秋水仙碱通过激动PI3K/AKT/eNOS信号通路对急性心肌梗死大鼠心功能的影响

目的:探究秋水仙碱通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影响。方法:78只大鼠中随机选取12只作为假手术组,剩余大鼠构建AMI模型,造模成功大鼠分为模型组、秋水仙碱组[4 mg/(kg·d)]、秋水仙碱[4 mg/(kg·d)]+LY294002(20 mg/mL)组、秋水仙碱[4 mg/(kg·d)]+MK-2206(60μg/mL)组、秋水仙碱[4 mg/(kg·d)]+L-NAME(1.6 mg/mL)组,每组12只。超声心动图检测大鼠左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、射血分数(EF)及短轴缩短率(FS)。处死大鼠,苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠心肌组织石蜡切片病理学变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡率;酶联免疫吸附实验(ELISA)测定大鼠血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及心肌组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)水平;免疫印迹法(Western Blot)测定大鼠心肌组织PI3K/AKT/eNOS通路蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠LVESD、LVEDD,血清CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心肌匀浆MDA、心肌细胞凋亡率升高,EF、FS水平,心肌匀浆SOD、CAT,心肌组织磷酸化PI3K(p-PI3K)/PI3K、磷酸化AKT(p-AKT)/AKT、磷酸化eNOS(p-eNOS)/eNOS降低(P<0.05);与模型组相比,秋水仙碱组大鼠LVESD、LVEDD,血清CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心肌匀浆MDA、心肌细胞凋亡率降低,EF、FS水平,心肌匀浆SOD、CAT,心肌组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS升高(P<0.05);与秋水仙碱组相比,秋水仙碱+LY294002组、秋水仙碱+MK-2206组、秋水仙碱+L-NAME组大鼠LVESD、LVEDD,血清CK-MB、TNF-α、IL-6水平,心肌匀浆MDA、心肌细胞凋亡率升高,EF、FS水平,心肌匀浆SOD、CAT,心肌组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、p-eNOS/eNOS降低(P<0.05)。结论:秋水仙碱可能通过激活PI3K/AKT/eNOS信号通路对AMI大鼠发挥心功能保护作用。

肾上腺髓质素对肾肿瘤细胞PI3K/Akt/eNOS/VEGF信号通路的作用

目的研究肾上腺髓质素(ADM)对肾肿瘤细胞磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(e NOS)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路的影响。方法将肾肿瘤细胞分为对照组、ADM组、VEGF组,ADM+VEGF受体抑制剂组,ADM+ADM shRNA组,每组设置24 h、48 h、72 h 3个时间梯度,western-blot检测对照组和ADM组细胞总蛋白中PI3K、Akt、e NOS、VEGF表达;检测VEGF组,ADM+VEGF受体抑制剂组和ADM+ADM shRNA组细胞总蛋白中PI3K、Akt、e NOS的表达。结果 PI3K、Akt、e NOS、VEGF在ADM组各时间梯度组肾肿瘤细胞中表达明显高于其在对照组细胞的表达(P<0.05)。PI3K、Akt、e NOS在VEGF组和ADM+VEGF受体抑制剂组各时间组肾肿瘤细胞中表达明显高于其在对照组细胞中表达(P<0.05)。PI3K、Akt、e NOS在ADM+ADM shRNA组各时间组肾肿瘤细胞中表达与其在对照组细胞中表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ADM可激活PI3K/Akt/e NOS/VEGF信号通路;VEGF受体抑制剂不能阻断ADM激活PI3K/Akt/e NOS信号通路。ADM一方面通过VEGF发挥肾肿瘤血管生成作用,另一方面通过其受体激活PI3K/Akt/e NOS信号通路参与肾肿瘤血管生成作用。ADM可能成为抗血管治疗肾肿瘤新的靶点。

