肌组织出现结构紊乱、心肌细胞变性、心肌纤维断裂、心肌横纹模糊、细胞间质水肿等病理损伤;槲皮素组较模型组减轻,抑制剂组较模型组加重;槲皮素+抑制剂组较槲皮素组加重。MAP、LVSP、-dp/dtmax、+dp/dtmax、SOD含量及PI3K、AKT、mTOR蛋白磷酸化水平:模型组较假手术组降低;槲皮素组较模型组升高,抑制剂组较模型组降低;槲皮素+抑制剂组较槲皮素组降低,较抑制剂组升高,差异均有统计学意义(P <0.05)。CK-MB、cTnI水平及TNF-α、IL-6、MDA含量:模型组较假手术组升高;槲皮素组较模型组降低,抑制剂组较模型组升高;槲皮素+抑制剂组较槲皮素组升高,较抑制剂组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论槲皮素可能通过上调PI3K/AKT/mTOR通路降低脓毒症小鼠心肌组织炎症和氧化应激反应,从而减轻心肌损伤。

刺五加多糖调控PI3K/Akt/mTOR通路改善大鼠抑郁行为的作用

为研究刺五加多糖对抑郁行为的改善作用及机制,将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、盐酸氟西汀组(2.1 mg/kg)及刺五加多糖低、高剂量组(60、120 mg/kg),每组10只。采用单笼孤养及慢性轻度不可知应激刺激28 d建立抑郁模型,并从建模第1 d开始灌胃给药。通过敞箱实验、糖水偏好实验及强迫游泳实验评价抑郁行为,苏木精-伊红染色及尼氏染色检测海马组织病理,并比较各组白细胞介素1β(interleukin 1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、磷酸化磷脂酰肌醇激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3 kinases,p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)等指标变化情况。结果发现,与正常对照组比较,模型对照组大鼠的水平活动次数、糖水偏好度极显著降低(P<0.01),游泳不动时间极显著升高(P<0.01),且海马组织出现明显病理变化;与模型对照组比较,刺五加多糖低、高剂量组大鼠水平活动次数、糖水偏好度极显著增加(P<0.01),游泳不动时间显著降低(P<0.05、P<0.01),且海马组织结构病理变化得到缓解。同时,与正常对照组比较,模型对照组大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α及MDA水平极显著增加(P<0.01),CAT、SOD活性及p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达极显著降低(P<0.01);与模型对照组比较,刺五加多糖低、高剂量组大鼠IL-1β、IL-6、TNF-α及MDA水平显著降低(P<0.05、P<0.01),CAT、SOD活性及p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达显著增加(P<0.05、P<0.01)。上述结果表明,刺五加多糖具有改善抑郁模型大鼠抑郁行为作用,其机制与调控PI3K/Akt/mTOR通路及抗炎、抗氧化应激作用有关。

淫羊藿苷经PI3K/Akt/mTOR通路调控激素对骨微血内皮细胞自噬的影响

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)介导磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/m TOR)信号通路对激素性骨微血管内皮细胞(BMECs)自噬的影响。方法:从人工全髋关节置换术中获得的股骨头分离培养BMECs,并通过免疫荧光染色法鉴定细胞种类。实验细胞分为空白组、激素组(100 mg·L^(-1)氢化可的松)、ICA组(100 mg·L^(-1)氢化可的松+6.7×10^(-3)mg·L^(-1)ICA)及雷帕霉素组(100 mg·L^(-1)氢化可的松+6.7×10^(-3)mg·L^(-1)ICA+1 mg·L^(-1)雷帕霉素),使用100 mg·L^(-1)的氢化可的松诱导BMECs自噬,运用荧光染色观察不同时间节点下BMECs自噬出现的峰值,蛋白免疫印迹法(Western blot)分析各组自噬及PI3K/Akt/m TOR通路相关蛋白表达,以电镜观察各组细胞自噬小体及自噬溶酶体的产生。结果:100 mg·L^(-1)氢化可的松可诱导BMECs自噬并在5 h左右出现自噬峰值,但随着干预时间的进一步增加,自噬峰值下降。与空白组比较,激素组细胞膜破坏,细胞器排列紊乱,可见大量自噬小体及自噬溶酶体;与激素组比较,ICA组细胞膜较为完整,细胞器排列较为稀疏,自噬小体数量及自噬溶酶体数量低于激素组;与ICA组比较,雷帕霉素组细胞膜破坏,细胞器排列紊乱,有较多自噬小体及自噬溶酶体。与空白组比较,激素组自噬相关蛋白4B(Atg4B)、人微管相关蛋白/轻链3B(LC3B)、p62表达显著提高(P<0.01);与激素组比较,ICA组LC3B、Atg4B、p62、自噬效应蛋白-1(Beclin-1)表达显著下降(P<0.01);与ICA组比较,雷帕霉素组Atg4B、p62表达显著升高(P<0.01);与空白组比较,激素组磷酸化(p)-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR表达显著降低(P<0.01);与激素组比较,ICA组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR显著提高(P<0.01);与ICA组比较,雷帕霉素组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-m TOR/m TOR表达显著降低(P<0.01);与空白组比较,激素组泛素化水平显著降低(P<0.01);与激素组比较,ICA组泛素化表达显著提高(P<0.01);与ICA组比较,雷帕霉素组泛素化水平显著下降(P<0.01)。结论:激素所诱导的BMECs自噬具有时间依赖性,ICA对激素诱导的BMECs的自噬具有抑制作用,且该作用可能与调控PI3K/Akt/m TOR通路有关。

