番茄植酸酶分离提纯及其特性研究

运用硫铵沉淀、阴离子交换柱层析、凝胶过滤、ＦＰＬＣ和活性电泳等技术，从缺磷条件下生长的番茄根抽提物中分离提纯了植酸酶．该酶是分子量约为８２ｋＤ的亚基组成的二聚体，等电点５．５，最适ｐＨ为４．３，对植酸钠具有很高亲和力（Ｋｍ＝３８μｍｏｌ／Ｌ）．番茄植酸酶活性受无机磷酸、钼和氟化物强烈抑制．氨基酸组成分析表明，该酶谷氨酸、天冬氨酸和甘氨酸含量较高．

植酸酶基因表达与调控机制研究(Ⅱ)──番茄幼苗cDNA文库构建与植酸酶基因筛选

采用异硫氰酸胍法从发芽３～４ｄ的番茄幼苗中提取出总ＲＮＡ，用Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）纤维素亲和层析分离纯化ｍＲＮＡ．以ｍＲＮＡ为模板，Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）为引物用逆转录法合成双链ｃＤＮＡ．将ｃＤＮＡ与ＥｃｏＲＩ接头连接后克隆到表达载体λｇｔ１１的单一ＥｃｏＲＩ位点，经体外包装后感染宿主菌Ｙ１０９０，成功地构建了完整的番茄幼苗ｃＤＮＡ文库．用颜色筛选法筛选重组子，然后用植酸酶抗体做探针进行免疫筛选，得到两个阳性克隆．挑取阳性克隆噬菌斑扩增后纯化ＤＮＡ，经琼脂糖凝胶电泳鉴定，显示确有外源ＤＮＡ存在．该插入片断序列测定正在进行．

番茄种子萌发初期产生的中性植酸酶的动力学特性研究

番茄种子萌发初期长根前产生的中性植酸酶的最适 pH在 7.2附近 ,在 55℃以内 ,酶活性随温度升高而增大 .其Km 是 10 4 μmol/L ,Vmax是 3.4 5nmol/ (min·L) .一价的Na和K离子对酶活性无影响 .二价的Ca、Mg、Cu和Zn离子有抑制酶活性作用 .酶保存在pH5.

番茄中植酸酶的诱导变化

测定了番茄果实不同生长阶段中植酸酶同磷酸根的关系,进行了酸性植酸酶的抗原 抗体反应,研究表明番茄果实中存在着植酸酶,植酸酶的活性同磷酸根的浓度成反比,当磷酸根的浓度大于0.26mmol/L时,植酸酶被完全抑制.通过使用适当的叶肥诱导剂,可以解除磷酸根对植酸酶的抑制作用,使植酸酶在番茄果实中得到表达.