化瘀通便汤对慢传输型便秘大鼠PI3K/Akt/eNOS信号通路及血管活性肽的影响

目的:研究化瘀通便汤对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)信号通路及血管活性肽(VIP)的影响,探讨该方药对慢传输型便秘大鼠的治疗机制。方法:90只大鼠随机抽取15只为正常组,其余75只按复方地芬诺酯灌胃造模法制造慢传输型便秘模型,根据简单随机抽样方法分为5组(模型组、化瘀通便汤低剂量组、化瘀通便汤中剂量组、化瘀通便汤高剂量组、麻仁软胶囊组),每组15只。化瘀通便汤低、中、高剂量组分别予化瘀通便汤24 g/(kg·d)、48 g/(kg·d)、96 g/(kg·d)灌胃。麻仁软胶囊组用常温蒸馏水调配麻仁软胶囊至2.4 g/mL,灌胃量为20 mL/(kg·d)。模型组与正常组均与等量常温蒸馏水进行灌胃,日1次。各组干预2周后,检测大鼠首次排黑便时间、粪便含水率及结肠组织磷酸化蛋白激酶B(P-Akt)阳性细胞、VIP、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)水平。结果:与模型组比较,化瘀通便汤各组及麻仁软胶囊组均能缩短大鼠首次排黑便时间,增加大鼠粪便含水率,提高大鼠结肠组织P-Akt含量、P-Akt阳性细胞水平,降低VIP的表达,降低结肠组织中NO及eNOS的含量(P<0.05);与麻仁软胶囊组比较,化瘀通便汤低剂量组与麻仁软胶囊组相近(P>0.05),化瘀通便汤中、高剂量组明显优于麻仁软胶囊组(P<0.05)。结论:化瘀通便汤可通过调控PI3K/Akt/eNOS信号通路及VIP表达,对慢传输型便秘大鼠起治疗作用。

瑞芬太尼通过激活PI3K/Akt/eNOS通路减轻肾缺血/再灌注损伤

目的探讨术中应用瑞芬太尼对肾缺血/再灌注损伤的作用及机制。方法取雄性C57/BL小鼠50只,随机分为5组:假手术组、缺血/再灌注损伤组(I/R组)、缺血/再灌注损伤+磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂LY294002处理组(I/R+LY294002组)、缺血/再灌注损伤+瑞芬太尼处理组(I/R+RF组)、缺血/再灌注损伤+LY294002处理+瑞芬太尼处理组(I/R+RF+LY294002组),每组10只。各组大鼠分别于手术结束6 h后取静脉血或肾脏组织,采用全自动生化分析仪测定静脉血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)水平,采用蛋白质印迹法检测肾脏组织PI3K/蛋白激酶B(Akt)/内皮型一氧化氮合酶(eNOS)通路相关蛋白的表达,H-E染色观察肾脏组织炎症细胞聚集情况,酶联免疫吸附试验测定肾脏组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10等炎性因子的表达,实时定量PCR测定肾脏组织中抗凋亡因子Bcl2和凋亡因子半胱氨酸蛋白酶3(Caspase-3)的mRNA表达。结果与假手术组相比,I/R组小鼠静脉血BUN、SCr水平均升高,肾脏组织中PI3K表达及磷酸化Akt(p-Akt)/Akt、磷酸化eNOS(p-eNOS)/eNOS均降低,炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10释放均增加,Bcl2 mRNA表达下降而Caspase-3 mRNA表达增高,差异均有统计学意义(P均<0.05),并且肾脏组织中炎症细胞聚集增多。给予瑞芬太尼处理后,I/R+RF组BUN、SCr水平较I/R组降低,肾脏组织中PI3K表达及p-Akt/Akt、p-eNOS/eNOS均增高,TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10释放均减少,Bcl2 mRNA表达上调、Caspase-3 mRNA表达下调,与I/R组相比差异均有统计学意义(P均<0.05),炎症细胞募集也减轻。而使用PI3K抑制剂LY294002处理后,I/R+RF+LY294002组BUN、SCr水平升高,肾脏组织中p-eNOS/eNOS降低,IL-1β、L-6释放增加,Caspase-3 mRNA表达上调,与I/R+RF组相比差异均有统计学意义(P均<0.05),炎症细胞募集也增加。结论肾缺血/再灌注损伤时,瑞芬太尼通过激活PI3K/Akt/eNOS通路减轻肾脏组织炎症反应和细胞凋亡发挥肾脏保护作用。