黄连碱对慢性萎缩性胃炎大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路探讨黄连碱对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠的治疗作用及其作用机制。方法:采用水杨酸钠、N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)及饥饱失常多因素诱导CAG大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组,叶酸组,黄连碱高、低剂量组,黄连碱高、低剂量组分别灌以黄连碱(50、10 mg·kg^(-1)),叶酸组灌以叶酸2 mg·kg^(-1),干预60 d。苏木素-伊红(HE)染色法检测病理学变化;电镜观察胃黏膜细胞超微结构;免疫比浊法检测大鼠血清胃蛋白酶原Ⅰ(PGⅠ)、胃蛋白酶原Ⅱ(PGⅡ)及计算PGⅠ/PGⅡ(PGR);放射免疫法检测大鼠血清胃泌素-17(G-17)水平;酶联免疫吸附测定法(ELSIA)检测大鼠血清中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胃黏膜转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))、PI3K、p-Akt、mTOR和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)蛋白表达含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)检测TGF-β_(1)、PI3K、Akt、mTOR、PTEN、微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3Ⅱ)和酵母Atg6同源物-1(Beclin-1)mRNA水平。结果:与正常组比较,模型组胃黏膜组织固有腺体萎缩,数量减少,炎性细胞浸润;模型组胃黏膜细胞超微结构细胞核固缩,线粒体数量少,肿胀,结构异常;模型组血清G-17、PGⅠ、PGR及胃组织PTEN蛋白及mRNA显著降低(P<0.01),血清IL-6、IL-1β、TNF-α及胃组织TGF-β_(1)、PI3K、Akt和mTOR蛋白及mRNA显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各药物组可以不同程度改善CAG大鼠病理损伤和胃黏膜细胞超微结构,明显升高血清G-17、PGⅠ、PGR表达水平(P<0.05,P<0.01),明显降低IL-6、IL-1β、TNF-α水平(P<0.05,P<0.01),黄连碱高剂量组可以明显下调TGF-β_(1)、PI3K、Akt和mTOR蛋白及mRNA(P<0.05,P<0.01)。结论:黄连碱对CAG大鼠有治疗作用,可能通过抑制炎症及阻断PI3K/Akt/mTOR信号通路来发挥保护胃黏膜的作用。

基于miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨肾衰泄浊汤干预慢性肾脏病合并动脉粥样硬化作用机制

