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Molecular cloning and characterization of a lipid transfer protein gene(PsLTP1) from Pinus sylvestris(L.)
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作者 Nataliya Hrunyk Valentina Kovaleva +5 位作者 Hryhoriy Krynytskyy Ivan Gout Francisco Amil-Ruiz Juan Munoz-Blanco Jose Luis Caballero Roman Gout 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 2019年第3期1149-1158,共10页
Plant nonspecific lipid transfer proteins (nsLTPs) are widely distributed through plant kingdom and are characterized by the presence of a central hydrophobic cavity, suitable for binding various hydrophobic molecules... Plant nonspecific lipid transfer proteins (nsLTPs) are widely distributed through plant kingdom and are characterized by the presence of a central hydrophobic cavity, suitable for binding various hydrophobic molecules. Despite extensive research on nsLTP in different plant species, mostly angiosperm, and the great diversity of physiological processes in which they seem to be involved, their exact functions still remain unclear. Also, very limited experimental data are available on nsLTP in gymnosperm. In this study, we report for the first time on the molecular cloning of nsLTP, from Pinus sylvestris L.(PsLTP1, GenBank accession JN980402.1) and the expression pattern of PsLTP1 during ontogenesis and in response to environmental stress conditions. Total RNA from roots of 7-day old pine seedlings was used to isolate the cDNA clone, corresponding to Scots pine lipid transfer protein. The open reading frame of PsLTP1 consists of 372 bp encoding a protein of 123 amino acids. Amino acid sequence alignment revealed that mature PsLTP1 shares high level of similarity with nsLTP from other conifers and with well-studied nsLTPs from angiosperms. The PsLTP1 contains a 27-amino-acid N-terminal signal sequence and presents all the features of a plant nsLTP. Amino acid comparison analysis and 3D structure prediction showed that PsLTP1 is a type 1 nsLTP. The results of the expression analysis of Scots pine PsLTP1 gene revealed that its transcripts accumulate in actively growing tissues. Furthermore, transcription of PsLTP1 was upregulated in response to cold and salt treatments, and downregulated during acidic, osmotic and water stresses. 展开更多
关键词 SCOTS PINE NONSPECIFIC lipid transfer protein (nsLTP) molecular cloning Expression ABIOTIC stresses
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亚洲牛带绦虫磷脂酰肌醇转移蛋白α基因的克隆表达和免疫学分析
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作者 吴璇 黄江 +5 位作者 胡凤玉 赵俊红 胡旭初 徐劲 余新炳 包怀恩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1022-1024,1028,共4页