PI3K-Akt-eNOS信号通路在间歇性低氧减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用

目的探讨间隙性低氧环境下,磷酯酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶信号通路(PI3K-Akte NOS)在大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用机制。方法 64只大鼠随机分为4组,假手术组(n=16)、缺血/再灌注组(n=16)、缺血/再灌注组-间歇性低氧组(n=16)、间歇性低氧-缺血/再灌注-磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂组(n=16)。采用球囊结扎冠状动脉方法制作心肌缺血再灌注动物模型,将老鼠暴露在低氧循环制作间隙性低氧动物模型,实验处理结束后,通过TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,Western-Blot方法检测磷酸化AKT蛋白(p-Akt)、磷酸化e NOS(p-e NOS)蛋白表达。结果与缺血/再灌注组比较,间歇性低氧+缺血/再灌注组心肌细胞凋亡指数为(21.73±4.56)%,心肌细胞凋亡指数减少,磷酸化AKt蛋白及磷酸化e NOS蛋白分别为(1.228±0.269)、(1.427±0.375),表达均升高,各组差异均有统计学意义(P<0.05);与间歇性低氧+缺血/再灌注组比较,间歇性低氧-缺血/再灌注组大鼠+磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂组大鼠心肌为(30.84±3.65),凋亡指数升高,磷酸化AKt蛋白及磷酸化e NOS蛋白分别为(0.624±0.146)、(0.842±0.246),表达均降低,各组差异均有统计学意义(P<0.05)。结论在间歇性低氧状态下,PI3K-Akt-e NOS信号通路可以减少心肌细胞凋亡,在心肌缺血/再灌注损伤中具有保护机制。

有氧运动联合抗阻力运动对糖尿病大鼠血管内皮功能的作用及其对磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶通路的影响

目的探讨有氧运动联合抗阻力运动对糖尿病大鼠血管内皮功能及对磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/一氧化氮合酶(PI3K/Akt/eNOS)通路的影响。方法将SD大鼠随机分为对照组(NC)、糖尿病模型组(DM)、单纯有氧运动训练组(AE)、单纯抗阻力运动训练组(RE)及有氧运动+抗阻力运动训练组(ARE),检测各组内皮功能指标、PI3K/Akt/eNOS通路基因及蛋白表达情况。结果乙酰胆碱(Ach)浓度在3×10^(-5) mol/L时,ARE组舒张率高于AE组和RE组(P<0.05)。ARE组VEGF、一氧化氮(NO)表达量高于DM组[(21.45±3.48)vs(8.23±1.14)pg/ml,(25.67±3.19)vs(8.89±1.56)μmol/L,P<0.05]。ARE组PI3K、Akt及eNOS基因相对表达量高于DM组[(4.08±0.83)vs(0.27±0.11),(2.75±0.69)vs(0.26±0.09),(4.25±0.74)vs(0.59±0.19),P<0.05]。ARE组PI3K、磷酸化Akt(p-Akt)及磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白相对表达量高于DM组[(0.78±0.21)vs(0.20±0.09),(1.21±0.38)vs(0.54±0.19),(0.59±0.23)vs(0.16±0.08),P<0.05]。结论有氧运动联合抗阻力运动能改善糖尿病大鼠血管舒张功能,促进VEGF、NO的释放,作用与激活PI3K/Akt/eNOS信号通路有关。