目的:探讨微小核糖核酸126(miRNA126)调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在慢性肾脏病合并动脉粥样硬化(CKD AS)中的作用,以及肾衰泄浊汤干预5/6肾切除术联合高脂饲养的CKD AS大鼠的作用机制。方法:将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、氯沙坦组、肾衰泄浊汤低、中、高剂量组。通过5/6肾切除术联合高脂饲养10周建立大鼠CKD AS模型,肾衰泄浊汤低、中、高剂量组(6.0、12.0、24.0 g·kg^(-1)·d^(-1)),氯沙坦组(20 mg·kg^(-1)·d^(-1))剂量灌胃,进行相应的干预8周,然后处死大鼠,取材进行相应检测。全自动生化分析仪器检测大鼠肾功能和血脂:血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;苏木素-伊红(HE)、马松(Masson)染色主动脉组织并在光学显微镜下进行病理学观察;通过透射电子显微镜观察自噬体和自噬溶酶体;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠miRNA126、PI3K、Akt、mTOR mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠磷酸化(p)-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR、苄氯素-1(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3Ⅱ/Ⅰ(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN、TC、TG、LDL-C均显著升高(P<0.01);与模型组比较,氯沙坦组与肾衰泄浊汤低、中、高剂量组大鼠SCr、BUN、TC、TG、LDL-C明显降低(P<0.05);与假手术组比较,模型组大鼠内膜可见增厚斑块形成,单核巨噬细胞浸润,少量泡沫细胞,中膜平滑肌纤维排列紊乱,胶原纤维增多,氯沙坦组与肾衰泄浊汤各组较模型组病变减轻;与模型组比较,肾衰泄浊汤中、高剂量组中电镜的自噬小体及自噬溶酶体的数量增多;与假手术组比较,模型组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著下降(P<0.01),PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,肾衰泄浊汤高、中、低剂量组及氯沙坦组大鼠主动脉组织miRNA126表达显著升高(P<0.01),PI3K、Akt、mTOR mRNA表达显著降低(P<0.01)。与假手术组比较,模型组p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达显著升高(P<0.01),Beclin-1、LC3Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,氯沙坦组和肾衰泄浊汤低、中、高剂量组的p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达降低(P<0.05),Beclin-1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白水平升高(P<0.05)。结论:CKD AS大鼠主动脉组织miRNA126表达降低,激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制自噬通量;肾衰泄浊汤通过miRNA126调控PI3K/Akt/mTOR信号通路,恢复主动脉内皮细胞的自噬,保护CKD血管损伤,减少As斑块的形成,减缓心血管并发症的发展。

基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨蚕沙提取物对糖尿病胃轻瘫大鼠Cajal间质细胞的影响

目的:基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路探讨蚕沙提取物对糖尿病胃轻瘫(DGP)大鼠的治疗作用机制。方法:将105只大鼠随机选取15只作为空白组,制备DGP大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、蚕沙提取物高、中、低剂量组(3.2、1.6、0.8 g·kg^(-1))及莫沙必利组(1.5 mg·kg^(-1)),每组12只,灌胃4周。检测大鼠胃排空率、随机血糖,苏木素-伊红(HE)染色观察胃窦部形态变化,免疫组化分析c-Kit表达,原位末端标记法(TUNEL)染色观察Cajal间质细胞凋亡,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PI3K、磷酸化(p)-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR及p-mTOR的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组胃排空率显著降低(P<0.01),胃窦部腺体结构破坏,c-Kit表达显著减少(P<0.01),Cajal间质细胞(ICC)凋亡增加;与模型组比较,蚕沙提取物高、中、低剂量组及莫沙必利组胃排空率均显著升高(P<0.01),胃窦腺体结构逐渐紧密,ICC凋亡减少,其中蚕沙提取物高剂量组c-Kit表达明显升高(P<0.05)。经Western blot检测,与空白组比较,模型组p-Akt/Akt、p-PI3K/PI3K及p-mTOR/mTOR蛋白表达均升高(P<0.01);与模型组比较,蚕沙提取物高剂量组p-Akt/Akt蛋白表达降低(P<0.01),蚕沙提取物中、低剂量组及莫沙必利组p-PI3K/PI3K蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),蚕沙提取物低剂量组p-mTOR/mTOR蛋白表达降低(P<0.05)。在随机血糖方面,与空白组比较,模型组随机血糖显著升高(P<0.01);与模型组比较,蚕沙提取物高、中剂量组随机血糖明显降低(P<0.05);与莫沙必利组比较,蚕沙提取物高剂量组p-Akt/Akt蛋白表达降低(P<0.05),蚕沙提取物高、中、低剂量组p-PI3K/PI3K蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:蚕沙提取物可提高DGP大鼠胃排空率、减轻ICC的凋亡,同时降低随机血糖,其中蚕沙提取物高剂量组抑制ICC凋亡疗效显著,其作用机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