目的原核克隆表达亚洲牛带绦虫成虫磷脂酰肌醇转移蛋白α基因(Ta PITPα),探索其应用前景。方法将亚洲牛带绦虫成虫PITPα克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰... 目的原核克隆表达亚洲牛带绦虫成虫磷脂酰肌醇转移蛋白α基因(Ta PITPα),探索其应用前景。方法将亚洲牛带绦虫成虫PITPα克隆到原核表达质粒pET-28a(+)中,在大肠埃希菌BL-21/DE3中用IPTG诱导表达,表达产物通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,用镍离子金属螯合剂亲和层析柱进行纯化,纯化的重组蛋白用蛋白印迹(Western Blotting)进行免疫学分析。结果PCR、双酶切及DNA测序结果均表明pET-28a(+)-Ta PITPα重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明目的基因在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得高效表达,经亲和层析获得了高纯度蛋白。重组蛋白可被其免疫的SD大鼠血清和感染了亚洲牛带绦虫的猪血清识别,表明其具有免疫活性。结论亚洲牛带绦虫成虫磷脂酰肌醇转移蛋白α基因可在大肠埃希菌BL-21/DE3中获得具有免疫活性的高效表达,为进一步的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 亚洲带绦虫 磷脂酰肌醇转移蛋白α 基因克隆 原核表达
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慢性髓系白血病bcrabl融合基因在真核细胞中的表达
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作者 刘楠 孙秉中 +3 位作者 冯琦 高杰英 彭虹 罗振 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期426-428,共3页
克隆慢性髓系白血病 (CML)融合基因bcr abl融合位点周围的cDNA序列 ,构建重组真核表达载体并表达于 p815细胞 ,探索bcr abl基因免疫治疗CML的可行性。设计两条引物扩增bcr abl融合位点周围 46 8bp的cDNA ,测序正确后 ,将其克隆至真核表... 克隆慢性髓系白血病 (CML)融合基因bcr abl融合位点周围的cDNA序列 ,构建重组真核表达载体并表达于 p815细胞 ,探索bcr abl基因免疫治疗CML的可行性。设计两条引物扩增bcr abl融合位点周围 46 8bp的cDNA ,测序正确后 ,将其克隆至真核表达载体pcDNA 3.1,通过电穿孔法转染至 p815细胞中 ,应用G418筛选阳性细胞克隆 ,在含 10 %FCS的RPMI16 40中常规培养 ,收集细胞进行RT PCR鉴定。结果PCR扩增出了可用于基因免疫的位于bcr abl融合基因位点周围的 46 8bp的cDNA ,序列测定除第 44 8位碱基C突变为T外其余序列均正确 ;构建了重组真核表达载体 ,并用电穿孔法将其转染 p815细胞 ,RT PCR法检测到该细胞系有bcr 展开更多
关键词 克隆 融合蛋白质类 BCR-ABL融合基因 慢性髓系白血病 真核细胞 肿瘤转移
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与低温相关的甜菜磷脂酰肌醇转运蛋白基因的克隆及表达分析
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作者 杨巧 邹锋康 +4 位作者 赵春雷 王希 李彦丽 陈丽 丁广洲 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期625-638,共14页
真核细胞内膜系统间存在的磷脂酰肌醇转运蛋白PITP(phosphatidylinositol transfer proteins,PITP),能提高植物对逆境胁迫的耐受程度。本研究从甜菜(Beta vulgaris)基因组中分析获得甜菜PITP基因28个,通过低温胁迫,以RT-qPCR筛选出4个... 真核细胞内膜系统间存在的磷脂酰肌醇转运蛋白PITP(phosphatidylinositol transfer proteins,PITP),能提高植物对逆境胁迫的耐受程度。本研究从甜菜(Beta vulgaris)基因组中分析获得甜菜PITP基因28个,通过低温胁迫,以RT-qPCR筛选出4个与低温胁迫相关最为显著的PITP基因,将其从甜菜中克隆出来,分别命名为Bvsec14、Bvsfh8、Bvsfh11和Bvpate4.2,基因长度分别为776、1401、1519、1604 bp,均具有PITP基因家族所特有的SEC14保守结构域,分别定位在5号、9号、1号和8号染色体上。生物信息学分析结果显示,亚细胞定位预测表明其在细胞膜或细胞质上;4个基因编码蛋白都以无规则卷曲和α-螺旋为主,存在很多的磷酸化位点,以丝氨酸磷酸化数量最多;根据与其他物种的PITP的高度保守的SEC14区域比对,建立的4个基因的进化树表明,其与藜麦(Chenopodium quinoa)的亲缘关系最近;将拟南芥(Arabidopsis thaliana)中PITP蛋白与甜菜中与低温胁迫相关的PITP蛋白进行同源性分析,共分为4个亚组;4个基因编码蛋白之间没有直接互作关系且氨基酸序列间差异较大。以低温胁迫和RT-qPCR进行表达分析,结果表明,4个基因在表达量上无组织特异性,Bvsfh11、Bvsfh8、Bvpate4.2和Bvsec14受低温胁迫后的24 h之内都会出现过量表达,峰值出现在2 h和12 h,且峰值的表达量最低为对照组初始量的1.8倍,最高为25倍。上述结果表明,4个基因参与甜菜低温胁迫应答。本研究为研发新的甜菜抗性品种以及进一步探究PITP功能提供科学理论依据。 展开更多
关键词 甜菜 磷脂酰肌醇转运蛋白 基因克隆 表达分析 低温胁迫
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