基于mRNA测序筛选先天性膈疝大鼠模型肺PI3K/AKT/eNOS/VEGF的基因表达差异

目的研究除草醚诱导的先天性膈疝大鼠模型的肺组织中磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/内皮型一氧化氮合酶/血管内皮生长因子(PI3K/AKT/eNOS/VEGF)基因表达情况。方法制作先天性膈疝大鼠模型,将10只SPF级雌性SD大鼠在怀孕9.5 d时通过随机数字表法分组,分为对照组5只及膈疝组5只,于孕21.5 d时解剖出胎鼠肺组织,通过HE染色检测胎鼠肺组织发育情况;α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)免疫荧光技术检测肺小动脉肌化程度;对照组与膈疝组各取3份胎鼠左肺组织样本行mRNA测序,进行差异表达基因分析,并对差异表达基因行KEGG功能富集分析;采用qRT-PCR技术检测两组胎鼠肺组织PI3K/AKT/eNOS/VEGF mRNA表达水平;采用酶联免疫吸附试验及一氧化氮(NO)试剂盒分别检测eNOS和NO生成量。结果本研究中,对照组获取78只活胎,膈疝组获取64只活胎,膈疝组中37只胎鼠形成膈疝,膈疝率57.8%(37/64);HE染色后膈疝组相较于对照组存在明显肺发育不全及血管重构;免疫荧光显示膈疝组α-SMA表达增高(P<0.01),提示膈疝组胎鼠肺血管中膜厚度增厚且血管肌化水平增加。mRNA测序结果膈疝组与对照组相比,差异基因有4871个,其中下调基因有3741个,上调基因有1130个。这些差异基因主要富集于PI3K/AKT信号通路、MAPK信号通路、Rap1信号通路、cAMP信号通路、催产素信号通路、Apelin信号通路、松弛素(Relaxin)信号通路、环磷酸鸟苷(cGMP-PKG)信号通路等。qRT-PCR显示,膈疝组与对照组相比PI3K/AKT/eNOS/VEGF均下调(P<0.05)。测定eNOS膈疝组浓度(8.720±0.729)ng/ml相比于对照组浓度(11.084±0.605)ng/ml降低;膈疝组NO浓度(2.811±0.213)μmol/gprot相比于对照组浓度(4.598±0.588)μmol/gprot降低,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论除草醚诱导的先天性膈疝大鼠模型肺组织中,PI3K/AKT/eNOS/VEGF基因表达下调以及NO生成减少,肺血管重塑及新生血管减少可能与之相关。

N-乙酰半胱氨酸对COPD肺动脉高压大鼠肺组织PI3K-Akt-eNOS-NO信号通路的影响

【目的】探讨N-乙酰半胱氨酸对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)肺动脉高压大鼠肺组织PI3K-Akt-eNOS-NO信号通路的影响。【方法】以烟熏、低氧、气道内滴注脂多糖法制备COPD肺动脉高压大鼠模型,随机分为模型组、N-乙酰半胱氨酸低剂量(50 mg/kg)组、N-乙酰半胱氨酸中剂量(100 mg/kg)组、N-乙酰半胱氨酸高剂量(200 mg/kg)组、波生坦(100 mg/kg)组,每组12只,另取12只设为对照组,检测各组大鼠肺平均动脉压;HE染色检测各组大鼠肺组织病理形态变化;酶联免疫吸附实验试剂盒检测各组大鼠血清中肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、NO水平;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠肺组织PI3K/Akt/eNOS通路相关蛋白表达。【结果】与对照组比较,模型组大鼠肺小动脉呈现管壁增生且明显增厚,管腔变窄甚至闭塞等病理损伤,肺平均动脉压、大鼠血清中TNF-α及IL-6水平升高(P<0.05),大鼠血清中eNOS及NO水平、大鼠肺组织磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinases,p-PI3K)/磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinases,PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)/蛋白激酶B(protein kinase B,PKB/Akt)及p-eNOS/eNOS降低(P<0.05);与模型组比较,N-乙酰半胱氨酸低、中、高剂量组及波生坦组大鼠肺小动脉病理损伤减轻,肺平均动脉压、大鼠血清中TNF-α及IL-6水平降低(P<0.05),大鼠血清中eNOS及NO水平、大鼠肺组织p-PI3K/PI3K、p-AKT/Akt及peNOS/eNOS升高且N-乙酰半胱氨酸各组呈剂量依赖性(P<0.05);N-乙酰半胱氨酸高剂量组与波生坦组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】N-乙酰半胱氨酸可改善COPD肺动脉高压大鼠临床症状,可能是通过激活PI3K-Akt-eNOS-NO通路实现的。