盐酸小檗胺通过调控自噬和PI3K/Akt/mTOR信号通路改善索拉非尼耐药的机制

目的:研究盐酸小檗胺改善肝癌细胞对索拉非尼耐药的作用及相关机制。方法:以1.25μmol·L^(-1)索拉非尼为起始浓度采用药物浓度递增法筛选索拉非尼耐药细胞株SMMC-7721/S,SMMC-7721和SMMC-7721/S分别设置0、2.5、5、10、15、20μmol·L^(-1)索拉菲尼给药组,采用细胞增殖与活性检测试剂盒(CCK-8)实验检测半抑制浓度(IC50)、计算耐药指数(RI);采用蛋白免疫印迹法(Western blot)比较SMMC-7721和SMMC-7721/S细胞自噬和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路相关蛋白表达差异。设置5μmol·L^(-1)盐酸小檗胺与2.5、5、10μmol·L^(-1)索拉非尼单独和联合组,进行CCK-8实验检测各组对肝癌细胞SMMC-7721/S细胞生长的影响;分别设置5μmol·L^(-1)小檗胺与5μmol·L^(-1)索拉非尼单独和联合组,进行平板克隆形成实验检测各组对SMMC-7721和SMMC-7721/S细胞增殖的影响;分别设置5μmol·L^(-1)盐酸小檗胺、0.1μmol·L^(-1)自噬抑制剂巴氟洛霉素(Baf)组,进行免疫荧光实验检测溶酶体酸化标志物微管相关蛋白1轻链3(LC3)及LysoTracker探针检测SMMC-7721细胞溶酶体酸化情况;设置盐酸小檗胺5μmol·L^(-1)、Baf 0.1μmol·L^(-1)设置0、2.5、5、10μmol·L^(-1)盐酸小檗胺组及0.1μmol·L^(-1)Baf组,进行Western blot实验比较各组对SMMC-7721细胞自噬和PI3K/Akt/mTOR信号通路相关蛋白表达的影响。结果:CCK-8实验表明索拉非尼对SMMC-7721/S细胞24 h的IC50为9.56 mol·L^(-1)(P<0.01),对SMMC-7721细胞24 h的IC50为7.99 mol·L^(-1),耐药指数RI为1.20(P<0.01),为轻度耐药;Western blot实验表明,对比SMMC-7721细胞,SMMC-7721/S细胞内磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3Ⅱ)表达增加,螯合体1(p62)蛋白表达显著减少(P<0.01),化蛋白激酶B(Akt)蛋白表达水平差异无统计学意义。CCK-8实验和平板克隆形成实验表明盐酸小檗胺与索拉非尼联合使用具有协同作用(Q>1.15),盐酸小檗胺能够改善肝癌细胞对索拉非尼的部分耐药性。免疫荧光检测LC3结果显示,盐酸小檗胺和自噬抑制剂Baf显著增加了SMMC-7721中自噬小体LC3的数量,LysoTracker探针检测结果显示,盐酸小檗胺显著抑制SMMC-7721细胞溶酶体酸性程度(P<0.01),表明细胞自噬水平被抑制。Western blot实验显示,在SMMC-7721细胞中,盐酸小檗胺能够进一步增强索拉非尼下调p-mTOR、p-Akt蛋白表达水平的作用,对Akt蛋白无明显改变;在SMMC-7721/S细胞中,盐酸小檗胺能够抑制索拉非尼诱导的p-mTOR蛋白表达相对于野生株的增加,共同降低p-Akt蛋白,对Akt总蛋白无明显影响。结论:盐酸小檗胺能够改善肝癌细胞对索拉非尼的耐药性,机制可能与其抑制细胞自噬和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。

