大肠杆菌植酸酶AppA在毕赤酵母中的高效表达

本研究全基因合成大肠杆菌B48来源的植酸酶App A基因,并将它克隆到PHKA载体上,在毕赤酵母GS115中进行分泌表达。为了进一步提高毕赤酵母中植酸酶的表达量,本研究结合信号肽、启动子、基因剂量和蛋白质折叠通量优化的方法,最终将毕赤酵母中植酸酶的活力从329.41 U/m L提高到了1892.51 U/m L,是初始菌株的5.75倍。初步测定了植酸酶App A的基本酶学性质,其最适温度和p H分别为60℃和4.5;在60℃处理60 min后,植酸酶活力剩余40%,温度稳定性较差;在pH 6.0~7.0处理6 h后,酶活力剩余87%,该酶在弱酸环境中有较好的稳定性;同时研究了二价金属离子对植酸酶活力的影响,Fe^2+能够激活植酸酶App A的活力,而Cu^2+、Ni^2+、Mn^2+等离子通过与植酸形成络合物而抑制植酸酶App A的活力。该酶在酸性条件下的强稳定性有利于将其应用于食品加工领域。