罗格列酮对高胰岛素培养的内皮细胞一氧化氮的影响及其机制研究

目的观察罗格列酮(RGZ)对高胰岛素培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)NO浓度和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、磷酯酰肌醇3激酶(PI3K)和蛋白激酶B(PKB)表达的影响,探讨RGZ改善高胰岛素状态下内皮功能障碍的信号转导机制。方法高浓度胰岛素培养HUVEC 72h,并用不同浓度的RGZ进行干预。检测NO浓度,PI3K mRNA的表达,PKB、eNOS总蛋白和PKB丝氨酸473(PKB-Ser473)、eNOS丝氨酸1177(eNOS-Ser1177)的磷酸化表达。结果高浓度胰岛素培养HUVEC能呈剂量和时间依赖性地降低NO的浓度,抑制内皮细胞PI3K mRNA表达和PKB-Ser473、eNOS-Ser1177的磷酸化。用RGZ干预能显著升高高胰岛素培养的内皮细胞NO的浓度和PKB、eNOS的磷酸化,增强PI3K mRNA表达;eNOS和PI3K阻断剂均能阻断RGZ对高胰岛素培养的内皮细胞中NO浓度的升高,PI3K阻断剂还能阻断RGZ对高胰岛素培养内皮细胞PKB、eNOS的磷酸化。结论高胰岛素能下调PI3K/PKB/eNOS信号通路而抑制内皮细胞NO的产生,RGZ能通过上调PI3K/PKB通路而增强高胰岛素培养的内皮细胞eNOS的活性和NO的产生。

多巴胺D4受体对糖尿病血管内皮损伤的保护作用

目的研究多巴胺D_4受体对高糖诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用及相关机制。方法构建链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型,Western blot法检测内皮组织D_4受体表达的变化。以体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为靶细胞,测定在高糖(33 mmol/L)刺激下细胞的活力,同时检测D_4受体表达变化;用高糖刺激HUVEC后,在D_4受体激动剂PD168077(10-7 mol/L)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002(5×10^(-5 )mol/L)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯(l-NAME)(10-4 mol/L)分别作用的情况下,检测HUVEC细胞活力水平的变化,并检测细胞中蛋白激酶B(Akt)和eNOS的磷酸化水平以及总的Akt和eNOS表达水平。结果 D_4受体在糖尿病大鼠胸主动脉内皮组织和HUVEC的表达下降(均P<0.05)。高糖条件下,HUVEC的细胞活力下降(P<0.05);与高糖组比较,加入PD168077后HUVEC的细胞活力增加(P<0.05)。在LY294002和l-NAME的作用下,HUVEC的细胞活力下降(P<0.05);同时,p-Akt[高糖+LY294002+PD168077组(0.59±0.09),高糖+l-NAME+PD168077组(0.62±0.07),高糖+PD168077组(1.44±0.07),P<0.05]和p-eNOS[高糖+LY294002+PD168077组(0.62±0.05),高糖+l-NAME+PD168077组(0.66±0.08),高糖+PD168077组(1.44±0.08),P<0.05]的蛋白表达水平也降低。结论多巴胺D_4受体可以改善高糖诱导的HUVEC的损伤,该作用可能与PI3K/Akt/eNOS信号通路相关。