温胆汤通过调控PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬对肥胖痰湿证炎症状态的影响

目的:观察温胆汤对肥胖痰湿证大鼠脂肪细胞炎症因子、自噬活性标志物及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路关键分子蛋白表达的影响,探讨肥胖痰湿证炎症状态形成的物质基础及温胆汤的干预机制。方法:将126只SD大鼠随机分成2组,即空白组16只和造模组110只,空白组喂养基础饲料,造模组喂养高脂饲料建立肥胖痰湿证动物模型,共8周。造模成功后,视体质量情况,按顺序淘汰体质量过轻者,遴选出48只肥胖大鼠,随机分为模型组、奥利司他组(32.40 mg·kg^(-1))、雷帕霉素组(2 mg·kg^(-1))、温胆汤低、中、高剂量组(4.45、8.90、17.80 g·kg^(-1)),每组8只;另在空白组大鼠中随机选取8只设为正常组,各用药组按剂量(以生药量计算)给予灌胃,模型和正常组给予等体积蒸馏水灌胃,每天1次,共6周。检测或计算大鼠体质量、Lee’s指数、脂体比和肥胖率,采用免疫组化二步法检测脂肪细胞自噬活性标志物动物自噬启动蛋白1(ULK1)、自噬效应蛋白1(Beclin1)、人自噬相关蛋白5(Atg5)、p62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅰ/Ⅱ表达水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测脂肪细胞炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、单核细胞趋化因子-1(MCP-1)、IL-4、IL-10、IL-13和转化生长因子(TGF)-β的表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测脂肪细胞PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子classⅠ-PI3K、磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)、Akt、mTORC1、ULK1、结节性硬化症(TSC)1、TSC2的表达。结果:与空白组比较,造模组体质量和Lee’s指数显著升高(P<0.01),肥胖率>20%,有形体肥胖、活动度下降,食欲下降,皮毛无光泽、蓬松,便溏,对外界反应能力下降,饮水量减少等痰湿证表现,与正常组比较,模型组体质量、Lee’s指数、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、促炎和抗炎细胞因子水平均明显升高(P<0.05,P<0.01),脂肪细胞classⅠ-PI3K、PIP3、Akt、mTORC1、TSC1、TSC2蛋白表达显著下降(P<0.01),但ULK1表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各用药组体质量、脂体比、脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1、IL-4、IL-13水平明显降低(P<0.05,P<0.01),且雷帕霉素组、温胆汤中、高剂量组IL-10、TGF-β水平显著降低(P<0.01),奥利司他组TGF-β的表达显著降低(P<0.01),信号通路关键分子蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),但ULK1显著降低(P<0.01)。与雷帕霉素组比较,温胆汤各剂量组脂肪细胞所有自噬活性标志物蛋白表达显著升高(P<0.01),温胆汤低剂量组炎性因子(除TNF-α外)含量明显升高(P<0.05,P<0.01),信号通路关键分子蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),温胆汤中剂量组炎性因子(除IL-16、MCP-1、IL-10外)含量明显升高(P<0.05,P<0.01),温胆汤中、高剂量组信号通路各关键分子蛋白除PI3K外表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。与奥利司他组比较,温胆汤低、中剂量组脂肪细胞自噬活性标志物蛋白表达显著升高(P<0.01),温胆汤低剂量组IL-6、IL-4、TGF-β含量显著升高(P<0.01),所有信号通路关键分子蛋白表达显著降低(P<0.01),温胆汤中剂量组IL-4含量显著升高(P<0.01),信号通路关键分子蛋白除PI3K外表达均明显降低(P<0.05,P<0.01),温胆汤高剂量组体质量、自噬活性标志物ULK1、LC3Ⅰ/Ⅱ蛋白表达水平明显升高(P<0.05,P<0.01),信号通路关键分子PIP3、mTORC1、TSC1蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),而自噬活性标志物Beclin1、Atg5蛋白、炎性因子TNF-α、IL-13含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:肥胖痰湿证炎症状态的形成与PI3K/Akt/mTOR通路介导的脂肪细胞自噬密切关联,且温胆汤可有效干预肥胖痰湿证大鼠的慢性炎症状态,其作用机制可能与调控该信号通路进而改善脂肪细胞自噬有关。

黄芪甲苷通过PI3K/Akt/mTOR通路诱导鼻咽癌细胞自噬和凋亡

目的:探讨黄芪甲苷对鼻咽癌细胞自噬与凋亡的影响及潜在分子机制。方法:在体外实验中,通过单丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透射电镜观察黄芪甲苷(AS-Ⅳ)对鼻咽癌细胞自噬的影响。在体内实验中,建立裸鼠移植瘤模型后采用免疫荧光法(IF)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组别中自噬和凋亡情况的变化及磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路关键蛋白的表达变化。结果:与空白组比较,不同浓度AS-Ⅳ(5、10、20μmol·L^(-1))作用于5-8F细胞后,各AS-Ⅳ组的自噬荧光强度均明显增强,其中,干预24 h,各AS-Ⅳ组的自噬荧光表达最强,10μmol·L^(-1)AS-Ⅳ组的荧光表达最明显;与空白组比较,透射电镜下自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)诱导5-8F细胞内出现较多自噬体;3-甲基腺嘌呤(3-MA)作为自噬抑制剂,透射电镜下并未观察到5-8F细胞内有自噬体的形成;AS-Ⅳ10μmol·L^(-1)组细胞内结构和细胞膜完整、清楚,可见自噬体形成;与空白组比较,AS-Ⅳ各组的肿瘤体积明显受到抑制(P<0.05,P<0.01),微管相关蛋白l轻链3Ⅱ/微管相关蛋白l轻链3Ⅰ(LC3Ⅱ/Ⅰ)和活化的胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)荧光信号明显增强(P<0.05,P<0.01),自噬相关蛋白酵母ATG6同源物(Beclin-1)、LC3Ⅱ/Ⅰ和凋亡相关蛋白cleaved Caspase-3、活化的多腺苷二磷酸多聚酶(cleaved PARP)的表达量均明显升高(P<0.05,P<0.01),而自噬相关蛋白泛素结合蛋白(p62)的表达明显下调(P<0.05,P<0.01);磷酸化(p)-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达量明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芪甲苷可诱导鼻咽癌细胞发生自噬和凋亡,其机制可能是通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路。

麻芍平喘汤通过PI3K/Akt/mTOR信号通路抑制气道上皮细胞自噬

目的:探讨麻芍平喘汤(MSPC)通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对脂多糖(LPS)诱导的人支气管气道上皮样细胞(16HBE)自噬的影响。方法:选用人支气管上皮细胞16HBE作为研究对象,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测LPS诱导的16HBE活性影响和麻芍平喘含药血清对16HBE细胞活性影响;以CCK-8法筛选出的适宜条件的LPS诱导16HBE细胞,并测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量鉴定模型成立,制备麻芍平喘汤含药血清作用于LPS诱导的16HBE,将细胞分为正常组、LPS组、LPS+MSPC组、LY294002+LPS组、LY294002+LPS+MSPC组。透射电镜观察细胞的自噬囊泡和超微结构的变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR及微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)的蛋白表达水平;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测5组炎症因子白细胞介素(IL)-5、IL-6、TNF-α、IL-10的表达水平。结果:LPS对16HBE细胞的抑制率呈剂量依赖性;与正常组比较,模型组作用24 h能显著升高促炎因子TNF-α表达(P<0.05);麻芍平喘汤含药血清对16HBE的促进作用呈浓度依赖性;与正常组比较,模型组自噬体形成增多,麻芍平喘汤可以一定程度抑制自噬,改善细胞状态;Western blot结果显示,与正常组比较,LPS组p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白的表达明显降低(P<0.05),LC3B蛋白的表达显著升高(P<0.01);与LPS组比较,含药血清组p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平明显升高(P<0.05),LC3B表达水平明显降低(P<0.05),与LPS+LY294002组比较,LY294002+LPS+MSCP组p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平明显升高(P<0.05),LC3B明显降低(P<0.05)。ELISA结果显示,与正常组比较,LPS组细胞炎症IL-5、IL-6、TNF-α、IL-10水平显著升高(P<0.01),用药处理后,与LPS组比较,TNF-α、IL-6、IL-8含量均显著下降(P<0.01),IL-10升高(P<0.01)。结论:麻芍平喘汤可能通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路减轻LPS诱导的人气道上皮细胞16HBE自噬的发生,改善炎症反应。