邢氏夏枯草汤对慢性间歇性低氧高血压大鼠血管内皮损伤的保护作用及其机制

目的:采用慢性间歇性低氧(CIH)方法,探讨邢氏夏枯草汤对高血压大鼠血管内皮损伤的保护作用及其机制。方法:50只SD大鼠,分为正常对照组、模型对照组、夏枯草汤4.1、8.2 g/kg组、卡托普利0.11 g/kg组。从造模第一天开始给药干预,连续给药21 d。在造模及给药第21 d下午17 h,测定各组大鼠尾动脉血压。试验结束后,取胸主动脉,进行离体血管环试验;应用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血浆内皮素-1(ET-1)含量,硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(NO)含量;苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉组织病理形态改变;蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测主动脉组织磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)以及ET-1蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组大鼠尾动脉收缩压和血浆ET-1含量显著升高(P<0.01),血清NO含量显著降低(P<0.01),离体主动脉血管环对ACh诱导的内皮依赖性舒张反应显著降低(P<0.01);HE染色显示主动脉内膜不光滑,细胞核小深染,萎缩;主动脉组织PI3K、AKT以及ET-1蛋白表达显著上调,eNOS蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组比较,夏枯草汤4.1、8.2 g/kg组可显著降低尾动脉收缩压和血浆ET-1含量(P<0.01),明显升高血清NO含量(P<0.05或P<0.01),离体主动脉血管环被ACh刺激后舒张反应明显升高(P<0.05或P<0.01);HE染色显示主动脉内膜表面较光滑,细胞核基本正常;主动脉组织PI3K、AKT以及ET-1蛋白表达显著下调,eNOS蛋白表达上调(P<0.01)。结论:邢氏夏枯草汤可有效降低CIH诱发的大鼠高血压,保护血管内皮损伤,其作用机制可能与调控PI3K/AKT/eNOS信号通路,调节ET-1/NO分泌有关。

奈比洛尔对血管内皮细胞胰岛素抵抗的影响

目的观察奈比洛尔改善人主动脉内皮细胞(HAEC)胰岛素抵抗(IR)的作用及机制。方法HAEC分为空白组(正常培养,胰岛素不刺激),对照组(正常培养,胰岛素刺激),不同浓度奈比洛尔+对照组(对照组基础上加奈比洛尔0.1,1,10μmol·L^(-1)),IR组(高糖33.3 mmol·L^(-1)+胰岛素1×10^(-7) mol·L^(-1)),不同浓度奈比洛尔+IR组(IR基础上加奈比洛尔0.1,1,10μmol·L^(-1))。48 h后,细胞无血清饥饿处理12 h。以噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,以葡萄糖氧化酶法测HAEC葡萄糖消耗量,以硝基还原酶法检测上清液一氧化氮(NO)水平,以蛋白质印迹法测定蛋白表达。结果与对照组(100%)比较,IR组细胞活性无显著性改变(95.13±2.10)%,且不同浓度奈比洛尔(0.1、1、10μmol·L^(-1))预处理对IR组和对照组细胞活性均无显著性影响。IR组的细胞葡萄糖消耗量和上清液NO水平分别为(0.53±0.17)mmol·L^(-1),(33.11±1.35)μmol·L^(-1),对照组分别为(1.14±0.24)mmol·L^(-1),(38.50±3.43)μmol·L^(-1);1μmol·L^(-1)奈比洛尔+IR组分别为(0.94±0.15)mmol·L^(-1),(39.15±1.44)μmol·L^(-1),10μmol·L^(-1)奈比洛尔+IR组分别为(0.89±0.19)mmol·L^(-1),(37.31±1.90)μmol·L^(-1),对照组与IR组比较,差异有统计学意义(P<0.05);1,10μmol·L^(-1)奈比洛尔+IR组与IR组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。蛋白质印迹显示IR组细胞胰岛素受体底物-1(IRS-1),磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K),蛋白激酶B(Akt),磷酸化Akt(p-Akt),内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达均较对照组降低,p-IRS-1蛋白表达升高(P<0.05);1μmol·L^(-1)奈比洛尔+IR组以上蛋白表达与IR组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论奈比洛尔调节IRS-1/PI3K/Akt/eNOS改善血管内皮细胞IR。