三七总皂苷调控PI3K/Akt/mTOR通路对乳腺增生大鼠乳腺组织细胞凋亡的影响

目的:探究三七总皂苷对乳腺增生大鼠乳腺组织细胞凋亡的影响及调控机制。方法:将60只雌性未孕SD大鼠随机分为正常组、模型组、三七总皂苷低、中、高剂量(10、20、40 mg·kg^(-1))组及三苯氧胺组(1.8 mg·kg^(-1)),每组10只。采用肌肉注射苯甲酸雌二醇和黄体酮构建乳腺增生大鼠模型。按照实验分组剂量进行灌胃给药。每日1次,连续30 d。正常组和模型组大鼠给予每日等量的生理盐水灌胃。给药结束后,游标卡尺测量大鼠第2对乳头直径;留取组织标本,苏木素-伊红(HE)染色观察乳腺组织病理形态变化;免疫组织化学法观察细胞凋亡调控蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠第2对乳头直径明显增大(P<0.05),乳房小叶体积增大,腺泡数量增加,乳腺组织呈现弥散性增生,乳腺组织Bcl-2蛋白表达及磷酸化(p)-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR明显增加(P<0.05),Bax表达明显降低(P<0.05),与模型组比较,三七总皂苷低、中、高剂量组和三苯氧胺组大鼠第2对乳头直径明显减小(P<0.05),乳腺小叶数量、腺泡数、分泌物量均较少,乳腺增生减轻,乳腺组织Bcl-2蛋白表达及p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR明显降低(P<0.05),Bax表达明显升高(P<0.05)。结论:三七总皂苷能够改善大鼠乳腺增生,其机制与调控PI3K/Akt/mTOR通路,促进乳腺组织细胞凋亡有关。

中药单体调控PI3K/Akt/mTOR信号通路治疗骨肉瘤的研究进展

骨肉瘤是临床上常见的一种原发性骨恶性肿瘤,具有肿瘤异质性高,预后差,易发生病变局部侵袭和远处转移及病死率高的特点。新辅助化疗联合保肢术为目前治疗骨肉瘤的主要治疗手段,虽然通过此种治疗方法有效地降低了骨肉瘤患者的致残率和致死率,但随着化疗技术的应用,长时间化疗药物的使用使得骨肉瘤细胞对其产生耐药作用,降低了肿瘤细胞对药物的敏感度,使得此治疗方式具有了一定的局限性。近年来,随着中医药抗肿瘤的发展和进步,中医药以其治疗效果明显,不良反应少等优势受到了广泛的关注。磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路作为经典的癌症信号通路,在骨肉瘤细胞中被异常激活,通过影响肿瘤细胞的周期、抑制肿瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞的自噬及促进肿瘤新生血管的生成,影响骨肉瘤细胞的增殖、侵袭和转移等活动。临床研究发现,中药单体可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的活性,对骨肉瘤细胞的增殖、凋亡、自噬及新生血管的生成等方面产生作用,发挥抑制骨肉瘤组织和细胞发展的作用,并且能高效的逆转肿瘤细胞对抗癌药物的多药耐药。该文将从中医对骨肉瘤的认识和经验积累,及中药单体调控PI3K/Akt/mTOR信号通路在治疗骨肉瘤疾病的研究进展作一综述,以期为中医药治疗骨肉瘤疾病的应用提供参考。

解毒活血方调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对ApoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠斑块稳定性的影响

目的:研究解毒活血方是否可通过调控磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路诱导巨噬细胞自噬抑制炎症反应稳定AS易损斑块。方法:30只高脂饲料喂养Apo E^(-/-)小鼠随机分为模型组、解毒活血方(中药)低、中、高剂量组、雷帕霉素组,6只普通饲料喂养的Apo E^(-/-)小鼠为正常组,6只普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠为空白组,造模7周后开始灌胃给药,中药组予解毒活血方溶液(5.35、10.7、21.4 g·kg^(-1)·d^(-1)),雷帕霉素组予自噬诱导剂雷帕霉素(2 mg·kg^(-1)·d^(-1)),连续给药4周,余各组予等容积生理盐水。检测血清血脂及炎症因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-6(IL-6)水平,苏木素-伊红(HE)染色观察主动脉根部血管壁病理变化,免疫组化法测定巨噬细胞/单核细胞单克隆抗体(MOMA-2)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平,透射电镜观测主动脉自噬体数量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测巨噬效应蛋白(Beclin-1)、自噬相关蛋白1轻链3(LC3)蛋白及PI3K、Akt、mTOR通路蛋白水平。结果:与正常组比较,模型组血清血脂和炎症因子MCP-1、IL-6水平升高(P<0.05),MOMA-2、α-SMA蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01),自噬蛋白Beclin-1表达增加(P<0.05),通路蛋白PI3K、Akt、mTOR表达减少(P<0.05,P<0.01);主动脉内壁可见明显粥样斑块,斑块内可见炎性细胞浸润,斑块附着处血管内膜明显增厚且结构紊乱;自噬体和线粒体数量更少,且线粒体结构不完整。与模型组比较,中药组及雷帕霉素组总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)水平和MCP-1、IL-6水平降低(P<0.05),高密度脂蛋白(HDL)水平升高(P<0.05),MOMA-2、α-SMA蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01),Beclin-1、LC3Ⅱ表达增加(P<0.05,P<0.01),PI3K、Akt、mTOR表达减少(P<0.05,P<0.01);主动脉内壁可见少量粥样斑块,炎性细胞浸润程度及血管壁厚度减轻;自噬体和自噬溶酶体数量增多。结论:解毒活血方改善AS小鼠脂质代谢,增强巨噬细胞自噬活性,减轻AS炎症反应,提高易损斑块稳定性,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路活化有关。

基于PI3K/Akt/mTOR通路探讨助卵汤对大鼠早发性卵巢功能不全的保护作用机制

目的:观察助卵汤对环磷酰胺诱导的早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢储备功能的影响,并基于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路探讨助卵汤对大鼠早发性卵巢功能不全的保护机制。方法:60只雌性SD大鼠随机分为正常组10只,模型组50只,模型组采用环磷酰胺(第1天50 mg·kg^(-1)负荷剂量+第2~15天8 mg·kg^(-1)小剂量维持)腹腔注射进行造模,造模成功后随机分为模型组、阳性药物补佳乐组(0.1 mg·kg^(-1)·d^(-1))、助卵汤低、中、高剂量组(14、28、56 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只,模型组与正常组予以等体积蒸馏水灌胃,每日1次,连续给药21 d。检测各组大鼠动情周期、体质量,计算卵巢脏器指数与子宫脏器指数,苏木素-伊红(HE)染色检测卵巢组织病理情况及卵巢切面各级卵泡计数,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清抗苗勒激素(AMH)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)、抑制素-B(INH-B)激素含量,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠卵巢组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达,免疫组化检测大鼠卵巢组织微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠动情周期紊乱,体质量及卵巢脏器指数与子宫脏器指数减少,原始卵泡数量减少,次级卵泡和闭锁卵泡数量增多,FSH升高(P<0.01),LH升高(P<0.05),AMH水平下降(P<0.05),卵巢组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达量均降低(P<0.01),LC3B蛋白表达量显著增加(P<0.01);与模型组比较,补佳乐和助卵汤各剂量组上述指标均改善,AMH含量升高(P<0.05),FSH降低(P<0.05),LC3B蛋白表达量显著降低(P<0.01),PI3K、Akt、mTOR蛋白表达量均有升高趋势,且补佳乐组和助卵汤低、中剂量组升高差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:助卵汤可能通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制卵巢颗粒细胞过度自噬的发生,从而逆转造模对大鼠卵巢储备功能的影响。

PI3K/Akt/mTOR信号通路抗非小细胞肺癌的机制及中药干预研究进展

非小细胞肺癌(NSCLC)是一种发病率较高的呼吸系统恶性肿瘤,早期症状不典型,多数患者确诊时已为晚期,严重威胁人民群众的生命健康。手术、化疗及靶向治疗是目前治疗的主要手段,但随之而来的耐药及不良反应,使得此治疗方式具有了一定的局限性。近年来,随着中医药抗肿瘤的发展和进步,中医药以其治疗效果明显,不良反应少等优势受到了广泛的关注。众多信号通路参与NSCLC的形成与发展,其中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路是关键的调控通路之一,PI3K/Akt/mTOR信号通路通过影响肿瘤细胞的周期、抑制肿瘤细胞的凋亡、抑制肿瘤细胞的自噬及促进肿瘤新生血管的生成,影响NSCLC细胞的增殖、侵袭和转移。通过检索近年的文献发现,中药可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路对NSCLC细胞的自噬、细胞周期、凋亡、侵袭和转移、新生血管的生成及逆转耐药等过程发挥着不可或缺的作用。尽管部分中药提取物或复方在NSCLC治疗方面的一些作用机制已取得较大突破,但这些研究也仅停留在体外细胞实验及动物体内研究层面,研究者们面临着“将中药研究成果转化于临床应用中”这一巨大挑战。基于国内外的研究现状,笔者归纳总结了近年来中药通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路干预NSCLC的研究进展,以期为NSCLC药物治疗研究开拓新的思路,同时也为后续更深入的机制研究提供有益参考。